用于治疗囊性纤维化的增效剂-校正剂组合制造技术

提供了在用于治疗受试者的囊性纤维化的方法中的一种组合疗法，该组合疗法包含囊性纤维化跨膜传导调节物(CFTR)蛋白的功能调节剂(增效剂)、以及细胞加工和/或定位分子的一种或两种调节剂(校正剂)，该受试者具有位于全长野生型CFTR的氨基酸残基1164‑1480之间的突变。

Synergist - a combination of corrective agents for the treatment of cystic fibrosis

A combination therapy consisting of a functional modulator (synergist) of cystic fibrosis transmembrane conduction regulator (CFTR) protein, and one or two modulators (correctors) of cell processing and/or localization molecules is provided in a method used to treat cystic fibrosis in a subject who has a full-field presence. Mutations in amino acid residues 1164 CFTR 1480 of the natural type.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗囊性纤维化的增效剂-校正剂组合相关申请的交叉引用本申请要求于2015年10月9日提交的美国临时申请号62/239,667的优先权，出于所有目的将其通过引用并入本文。
本专利技术总体上涉及遗传疾病的药物疗法领域。更具体地，本专利技术涉及使用组合疗法进行的囊性纤维化的新颖的治疗。
技术介绍
囊性纤维化(CF)是高加索人群中最常见的常染色体隐性遗传疾病。大约每25名高加索人中有1名是该疾病的携带者。已经将响应基因定位于染色体7的长臂上。该序列编码被称为“囊性纤维化跨膜调节物”(“CFTR”)的膜相关蛋白。该CFTR基因包含27个外显子，并且编码1480个氨基酸的蛋白质(Gregory等人，1990；Rich等人，1990)。CFTR是糖蛋白，并被分类为ABC(ATP-结合盒)转运蛋白。该蛋白由五个结构域组成。存在两个核苷酸结合结构域(NBD1和NBD2)、调节域(RD)和两个跨膜结构域(MSD1和MSD2)。该蛋白的活性由cAMP-依赖性蛋白激酶(PKA)调控，该蛋白激酶催化调节域(RD)的磷酸化作用，并且还通过将两种ATP分子与NBD1和NBD2结构域结合(Riordan等人.，2005)调控。当CFTR基因序列被转录成RNA时，CFTR蛋白质的产生始于细胞核内；然后发生剪接以形成信使RNA(mRNA)。mRNA从细胞核转运至内质网(ER)，在此处mRNA被翻译成蛋白质并发生蛋白质折叠。蛋白质从ER转运至细胞膜(MacDonald等人，2007)。正常的转录和翻译过程形成细胞膜上正常量的CFTR蛋白质，并导致正常的氯化物转运活性。CFTR中的突变导致有缺陷的氯离子转运和有缺陷的电解质转运。已经鉴定出CFTR基因的超过2000个突变，并且可以基于这些突变对CFTR产生和活性的影响将这些突变分类为：I类：导致CFTR蛋白合成的(几乎)完全缺失；II类：导致成熟停滞和CFTR蛋白的细胞内定位缺陷；III类：导致氯离子转运功能有缺陷的激活的调节的抑制；IV类：导致氯离子的电导降低；以及V类：导致CFTR蛋白合成的减少。该CFTR基因的最常见的突变是多肽链位置508处的苯丙氨酸缺失(突变F508del-CFTR)，该突变是II类突变。为恢复细胞中CFTR的功能，可以使用不同类型的调节剂。简言之，对囊性纤维化患者的治疗需要突变的CFTR蛋白的不同调节剂，即“校正剂”和/或“增效剂”，取决于CFTR基因的突变，该突变将患者分成遗传差异性亚组。除了CFTR的这些直接调节剂，通常使用补充药物(例如具有抗菌作用或抗炎作用的那些药物)以缓解症状。CFTR增效剂改善具有门控(III类)或传导(IV类)突变的CFTR通道的功能(Rogan等人，2011)。存在来自体外研究的另外的证据，即CFTR增效剂还可以增强具有II类突变的CFTR通道的功能(VanGoor等人，2009)。然而，只有表达的CFTR通道已经位于细胞膜上，增效剂才能起作用。因此，单独的CFTR增效剂不能治疗I类或II类突变，这类突变特征在于不存在或缺失合成的CFTR蛋白。