一种制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法技术

本发明专利技术提供了一种槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷的制备方法，该方法采用二维液相色谱制备，以甲醇(或含0.1％甲酸)－水，乙醇(或含0.1％甲酸)－水或乙腈(或含0.1％甲酸)－水为流动相，以反相色谱柱为一维制备色谱柱，对银杏叶提取物进行组分切割，收集目标组分为槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。再以反相色谱柱为二维制备色谱柱，在质谱选择离子峰指导下，对槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷粗品进行组分切割，收集，旋转蒸发浓缩，得到高纯度的槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷，纯度可以达到75％以上。本发明专利技术制备过程重复性高，可操作性好，同时银杏叶资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求。

A method of preparing quercetin -3-O-2 ', 6' - two rhamnyl glucoside

The invention provides a method for the preparation of quercetin 3 O 2 \, 6\ two rhamnose glucoside, which is prepared by two dimensional liquid chromatography with methanol (or 0.1% formic acid) water, ethanol (or 0.1% formic acid) water or acetonitrile (or 0.1% formic acid) - water as a mobile phase, and one dimensional color preparation is made in a reversed phase chromatographic column. The column was used for cutting the components of Ginkgo biloba extract, and the target components were quercetin 3 O 2, 6 \two\ rhamnose glucoside. Under the guidance of mass spectrometry selection ion peak, the chromatographic column was prepared by the reversed phase chromatography column. The content of quercetin 3 O 2 \, 6\ two rhamnosinyl glucoside was cut, collected, and concentrated by rotary evaporation, and the high purity quercetin 3 O 2 \, 6\ two rhamnose glucoside was obtained, the purity could reach the purity. More than 75%. The preparation process has high repeatability, good operability, and rich ginkgo leaf resources, and is easy to obtain, and is suitable for large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法
本法名涉及医药
，具体是一种从银杏叶提取物中制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法。更进一步的，本专利技术是利用二维液相色谱技术从银杏叶提取物中制备高纯度槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的纯度可以达到75％或以上。
技术介绍
槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷属于黄酮类化合物，黄酮类化合物具有很好的药学效果，能降低毛细血管通透性和脆性,促进细胞增生和防止血细胞凝聚,清除自由基，在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。同时，研究表明槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷还具有抗肿瘤作用。槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷存在于珍珠菜、胭脂花、碟豆花、长春花、乔皮、海芒果、长叶胡颓子、银杏叶等植物中。目前对于槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷提取分离，主要是植物经过醇提，然后经大孔树脂或葡聚糖凝胶等多次柱层析步骤进行分离纯化，操作步骤繁琐，过程复杂，同时需要消耗大量的有机溶剂，耗时费力(吴威。珍珠菜抗肿瘤有效部位化学成分研究，中草药，2011年第42卷第1期：38－41；赵一懿。注射用银杏叶提取物中黄酮苷类化学成分研究，中草药，2013年第44卷第15期：2027-2034)。二维液相色谱技术是通过用两根性质相同或不同的色谱柱，或通过调整流动相的组成比例对复杂样品进行分离，已被广泛应用于医药卫生、食品科学、环境和农业科学等各个领域。近年来，随着二维液相色谱理论及应用的发展，二维制备液相色谱也逐渐发展起来。与单维制备液相色谱相比，二维制备液相色谱不但具有更高的峰容量，而且两维具有不同的选择性。(高峰。二维液相色谱技术在药物分析中的应用，药物分析杂质，2007年第27卷第4期：616－620)。到目前为止，采用二维液相色谱技术制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷还未见报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种以银杏叶提取物为原料，利用二维色谱分离技术制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，操作步骤如下：1.银杏叶提取物溶于20％－80％的甲醇－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－2000mg/mL，最佳银杏叶提取物溶于40－60％的甲醇－水溶液，银杏叶提取物浓度最佳为250－550mg/mL；2.采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，ClickPN。采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，ClickPN。最佳二维色谱柱组合为一维为反相C18，二维为ClickPN；3.一维液相色谱制备采用的流动相为甲醇，乙醇或乙腈(有机相)与水(水相)混合，洗脱条件按照有机相5－60％等度或0－60分钟有机相由5％提高到80％梯度进行。一维制备最佳流动相为乙腈(或含0.1％甲酸)与水(或含0.1％甲酸)，采用梯度方式，有机相比例由10％经20－30分钟增加到30－40％；4.对保留时间5－20分钟主成分为槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。将一维制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用甲醇－水溶解，至浓度为20－200mg/mL。一维制备最佳收集时间为12－18分钟，为主要含槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分，浓缩至浓度为50－100mg/mL；5.