血吸虫抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术检测技术领域，特别是涉及一种用于血吸虫抗体检测的试剂盒，该试剂盒包括样品垫、金标垫、纤维素膜和吸水垫，该试剂盒检测血吸虫抗体的特异性较高；检测血吸虫抗体快速、简便，不需要任何仪器或设备辅助。

Antibody test kit for Schistosoma

The invention relates to the technical field of biological technology detection, in particular to a kit for the detection of Schistosoma antibody. The kit includes a sample pad, a gold pad, a cellulose membrane and a water absorbent pad. The kit has high specificity for detecting the antibody of Schistosoma, and the detection of Schistosoma antibody is rapid and simple without any instrument or any other instrument. Equipment assistance.

【技术实现步骤摘要】
血吸虫抗体检测试剂盒
本专利技术涉及生物技术检测
，特别是涉及一种用于血吸虫抗体检测的试剂盒。
技术介绍
日本血吸虫病是一种由日本血吸虫引起的热带疾病。我国日本血吸虫病流行区人口众多，故日本血吸虫病仍然是我国重点防治的寄生虫病之一。诊断是治疗疾病的一个关键环节，所以快速、准确的诊断技术是一个有效控制疾病的先决条件。寻找简便、快速、价廉、便于推广应用、具有普查、临床实际诊断和疗效考察价值的检测方法，是当前迫切需要解决的问题。目前日本血吸虫病诊断主要有病原学诊断和免疫诊断两大类。病原学检查方法不易检出轻度感染病人和慢性病患者，而且多数病原学方法操作繁琐，用时较久，难以用于大规模筛查疾病；免疫诊断方法具有敏感性高、使用方便等优点，已逐渐成为临床和现场日本血吸虫病感染筛查的重要手段。目前主流的免疫诊断方法包括间接血凝法、间接ELISA、免疫层析法，其中间接血凝法操作较为复杂，间接ELISA法需要孵育、洗板、仪器扫描，不便于大规模筛查使用。免疫层析法依靠其独特的优势，缩短了检测时间，无需特定仪器，便于血吸虫病的诊断。免疫层析法通常采用间接法检测血清、血浆或全血样本中的血吸虫抗体，即将血吸虫抗原包被在硝酸纤维素膜上，然后采用胶体金或乳胶微球标记抗人的二抗，从而检测样本中的抗体。该方法灵敏度基本能达到95％以上，但特异性较差。因此，专利技术一种特异性好，同时快速、简便，不需要任何仪器或设备的免疫层析法成为了日本血吸虫病诊断的迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种用于血吸虫抗体检测的试剂盒。本专利技术的另一目的是提供一种血吸虫抗体检测试剂盒的制备方法。本专利技术的第一方面，提供一种用于血吸虫抗体检测的试剂盒，包括样品垫、金标垫、纤维素膜和吸水垫；所述纤维素膜上设置检测线和质控线；上述金标垫包被胶体金结合抗原，以及胶体金结合蛋白，所述胶体金结合抗原为血吸虫虫卵可溶性抗原，所述胶体金结合蛋白为链霉亲和素或兔IgG。在一个优选的方案中，上述血吸虫虫卵可溶性抗原的标记使用浓度为20μg/mL-25μg/mL，上述链霉亲和素或兔IgG的标记使用浓度为20μg/mL-25μg/mL。在一些实施方案中，上述检测线包被有检测血吸虫虫卵可溶性抗原的蛋白。在一个优选的方案中，所述检测血吸虫虫卵可溶性抗原的蛋白为鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A，优选地，所述鼠抗人IgG为鼠抗人IgG单克隆抗体。在一些实施方案中，上述质控线包被蛋白，所述蛋白为生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG，优选地，所述羊抗兔IgG为羊抗兔IgG多克隆抗体。在一个优选的方案中，上述鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A浓度为1.0mg/mL-2.0mg/mL。在一个优选的方案中，上述生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG浓度为1.0mg/mL-2.0mg/mL。在一个优选的方案中，上述血吸虫虫卵可溶性抗原标记使用浓度为20μg/mL；上述链霉亲和素或兔IgG标记使用浓度为20μg/mL；上述鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A浓度为1.5mg/mL；上述生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG浓度为1.0mg/mL。在一个优选的方案中，上述纤维素膜为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙、聚四氟乙烯膜的任意一种。在一些实施方案中，本专利技术的血吸虫抗体检测试剂盒适用于人血液样本，样本与稀释液比例为1：9，所述稀释液为0.85％氯化钠溶液。本专利技术的第二方面，提供了一种制备上述血吸虫抗体检测试剂盒的方法，包括以下步骤：(1)金标垫标记，将胶体金溶液加入缓冲液，再加入血吸虫虫卵可溶性抗原，最后加入终止液，形成血吸虫虫卵可溶性抗原胶体金复合物，再采用梯度离心后得到纯化后的胶体金复合物，将其喷涂到所述金标垫上；将胶体金溶液加入缓冲液，再加入链霉亲和素或兔IgG，最后加入终止液，形成链霉亲和素胶体金复合物或兔IgG胶体金复合物，再采用梯度离心后得到纯化后的胶体金复合物，将其喷涂到所述金标垫上；(2)检测线标记，将鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A加入膜包被液，喷涂到所述检测线上；(3)质控线标记，将生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG加入膜包被液，喷涂到所述质控线上；(4)将吸水垫粘贴在纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与纤维素膜相对的一端，得到血吸虫抗体检测试剂盒。在一个优选的方案中，上述金标垫标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液，PH值为7.4-9.0。在一个优选的方案中，上述终止液为2％BSA溶液，上述膜包被液为含3％甲醇的0.1M硼酸盐缓冲液。在一个优选的方案中，上述血吸虫虫卵可溶性抗原胶体金复合物与链霉亲和素胶体金复合物梯度离心转速为5000rpm、8000rpm、10000rpm、13500rpm。在一个优选的方案中，上述胶体金复合物浓度包被OD为5-10。本专利技术的血吸虫抗体检测试剂盒具有以下优点：1、检测血吸虫抗体的特异性较高；2、检测血吸虫抗体快速、简便，不需要任何仪器或设备辅助。附图说明下面结合附图对本专利技术作进一步的描述。图1为本专利技术血吸虫抗体检测试剂盒结构示意图图中标号是1为PVC底板；2为纤维素膜；3为样品垫；4为金标垫；5为检测线；6为质控线；7为吸水垫。具体实施方式为了使本领域
人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。1、血吸虫抗体检测试剂盒制备(1)金标垫标记，将胶体金溶液600ml加入60ml，0.1M，pH＝7.40磷酸盐缓冲液，再按照20μg/mL的量加入血吸虫虫卵可溶性抗原12.0mg，最后加入2％BSA溶液60ml，形成血吸虫虫卵可溶性抗原胶体金复合物，采用梯度离心后得到胶体金复合物，稀释至OD＝8,然后喷涂到所述金标垫上；将胶体金溶液250ml加入25ml，0.1M，pH＝9.00硼酸盐缓冲液，再按照20μg/mL的量加入链霉亲和素5.0mg，最后加入2％BSA溶液25ml，形成链霉亲和素胶体金复合物，采用梯度离心后得到胶体金复合物，稀释至OD＝8,然后喷涂到所述金标垫上；上述梯度离心步骤：将标记好的复合物分装到洁净的离心管中，配平，2℃～8℃梯度离心，时间如下表。每次离心后，待沉淀自然溶解完后将沉淀吸出，上清继续下一个梯度的离心，用含0.605％Tris、5％蔗糖、2％BSA、0.3％吐温-20的复溶液按照标记胶体金溶液体积的10％进行复溶，得到胶体金复合物。(2)检测线包被，按浓度1.5mg/mL浓度取鼠抗人IgG单克隆抗体37.5mg，加入到含3％甲醇的0.1M硼酸盐缓冲液中，配制检测线溶液25mL，喷涂到所述检测线上；(3)质控线包被，按浓度1.0mg/mL浓度取生物素酯-BSA偶联物25.0mg，加入到含3％甲醇的0.1M硼酸盐缓冲液中，配制质控线溶液25mL，喷涂到所述质控线上；(4)将吸水垫粘贴在纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与纤维素膜相对的一端，得到血吸虫抗体检测试剂盒。2、血吸虫抗体检测试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血吸虫抗体检测试剂盒，包括样品垫、金标垫、纤维素膜和吸水垫；所述纤维素膜上设置检测线和质控线；其特征在于，所述金标垫包被胶体金结合抗原，以及胶体金结合蛋白，所述胶体金结合抗原为血吸虫虫卵可溶性抗原，所述胶体金结合蛋白为链霉亲和素或兔IgG。