增效剂的实例是VX-770，该VX-770仅在患有具有III/IV类缺陷(例如像G551D-CFTR基因缺陷)的囊性纤维化的患者中是成功的，这些患者代表所有囊性纤维化患者的1％-5％(VanGoor等人，2009)，但在具有F508del-CFTRII类突变的患者中无显著的治疗效果(Flume等人，2012)。这意味着需要对患有囊性纤维化的患者亚组进行定制治疗，并且这种治疗取决于CFTR基因中突变的性质以及CFTR蛋白中产生的缺陷。将校正剂化合物用于治疗II类突变(例如F508del-CFTR)。这样的校正剂的实例是VX-809。该突变的蛋白F508del-CFTR，除了具有II类突变效应(CFTR蛋白的减少的成熟和细胞内定位缺陷)，还具有减少的氯离子传导。已经进行了对VX-809校正剂与VX-770增效剂的组合的测试，从而调节突变的蛋白F508del-CFTR的功能，并且在携带II类突变效应的患者中显示出改进的结果(www.clinicaltrials.gov，研究代码NCT01225211)。尽管增效剂和校正剂对CFTR功能具有不同的影响，但是在人类中通过汗液氯化物水平的变化和体外原代人类支气管上皮细胞检测到的CFTR活性之间存在潜在的相关性(Rowe等人，2013)。这证实了在临床前模型中化合物的性能可用于鉴定预期的增效剂和校正剂。CFTR基因中的另一类更稀有的突变，I类突变，包括提前终止密码子(“PTC”)或终止密码子(还被称为“无义突变”)。无义突变是导致全球约10％的囊性纤维化病例的原因。然而，在以色列，无义突变是大多数患者的囊性纤维化的原因(Kerem等人，1997)。PTC被定义为基因的编码序列中的终止密码子，位于正常终止密码子上游。无义突变是DNA中的单点改变，导致在相应的mRNA转录物的蛋白质编码区域中不适当地存在UAA、UAG、或UGA终止密码子。然而正常的终止密码子终止基因翻译并能够使得全长野生型蛋白质合成，该PTC阻止野生型蛋白质合成并导致突变基因的转录的部分或完全抑制。进而，CFTR蛋白的部分或全部缺失导致病理学异常。并非所有的I型突变都导致细胞中CFTR蛋白的完全缺失。Rowe等人，2007描述了实验证据，即在位置1164之后发生的I类突变的某个子集展现出膜定位，并且在通读剂存在下增强表达后保留了低的但可检测的氯离子通道功能。提前终止密码子抑制子，也称为“通读剂”，它们引人关注是由于它们可能用于治疗由I类突变引起的囊性纤维化。氨基糖苷类抗生素是第一个被证明抑制致病突变中PTC的药物，允许翻译全长蛋白(Hermann等人，2007)。Howard等人(Howard等人，1996)在1996年描述了通过合成氨基糖苷类遗传霉素(G418)抑制PTC，恢复了表达无义密码子的HeLa细胞中的蛋白质功能。在CF患者中使用另一种药物庆大霉素的研究显示在鼻腔电位差(NPD)值中存在微小变化(Wilschanski等人，2003)。然而，肠胃外给予的不便和严重副作用的可能性排除了庆大霉素的用于抑制I类突变的长期全身性使用(Wilschanski等人，2012)。Ataluren(临床研究代码PTC124)也具有促进PTC通读而不会在正常治疗剂量下显示毒性效应的能力(Wilschanski等人，2003；Kerem等人，2008)。尽管ataluren似乎对于提前终止密码子具有特异性，但如果药物允许正确的终止密码子的通读，则可能会发生严重的不良反应。Ataluren还具有干扰无义密码子介导的mRNA降解的潜能，从而针对提前终止密码子的有害副产物提供保护。因此，需要一种治疗I类突变的方法，特别是在携带提前终止密码子(PTC)的患者中或在CFTR蛋白质的第1164位之后发生的无义突变。本专利技术通过提供增效剂与一种或两种校正剂的新颖的组合来解决对于这样的突变的可替代治疗的需求，该组合能够恢复具有位于野生型CFTR的全长编码序列的位置1164-1480之间的I类突变的患者中的CFTR功能，而无需另外的给予通读校正剂分子。专利技术概述本专利技术提供了增效剂化合物与一种或多种非通读校正剂的组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在受试者中治疗囊性纤维化的方法，该方法包括以下步骤：a)对来自该受试者的囊性纤维化跨膜传导调节物(CFTR)蛋白的序列中提前终止密码子(PTC)或无义突变的存在进行分析，b)对具有位于SEQ ID NO：1的氨基酸残基1164‑1480之间的突变的受试者进行鉴定，并且c)给予组合，该组合包含：i.囊性纤维化跨膜传导调节物(CFTR)蛋白的功能调节剂(P增效剂)，ii细胞加工和/或定位的调节剂(C校正剂)，其中所述C校正剂不是通读校正剂，其中所述校正剂不通过CFTR的跨膜结构域1(MSD1)起作用，并且其中所述组合不包含通读剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.09 US 62/2396671.