一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统技术方案

本发明专利技术属于基因工程技术领域，公开了一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，设置有底台，所述底台上表面安装有：细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室；所述底台的前端通过螺母固定有控制面板，所述底台的一侧通过螺母与定轴固定有提手。本发明专利技术能够在较短的时间内得到基因敲除载体，为工作人员分析山羊Mvostation基因敲除载体提供了较大的帮助；同时，本发明专利技术能够简单、快速、成本低、精确的检测其单核苷酸的多态性；通过基因优化模块可以提升基因转录表达水平，提供优良的基因。

A goat Mvostaion gene knockout vector construction system

The invention belongs to the field of genetic engineering technology, and discloses a construction system of goat Mvostain gene knockout vector, which is provided with a platform. The upper surface of the platform is provided with a cell lysis chamber, a carrier separation chamber, a column-passing purification chamber and a carrier elution chamber; the front end of the platform is fixed with a control panel through a nut, and the bottom is arranged. One side of the platform is fixed with a handle by a nut and a fixed shaft. The invention can obtain gene knockout vectors in a short time, and provides great help for staff to analyze goat Mvostation gene knockout vectors; at the same time, the invention can detect the single nucleotide polymorphism of goat Mvostation gene simply, quickly, cheaply and accurately; and the gene transcription expression can be enhanced by gene optimization module. Level, providing excellent genes.

