禽4型腺病毒（FAdV-4）载体系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供一种重组禽腺病毒FAdV‑4载体系统，包括骨架质粒pKFAV4、中间质粒pKFAV4AP和穿梭质粒pKFAV4APNM。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，NheI酶切携带目的基因表达框的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用AvrII或PacI酶切携带目的基因的中间质粒，借助连接反应或DNA组装反应将所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PmeI线性化腺病毒质粒转染LMH细胞，能够制备由人巨细胞启动子(CMVp)控制目的基因表达的重组FAdV‑4腺病毒。在制备的重组腺病毒中，FAdV‑4基因组Orf1‑Orf2区域由目的基因表达框替代，腺病毒的其他区域保留。预计其在鸟类口服疫苗研发中具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
禽4型腺病毒(FAdV-4)载体系统及其应用
本专利技术属于重组疫苗领域，具体而言，涉及一种重组禽腺病毒FAdV-4载体系统及其应用。
技术介绍
腺病毒科(Adenoviridae)分为5个属(genus)，其中哺乳动物腺病毒属感染哺乳动物，而鸟类腺病毒属(Aviadenovirus)感染鸟类[1]。鸟类腺病毒基因组长43.7-45.7kb，是除白鲟腺病毒(whitesturgeonadenovirus)外最长的腺病毒基因组；其五邻体含有2根纤毛(fiber)，由单个基因或2个基因编码(1个基因编码1根)。鸟类腺病毒包括禽腺病毒，禽腺病毒分类为A、B、C、D、E共5个种。禽腺病毒4型(fowladenovirus4，FAdV-4)属于FAdV-C，是鸡包涵体肝炎-心包积水症(hepatitis-hydropericardiumsyndrome,HHS)的病原。该病的致死率30％-70％，对肉鸡养殖危害严重。对其疫苗的研发是目前的研究热点[2,3]。FAdV-1,9和10致病性弱，研究得较多，已被改造为基因转移载体[4,5]。目前未见基于FAdV-4基因转移载体的研究报道。对FAdV-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组禽腺病毒FAdV‑4载体系统，其包括骨架质粒、中间质粒和穿梭质粒，其中所述骨架质粒命名为pKFAV4，所述中间质粒命名为pKFAV4AP，并且所述穿梭质粒命名为pKFAV4APNM。

【技术特征摘要】
1.一种重组禽腺病毒FAdV-4载体系统，其包括骨架质粒、中间质粒和穿梭质粒，其中所述骨架质粒命名为pKFAV4，所述中间质粒命名为pKFAV4AP，并且所述穿梭质粒命名为pKFAV4APNM。2.根据权利要求1所述的重组禽腺病毒FAdV-4载体系统，其特征在于：所述骨架质粒pKFAV4含有FAdV-4完整基因组；同时还含有在原核细胞中进行质粒复制所需的pBR322的复制起点、卡那霉素抗性基因。3.根据权利要求1所述的重组禽腺病毒FAdV-4载体系统，其特征在于：所述中间质粒pKFAV4AP包含FAdV-4基因组2个AvrII位点外侧的序列；FAdV-4基因组2个AvrII位点内侧各约25bp的序列；以及在原核细胞中进行质粒复制所需的pBR322的复制起点、卡那霉素抗性基因。4.根据权利要求1所述的重组禽腺病毒FAdV-4载体系统，其特征在于：所述穿梭质粒pKFAV4APNM包含中间质粒pKFAV4AP两个NheI位点之间的片段，该片段含有的Orf1-Orf2编码区由人巨细胞病毒启动子、多克隆位点和SV40polyA加尾信号替代。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁茁壮，邹小辉，洪涛，朱亚露，赵阳，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：北京,11