对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备。采用的流动相为甲醇，乙醇或乙腈(有机相)与水(水相)混合，洗脱条件按照有机相5－15％等度或经0－30分钟有机相由5％提高到30％梯度进行。二维制备最佳流动相为乙腈(或含0.1％甲酸)与水(或含0.1％甲酸)，采用等度条件，乙腈(或含0.1％甲酸)浓度为8－15％；二维制备质谱选择离子为m/z＝303，收集m/z＝303的馏分；6.制备时流动相流速为20－120mL/min，制备时柱温为室温或25－40℃，制备时进样量为200－3000μL/针，检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器，质谱选择离子指导组分收集；最佳流速为80－100mL/min，柱温为室温，进样量为2000－2500μL/针，紫外检测器为360nm；7.将二维液相色谱制备收集到的槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷馏分旋转蒸发浓缩至干，得到高纯度的槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。所属
的技术人员应该悉知，本专利技术的技术方法不仅仅限于从银杏叶提取物中制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，还可以应用于其它药材槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的提取。本专利技术的优点：本专利技术与现有技术相比具有以下特点：1.槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷纯度高：由于本专利技术所用的技术方法，直接针对植物中所含的槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷进行制备，无需经过加热、酸碱的变化，槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷以在药材中本身存在的状态被制备出来，没有水解产物掺杂，因此得到的槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷纯度高，达到75％以上。2.方法简单易行，操作简便：本专利技术所涉及的制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，仪器自动化程度高，操作方便、简单，常温常压下就可进行，重复性高，适合大规模生产的需要。3.药材来源广，易获得，价格便宜：银杏是我国特有的珍贵树种，占全世界资源的70％，银杏叶的总产量每年在2×107kg以上，资源极大丰富。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术做详细描述。实施例1：称取银杏叶提取物500g，溶于1L体积浓度50％的甲醇－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，浓度为500mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，透过膜的液体进行一维液相色谱制备。一维液相色谱柱采用UnitaryC18(50×250mm，10μ，华谱新创科技有限公司)，流动相采用乙腈(含质量浓度0.1％甲酸)为有机相，水(含质量浓度0.1％甲酸)为水相，线性梯度洗脱方式：有机相体积浓度由5％经60分钟提高到30％。采用DAD紫外检测器360nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为3000μL/针，流动相流速为90mL/min，收集20－25分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。用体积浓度40％的甲醇－水溶液溶解槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品，浓度为10mg/mL，经微孔滤膜过滤，透过膜的液体进行二维液相色谱制备，色谱柱为ClickPN(50×150mm，5μ，华谱新创科技有限公司)流动相选择甲醇(含质量浓度0.1％甲酸)为有机相，水(含质量浓度0.1％甲酸)为水相，采用体积浓度10％有机相等度洗脱。采用DAD紫外检测器360nm选择吸收波长，质谱选择离子m/z为303，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为100mL/min，收集m/z为303的馏分，旋转蒸发至干，得到槲皮素-3-O-2”,6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，步骤如下：(1)将中药提取物溶于甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水中，制得中药提取物溶液；(2)采用二维液相色谱分离纯化技术从中药提取物中制备槲皮素‑3‑O‑2”,6”‑二鼠李糖基葡萄糖苷；采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或Click PN；采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或Click PN；所述中药提取物为银杏叶提取物。

【技术特征摘要】
1.一种制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，步骤如下：(1)将中药提取物溶于甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水中，制得中药提取物溶液；(2)采用二维液相色谱分离纯化技术从中药提取物中制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷；采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或ClickPN；采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或ClickPN；所述中药提取物为银杏叶提取物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：银杏叶提取物溶于体积浓度20％－80％的甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－2000mg/mL。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：一维液相色谱制备采用的流动相为甲醇、乙醇或乙腈(有机相，其中不含或质量浓度含0.1％甲酸)与水(水相)混合，洗脱条件按照有机相5－60％等度或从0至15－60分钟有机相体积浓度由5％提高到80％线性梯度进行；对保留时间5－25分钟主成分为槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用体积浓度20％－70％的甲醇－水溶液溶解，至浓度为10－500mg/mL。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备；采用的流动相为甲醇乙醇或乙腈(有机相，其中不含或质量浓度含0.1％甲酸)与水(水相)混合，洗脱条件按照有机相5－30％等度或经从0至15－60分钟有机相体积浓度由5％提高到30％梯度进行，收集槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷组分。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：色谱柱规格为内径20-50厘米；制备时流动相流速为...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，付冬梅，丰加涛，薛兴亚，肖远胜，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21