【技术实现步骤摘要】
一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统。
技术介绍
基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物技术，基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组，指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，基因敲除克服了随时整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造遗传物质的方法。传统的基因敲除载体构建利用传统的细胞裂解法获取，经过载体的分离、纯化、RNA的去除、沉淀等步骤，需要消耗三个小时左右，浪费了科研工作者的较多时间。综上所述，现有技术存在的问题是：构建载体的步骤较为繁琐，浪费了较多的时间；同时，现有对山羊基因多态性检测速度慢、成本高、准确性差；以及现有山羊基因转录表达水平低，导致优良基因少。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统。本专利技术是这样实现的，一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统设置有：控制面板、底台；所述底台安装于整个系统的最下方，所述细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室卡接在底台的上表面，所述四个功能室的前端开有菌体入口，所述细胞裂解室分为上下两部分，上部分安装有37℃水浴盒；下方安装有-20℃液氨盒，所述载体分离室内部卡接有台式高速离心机，所述过柱纯化室内部安装有纯化柱，所述载体洗脱室内部安装有载体提取洗脱液盒；所述控制面板上设置有基因检测模块、基因优化模块；基因检测模块，用于检测山羊基因单核苷酸的多态性；基因优化模块，用于优化山羊的基因转录表达。进一步，所述提手通过螺母与定轴固定在底台的一侧。进一步，所述四个功能室前端的入口处通过螺母固定有拉手。进一步，所述基因检测模块检测方法如下：a)鉴定各个山羊多聚腺苷酸化基序序列及其在所述编码序列内的位置；b)通过密码子取代优化所述编码序列，从而获得编码所述非植物蛋白的优化的编码序列；c)将公开于表1中的至少一个多聚腺苷酸化基序序列引入所述优化的基因序列，从而获得修饰的编码序列，所述修饰的编码序列包含至少一个山羊多聚腺苷酸化基序，以及所述修饰的编码序列编码所述非植物蛋白。进一步，所述步骤c)中引入所述优化的序列内的各个多聚腺苷酸化基序是步骤a)中鉴定的山羊多聚腺苷酸化基序，并且被引入和其在编码序列内的位置相对应的核酸位置。进一步，所述步骤a)中鉴定的山羊多聚腺苷酸化基序在步骤c)中被引入与其在编码序列内的位置相同的核酸位置，从而获得修饰的编码序列，所述修饰的编码序列包含与山羊编码序列相同的多聚腺苷酸化基序的组合。进一步，所述步骤a)中鉴定的山羊多聚腺苷酸化基序在步骤c)中被引入与其在编码序列内的位置相同的核酸位置，从而获得修饰的编码序列，所述修饰的编码序列包含存在于山羊序列中的一个、两个或三个多聚腺苷酸化基序的组合。进一步，所述基因优化模块优化方法如下：首先，以待测山羊全基因组DNA为模板；然后，通过PCR扩增山羊ATBF1基因，用限制性内切酶MspI酶切扩增产物，对酶切后的扩增产物片段进行琼脂糖凝胶电泳；最后，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定山羊ATBF1基因第25748位的单核苷酸多态性；以待测山羊全基因组DNA为模板，通过PCR扩增山羊ATBF1基因，用限制性内切酶HpaII酶切扩增产物，然后对酶切后的扩增产物片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定山羊ATBF1基因第163517位的单核苷酸多态性；鉴定山羊ATBF1基因第25748位的单核苷酸多态性时，所述PCR的扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性0.5min；55℃复性0.5min；72℃延伸0.5min；35个循环之后，72℃延伸10min。鉴定山羊ATBF1基因第163517位的单核苷酸多态性时，所述PCR的扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性0.5min；55.9℃复性0.5min；72℃延伸1.5min；35个循环之后，72℃延伸10min；鉴定山羊ATBF1基因第25748位的单核苷酸多态性时，所述琼脂糖凝胶电泳采用质量浓度3.5％的琼脂糖凝胶；鉴定山羊ATBF1基因第163517位的单核苷酸多态性时，所述琼脂糖凝胶电泳采用质量浓度1.5％的琼脂糖凝胶。进一步，控制面板还包括有温度控制模块，所述温度控制模块采用基于自寻优的PID参数自整定算法，采用增量式PID，为实现高精度控制增加了以下改进：首先，为减少因采样与微分引起的高频干扰，在此算法中引入了数字滤波，从而使调节精度更高，数字滤波有不同的方法，本算法采取的是一阶递推滤波；一阶递推滤波法就是一种以数字形式实现RC低通滤波器的动态滤波方法，对一个RC低通滤波器，其传递函数为：L(s)＝1/(τs+1)其中τ＝RC为滤波器时间常数，将该式离散化可得：e′k＝αe′k-1+(1-α)ek(1)式中：α＝τ/(τ+T)；T为采样周期；ek为第k次采样时滤波器的输入；e′k为第k次采样时滤波器的输出；e′k－1为第k－1次采样时滤波器的输出；采用方程(1)对偏差信号ek进行修正，然后将修正后的偏差值e′k作为第k次采样时刻的偏差信号，代入PID算式进行计算，便减少了高频干扰对数字PID控制算式的影响；其次，为减少由于积分作用引起的超调，提高稳态精度，本算法采用了积分分离PID算法；为减少因人工输入及外界冲击干扰引起的振荡，本算法加入了限幅处理，即当|e|>ε,则ΔU＝λ，λ为允许的最大波动值；控制系统设置了一个位置控制的门限值△e，计算机对数据处理后得到的误差e进行判断，具体如下：若ε≥|e|>△e，实行PD控制，改善控制的动态特性，当|e|<△e时，实行PID控制，保证控制精度，当|e|>ε时，ΔU＝λ(常量)。进一步，台式高速离心机的驱动电机采用无刷直流电动机，无刷直流电动机采用最优状态反馈策略，应用于无刷直流电动机调速系统，以获得较好的调速性能。无刷直流电动机工作在两相导通星形三相6状态方式下，无中线引出，反电动势波形为平顶宽度为120°电角度的梯形波，电机在工作过程中磁路不饱和，不计涡流和磁滞损耗，三相绕组完全对称，则三相绕组的电压平衡方程为式中：ua、ub、uc是定子相绕组电压，V；ia、ib、ic是定子相绕组电流，A；ea、eb、ec是定子相绕组反电动势，V；r是定子相绕组的电阻，Ω；L是每相绕组的自感，H；M是每两相绕组间互感，H；D是微分算子(D＝d/dt)；由于三相绕组为星形连接且没有中线，则有：ia+ib+ic＝0(2)联立式(1)、(2)，可将式(1)化简为电磁转矩方程为式中：Te为电磁转矩，N·m；ω为电动机转子机械角速度，rad/s；机械运动方程为式中：TL为负载转矩，N·m；J为电机转动惯量，kg·m2；理想换相情况，每一时刻只有两相导通，电流从一相流入，从另一相流出，则由式(3)可得：u＝2ri+2(L-M)di/dt+2ep(6)式中：u为导通两相的支路电压，V；i为导通两相的支路电流，A；ep为导通相的相反电动势，V；由式(4)可得：Te＝2epi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，其特征在于，所述山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统设置有：控制面板、底台；所述底台安装于构建系统的最下方，细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室卡接在底台的上表面，细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室的前端开有菌体入口，所述细胞裂解室分为上下两部分，上部分安装有37℃水浴盒；下方安装有‑20℃液氨盒，所述载体分离室内部卡接有台式高速离心机，所述过柱纯化室内部安装有纯化柱，所述载体洗脱室内部安装有载体提取洗脱液盒；所述控制面板上设置有基因检测模块、基因优化模块；基因检测模块，用于检测山羊基因单核苷酸的多态性；基因优化模块，用于优化山羊的基因转录表达。

