内皮糖蛋白多肽及其用途制造技术

本发明专利技术涉及内皮糖蛋白多肽及其用途。在某些方面中，本公开内容涉及发现包含内皮糖蛋白(endoglin，ENG)多肽胞外结构域之截短配体结合部分的多肽可用于在体内(特别是在患有血管发生相关疾病的哺乳动物中)抑制血管发生。

Endothelial glycoprotein polypeptide and its use

The present invention relates to endothelial glycoprotein polypeptide and its uses. In some respects, the present disclosure involves the discovery of a polypeptide of the truncated ligand binding part containing the extracellular domain of the endoglin (ENG) polypeptide, which can be used to inhibit angiogenesis in the body, especially in mammals with angiogenic related diseases.

【技术实现步骤摘要】
内皮糖蛋白多肽及其用途本申请是申请号为201280030070.0的中国专利申请的分案申请，原申请是2012年4月19日提交的PCT国际申请PCT/US2012/034295于2013年12月18日进入中国国家阶段的申请。相关申请本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2011年4月20日提交的题目为“EndoglinPolypeptidesAndUsesThereof”的美国临时专利申请序号US61/477,585的申请日期的权益，其全部内容通过引入并入本文。
本专利技术涉及内皮糖蛋白多肽及其用途。
技术介绍
血管发生(angiogenesis)(形成新血管的过程)在许多正常和异常的生理状态中是至关重要的。在正常生理条件下，人和动物在特定且受限的情况中进行血管发生。例如，通常在伤口愈合，胎儿和胚胎发育，以及黄体、子宫内膜和胎盘的形成中观察到血管发生。在许多疾病中发生不期望的或不适当地调节的血管发生，其中异常内皮生长可导致或参与病理过程。例如，血管发生参与许多肿瘤的生长。失调的血管发生与病理过程(例如类风湿性关节炎、视网膜病、血管瘤和银屑病)相关。多种病理疾病状态(其中出现失调的血管发生)已被归类为血管发生相关疾病。认为受控和非受控的血管发生二者是以类似的方式进行的。毛细血管主要由内皮细胞和周细胞(pericyte)构成，并且被基底膜包围。血管发生始于由内皮细胞和白细胞释放的酶侵蚀基底膜。内衬于血管腔的内皮细胞随后突出透过基底膜。血管发生因子(angiogenicfactor)诱导内皮细胞迁移穿过被侵蚀的基底膜。迁移细胞形成从母体血管突出的“萌芽”，内皮细胞在此进行有丝分裂和增殖。内皮萌芽相互融合以形成毛细血管袢，产生新的血管。抑制血管发生的药剂已被证明有效地治疗多种疾病。AvastinTM(贝伐单抗)(一种结合血管内皮生长因子(VEGF)的单克隆抗体)用于治疗多种癌症。MacugenTM(一种结合VEGF的适配体(aptamer))已被证明有效地治疗新生血管性(湿性)年龄相关性黄斑变性。SDF/CXCR4信号传导途径的拮抗剂抑制肿瘤新血管形成(neovascularization)并且在小鼠模型中有效地抗癌症(Gulengetal.CancerRes.2005Jul1；65(13)：5864-71)。多种所谓的多靶点酪氨酸激酶抑制剂(包括凡德他尼(vandetanib)、舒尼替尼(sunitinib)、阿西替尼(axitinib)、索拉非尼(sorafenib)、瓦他拉尼(vatalanib)和帕唑帕尼(pazopanib)在多种肿瘤类型的治疗中用作抗血管发生剂。沙利度胺及相关化合物(包括泊马度胺(pomalidomide)和来那度胺(lenalidomide))已在癌症的治疗中显示出有益作用，虽然作用的分子机制尚不明确，但是抑制血管发生似乎是抗肿瘤作用的重要组成部分(参见例如Dredgeetal.MicrovascRes.2005Jan；69(1-2)：56-63)。虽然许多抗血管发生剂对不论何种受影响组织的血管发生都有作用，但另一些血管发生剂可倾向于具有组织选择性作用。期望有用于抑制血管发生的另外的组合物和方法。这些包括这样的方法和组合物，其可抑制一般的或在某些组织和/或疾病状态中的不期望的血管生长。
技术实现思路
部分地，本公开内容提供内皮糖蛋白(endoglin，ENG)多肽和这种内皮糖蛋白多肽作为针对BMP9和/或BMP10的选择性拮抗剂的用途。如本文中所述，包含内皮糖蛋白胞外结构域(extracellulardomain，ECD)的一部分或全部的多肽与BMP9和BMP10相结合而不表现出与TGF-β超家族的其他成员的牢固(substantial)结合。该公开内容证明包含内皮糖蛋白ECD的一部分或者全部的多肽是BMP9和BMP10信号传导的有效拮抗剂并且作用在于抑制体内的血管发生和肿瘤生长。因此，在某些方面，本公开内容提供作为BMP9和/或BMP10拮抗剂的内皮糖蛋白多肽，其用于抑制血管发生以及本文中所述的与BMP9或BMP10相关的其他疾病。在某些方面，本公开内容提供包含内皮糖蛋白的截短之胞外结构域的多肽，其用于抑制血管发生和治疗与BMP9或BMP10相关的其他疾病。虽然不希望受限于任何具体的作用机制，但预期这样的多肽通过与BMP9和/或BMP10相结合并且抑制这些配体与受体(例如ALK1、ALK2、ActRIIA、ActRIIB和BMPRII)形成信号传导复合物的能力而发挥作用。在某些实施方案中，内皮糖蛋白多肽包含与SEQIDNO：1的人内皮糖蛋白序列的第42至333、26至346、26至359或者26至378位氨基酸的序列至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列，由其组成，或基本由其组成。内皮糖蛋白多肽可包含与起始于SEQIDNO：1第26至42位中任意位置并且终止于SEQIDNO：1的人内皮糖蛋白序列第333至378位中任意位置的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列，由其组成，或基本由其组成。内皮糖蛋白多肽可包含在较不严格、严格或高度严格的条件下与核苷酸序列的互补物(complement)杂交的核酸编码的多肽，由其组成，或基本由其组成，所述核苷酸序列选自：SEQIDNO：2的第537至1412位核苷酸、SEQIDNO：30的第121至1035位核苷酸、SEQIDNO：26的第121至1074位核苷酸、SEQIDNO：24的第121至1131位核苷酸、SEQIDNO：30的第73至1035位核苷酸、SEQIDNO：26的第73至1074位核苷酸、以及SEQIDNO：24的第73至1131位核苷酸。在前述每一项中，可这样选择内皮糖蛋白多肽，以使其不包含全长的内皮糖蛋白ECD(例如，可这样选择内皮糖蛋白多肽，以使其不包含SEQIDNO：1的第379至430位氨基酸的序列或其一部分或者SEQIDNO：1的独特序列的任何其他部分)。内皮糖蛋白多肽可作为单体蛋白质或以二聚化形式使用。内皮糖蛋白多肽还可与第二多肽部分融合以提供改进的性质，例如提高的半衰期或者更容易生产或纯化。可直接融合或者在内皮糖蛋白多肽与任意其他部分之间插入接头。接头可以是结构化或非结构化的，并且可由1、2、3、4、5、10、15、20、30、50个或更多个氨基酸组成，任选地可以是相对自由的二级结构。接头可富含甘氨酸和脯氨酸残基，并可例如含有苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸(例如，TGGG(SEQIDNO：31))的序列或简单地一个或更多个甘氨酸残基(例如，GGG(SEQIDNO：32))。与免疫球蛋白的Fc部分的融合或与聚氧化乙烯基部分(例如，聚乙二醇)的连接可特别地用于提高全身施用(例如，静脉内、动脉内和腹膜内施用)中内皮糖蛋白多肽的血清半衰期。在某些实施方案中，内皮糖蛋白-Fc融合蛋白包含这样的多肽，所述多肽包含与起始于SEQIDNO：1第26至42位中任意位置并且终止于SEQIDNO：1的人内皮糖蛋白序列第333至378位中任意位置之氨基酸的序列至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.内皮糖蛋白多肽，其包含与SEQ ID NO：1的第42至333位氨基酸至少95％一致的氨基酸序列，其中所述内皮糖蛋白多肽不包含由SEQ ID NO：1的第379至430位氨基酸组成的序列。