一种在受试者中治疗囊性纤维化的方法，该方法包括以下步骤：a)对来自该受试者的囊性纤维化跨膜传导调节物(CFTR)蛋白的序列中提前终止密码子(PTC)或无义突变的存在进行分析，b)对具有位于SEQIDNO：1的氨基酸残基1164-1480之间的突变的受试者进行鉴定，并且c)给予组合，该组合包含：i.囊性纤维化跨膜传导调节物(CFTR)蛋白的功能调节剂(P增效剂)，ii细胞加工和/或定位的调节剂(C校正剂)，其中所述C校正剂不是通读校正剂，其中所述校正剂不通过CFTR的跨膜结构域1(MSD1)起作用，并且其中所述组合不包含通读剂。2.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中该囊性纤维化由CFTR蛋白中的I类突变引起，其中所述CFTR蛋白包含提前终止密码子(PTC)或无义突变，并且其中所述突变位于SEQIDNO：1的氨基酸残基1164-1480之间。3.如权利要求1所述的方法，其中使用所述组合通过对源自F508del纯合的患者的细胞进行的TECC测定测量的短路(Isc)电流为至少15％的使用根据SEQIDNO：1的CFTR蛋白通过TECC测定测量而获得的Isc。4.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述校正剂与CFTR蛋白结合。5.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述C校正剂不与该CFTR蛋白的MSD1结构域结合。6.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述组合另外地包含细胞加工和/或定位的第二调节剂(第二C校正剂)，其中所述第二C校正剂不是通读校正剂。7.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述第二C校正剂与该CFTR蛋白结合。8.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述第一校正剂和该第二C校正剂与该CFTR蛋白的不同部分结合。9.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述第二C校正剂通过该CFTR蛋白的MSD1结构域起作用。10.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述第二C校正剂与该CFTR蛋白的MSD1结构域结合。11.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述校正剂通过不同机制起作用。12.根据权利要求8所述的治疗囊性纤维化的方法，其中使用跨上皮钳位电路测定(TECC测定)和分子传感技术测量所述结合。13.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述组合产生如在W1282X费舍尔大鼠甲状腺(FRT)细胞中使用跨上皮钳位电路测定所测量的另外的至少1mS/cm2的跨上皮电导(ΔGt)。14.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中所述组合产生如在W1282X费舍尔大鼠甲状腺(FRT)细胞中使用跨上皮钳位电路测定(TECC测定)所测量的另外的至少3.5mS/cm2的跨上皮电导(ΔGt)。15.根据权利要求1所述的治疗囊性纤维化的方法，其中使用所述组合通过对源自F508del纯合的患者的细胞进行的TECC测定测量的短路(Isc)电流为至少30％的使用根据SEQIDNO：1的CFTR蛋白通过TECC测定测量而获得的Isc。16.根据权利要求6所述的治疗囊性纤维化的方法，其中使用该组合通过跨上皮钳位电路测定(TECC测定)测量的短路(Isc)电流至少等于相同细胞中的每种校正剂的单个Isc的总和的85％。17.根据权利要求1或2所述的方法，其中该提前终止密码子(PTC)或无义突变是UGA密码子(或乳白密码子)。18.根据权利要求1或2所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：KE康拉思，SM罗，
申请(专利权)人：艾伯维公司，加拉佩格斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：卢森堡,LU