【技术特征摘要】
1.一种山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，其特征在于，所述山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统设置有：控制面板、底台；所述底台安装于构建系统的最下方，细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室卡接在底台的上表面，细胞裂解室、载体分离室、过柱纯化室、载体洗脱室的前端开有菌体入口，所述细胞裂解室分为上下两部分，上部分安装有37℃水浴盒；下方安装有-20℃液氨盒，所述载体分离室内部卡接有台式高速离心机，所述过柱纯化室内部安装有纯化柱，所述载体洗脱室内部安装有载体提取洗脱液盒；所述控制面板上设置有基因检测模块、基因优化模块；基因检测模块，用于检测山羊基因单核苷酸的多态性；基因优化模块，用于优化山羊的基因转录表达。2.如权利要求1所述的山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，其特征在于，所述提手通过螺母与定轴固定在底台的一侧；所述四个功能室前端的入口处通过螺母固定有拉手。3.如权利要求1所述的山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，其特征在于，所述基因检测模块检测方法如下：a)鉴定各个山羊多聚腺苷酸化基序序列及其在所述编码序列内的位置；b)通过密码子取代优化所述编码序列，获得编码所述非植物蛋白的优化的编码序列；c)将公开于表1中的至少一个多聚腺苷酸化基序序列引入所述优化的基因序列，从而获得修饰的编码序列，所述修饰的编码序列包含至少一个山羊多聚腺苷酸化基序，以及所述修饰的编码序列编码所述非植物蛋白；所述步骤a)中鉴定的山羊多聚腺苷酸化基序在步骤c)中被引入与其在编码序列内的位置相同的核酸位置，获得修饰的编码序列，所述修饰的编码序列包含与山羊编码序列相同的多聚腺苷酸化基序的组合；所述步骤c)中引入所述优化的序列内的各个多聚腺苷酸化基序是步骤a)中鉴定的山羊多聚腺苷酸化基序，并且被引入和其在编码序列内的位置相对应的核酸位置。4.如权利要求1所述的山羊Mvostaion基因敲除载体的构建系统，其特征在于，所述基因优化模块优化方法如下：首先，以待测山羊全基因组DNA为模板；然后，通过PCR扩增山羊ATBF1基因，用限制性内切酶MspI酶切扩增产物，对酶切后的扩增产物片段进行琼脂糖凝胶电泳；最后，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定山羊ATBF1基因第25748位的单核苷酸多态性；以待测山羊全基因组DNA为模板，通过PCR扩增山羊ATBF1基因，用限制性内切酶HpaII酶切扩增产物，然后对酶切后的扩增产物片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定山羊ATBF1基因第163517位的单核苷酸多态性；鉴定山羊ATBF1基因第25748位的单核苷酸多态性时，所述PCR的扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性0.5min；55℃复性0.5min；72℃延伸0.5min；35个循环之后，72℃延伸10min；鉴定山羊ATBF1基因第163517位的单核苷酸多态性时，所述PCR的扩增反应程序为：94℃预变性5min；94...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，李文雍，吴晓庆，谢娟，叶世超，凌英会，章孝荣，
申请(专利权)人：阜阳师范学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34