【技术特征摘要】
2011.04.20 US 61/477,5851.内皮糖蛋白多肽，其包含与SEQIDNO：1的第42至333位氨基酸至少95％一致的氨基酸序列，其中所述内皮糖蛋白多肽不包含由SEQIDNO：1的第379至430位氨基酸组成的序列。2.权利要求1所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与起始于对应于SEQIDNO：1第26至42位中任意位置之氨基酸并且终止于对应于SEQIDNO：1第333至378位中任意位置之氨基酸的序列至少95％一致。3.权利要求1至2中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其包含与选自以下的序列至少95％一致的氨基酸序列：a.SEQIDNO：1的第26至346位氨基酸，b.SEQIDNO：1的第26至359位氨基酸，以及c.SEQIDNO：1的第26至378位氨基酸。4.权利要求1至2中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽由第一部分和与SEQIDNO：1异源的第二部分组成，所述第一部分由与选自以下的序列至少95％一致的氨基酸序列组成：a.SEQIDNO：1的第26至346位氨基酸，b.SEQIDNO：1的第26至359位氨基酸，以及c.SEQIDNO：1的第26至378位氨基酸。5.权利要求4所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述第二部分包含IgG的Fc部分。6.权利要求1至4中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽不包含来自由SEQIDNO：1的第379至586位氨基酸组成的序列的超过50个连续氨基酸。7.权利要求1至6中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽以小于1×10-9M的平衡解离常数(KD)或小于1×10-3s-1的解离速率常数(kd)与人BMP-9相结合。8.权利要求1至7中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽以小于1×10-9M的平衡解离常数(KD)或小于5×10-4s-1的解离速率常数(kd)与人BMP-9相结合。9.权利要求1至8中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽以小于1×10-9M的平衡解离常数(KD)或小于5×10-3s-1的解离速率常数(kd)与人BMP-10相结合。10.权利要求1至9中任一项所述的内皮糖蛋白多肽，其中所述内皮糖蛋白多肽以小于1×10-9M的平衡解离常数(KD)或小于2.5×10-3s-1的解离速率常数(kd)与人BMP-10相结合。11.内皮糖蛋白多肽，其包含由这样的核酸编码的氨基酸序列，所述核酸在严格条件下与选自以下的核苷酸序列的互补物杂交：a.SEQIDNO：2的第537至1412位核苷酸[编码hENG(42至333)]，b.SEQIDNO：30的第121至1035位核苷酸[编码hENG(42至346)]，c.SEQIDNO：26的第121至1074位核苷酸[编码hENG(42至359)]，d.SEQIDNO：24的第121至1131位核苷酸[编码hENG(42至378)]，e.SEQIDNO：30的第73至1035位核苷酸[编码hENG(26至346)]，f.SEQIDNO：26的第73至1074位核苷酸[编码hENG(26至359)]，以及g.SEQIDNO：24的第73至113...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿斯亚·格林贝格，罗斯莱因·卡斯顿盖，埃里克·维尔纳，拉温德拉·库玛，
申请(专利权)人：阿塞勒隆制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US