【技术特征摘要】
1.一种血吸虫抗体检测试剂盒，包括样品垫、金标垫、纤维素膜和吸水垫；所述纤维素膜上设置检测线和质控线；其特征在于，所述金标垫包被胶体金结合抗原，以及胶体金结合蛋白，所述胶体金结合抗原为血吸虫虫卵可溶性抗原，所述胶体金结合蛋白为链霉亲和素或兔IgG。2.如权利要求1所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述血吸虫虫卵可溶性抗原的标记使用浓度为20μg/mL-25μg/mL，所述链霉亲和素或兔IgG的标记使用浓度为20μg/mL-25μg/mL。3.如权利要求1所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线包被有检测血吸虫虫卵可溶性抗原的蛋白。4.如权利要求3所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测血吸虫虫卵可溶性抗原的蛋白为鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A。5.如权利要求4所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A浓度为1.0mg/mL-2.0mg/mL。6.如权利要求4所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述质控线包被蛋白，所述蛋白为生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG。7.如权利要求6所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG浓度为1.0mg/mL-2.0mg/mL。8.如权利要求6所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述血吸虫虫卵可溶性抗原的标记使用浓度为20μg/mL；所述链霉亲和素或兔IgG的标记使用浓度为20μg/mL；所述鼠抗人IgG或金黄葡萄球菌蛋白A浓度为1.5mg/mL；所述生物素酯-BSA偶联物或羊抗兔IgG浓度为1.0mg/mL。9.如权利要求1-8任一项所述的血吸虫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述纤维素膜为硝酸纤维素膜、醋...

【专利技术属性】
技术研发人员：刁维均，刘东泽，蔡泉蜀，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51