本发明专利技术公开了一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，属于药用植物成分分析技术领域，是先分别配制混合标准品溶液与藤茶供试样品溶液，然后采用高效液相色谱分别对混合标准品溶液与供试样品溶液进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量。本发明专利技术测定方法稳定性和重现性好，操作简单、结果准确可靠，可应用于藤茶中多种黄酮类成分的同时测定。
【技术实现步骤摘要】
一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法
本专利技术属于药用植物成分分析
，具体涉及一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法。
技术介绍
藤茶为葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物，学名为显齿蛇葡萄（AmpelopsisgrossedentataW.T.Wan），是我国特有的一种药食两用植物，主要分布于我国长江流域以南等省区海拔200~1300m的山区。藤茶味甘、淡、性凉，具有清热解毒、祛风湿等功效，民间常用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症，已有上千年历史。现代药理研究表明，藤茶具有抗氧化、抑菌消炎、降血糖、降血脂、降血压和护肝效果，对因烟酒过度等引起的咽喉炎、消化功能障碍等病症具有独特功效。2013年显齿蛇葡萄（藤茶）叶被国家卫生计生委批准为新食品原料[2013年第16号]。目前已有大量的藤茶饮用茶产品及深加工产品在市场上销售。研究表明，藤茶中的主要次生代谢物以黄酮类化合物为主，是迄今在自然界中发现的黄酮含量最高的一种天然植物，故被誉为“植物黄酮之王”。藤茶中的黄酮类物质种类多样，目前已发现了十几种黄酮类成分，包括二氢杨梅素、槲皮素、花旗松素、山奈酚、藤茶素、杨梅苷、橙皮素、芹菜素等。目前黄酮类化合物含量的分析检测方法主要有紫外分光光度法和高效液相色谱法（HPLC）等，其中分光光度法测定的是总黄酮的含量，不能反映各黄酮类成分的情况。HPLC法具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点，已成为分析测定黄酮的主要方法。目前，利用HPLC法测定藤茶黄酮类物质的含量已有一定的文献报道，但主要是测定藤茶的二氢杨梅素、杨梅素和杨梅苷等个别黄酮类成分的含量，对其他黄酮类成分的测定很少涉及，更没有同时测定的报道。但藤茶由于品种、生态环境及栽培管理条件等方面的不同，其黄酮类成分含量存在显著差异。因此，建立一种简便、准确的分析测定藤茶中多种黄酮类成分的方法，对藤茶质量的控制及科学评价具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，该方法简单，精确度高，重现性好，可为科学评价和有效控制藤茶的内在质量提供可靠依据。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，包括以下步骤：1）混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液；2）供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎、过筛后，称取所得冻干粉0.1g于三角瓶中，加入10mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12h，4500r/min离心15min，残渣再加10mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25mL，得供试样品溶液；3）将所得混合标准品溶液与供试样品溶液分别经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量；其高效液相色谱的条件为：色谱柱：VisionHTC18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：无水甲醇-0.4wt%磷酸水溶液；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290nm，360nm；梯度洗脱程序为：0~20min，无水甲醇的体积浓度为30%；20~30min，无水甲醇的体积浓度由30%增加至40%；30~45min，无水甲醇的体积浓度由40%增加至42%；45~60min，无水甲醇的体积浓度由42%增加至50%。所述藤茶样品为藤茶的嫩茎叶。本专利技术的优点在于：1、在本专利技术确定的色谱条件下，60min内便可完成对藤茶中11种黄酮类成分的同时测定分析，且每一种黄酮类成分的色谱峰峰形尖锐，对称性好，其分离度均大于1.5，能够达到完全分离。2、本专利技术所建立的同时测定藤茶中11种黄酮类成分的分析方法简单、重复性好，结果准确可靠，可为藤茶的质量控制提供依据。附图说明图1为二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素在200-600nm波长范围内的吸收光谱图；图2为杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁、芹菜素在200-600nm波长范围内的吸收光谱图；图3为本专利技术混合标准品溶液在290nm（A）和360nm（B）波长下的液相色谱图；图4为尤溪藤茶样品1在290nm（A）和360nm（B）波长下的液相色谱图；其中，图中各峰标识：1-二氢杨梅素；2-二氢槲皮素；3-香橙素；4-杨梅苷；5-芦丁；6-杨梅素；7-柚皮素；8-槲皮素；9-橙皮素；10-山奈酚；11-芹菜素。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此。1实验部分1.1仪器与试药ThermoFisherLCQFleet高效液相色谱-质谱联用仪，配有四元梯度泵、二级管阵列检测器、自动进样器；SartoriusBT125D型分析天平（赛多利斯科学仪器(北京)有限公司）；高速离心机（Sigma3K-30）；紫外、可见分光光度计（ThermoScientificEvolution201）；冷冻干燥机(TelstarLyoQuest-55)。二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品均购自上海同田生物技术有限公司（纯度大于98%)，无水甲醇（色谱纯，Fisher公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。藤茶样品分别采集自福建尤溪县、贵州江口县，经福建农林大学生命科学学院植物学教研室鉴定为显齿蛇葡萄(AmpelopsisgrossedentataW.T.Wan)。1.2高效液相色谱条件：色谱柱：VisionHTC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：无水甲醇（A）-0.4wt%磷酸水溶液（B）；梯度洗脱条件：0~20min，30%A；20~30min，30%A-40%A；30~45min，40%A-42%A；45~60min，42%A-50%A；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290nm，360nm。1.3混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液，将其于-20℃条件下储存供液相分析用。1.4供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎过40目筛后密封，储存于-80℃备用；称取所得冻干粉0.1g于三角瓶中，加入10mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10 mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L‑1的混合标准品溶液；2）供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎、过筛后，称取所得冻干粉0.1 g于三角瓶中，加入10 mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12 h，4500 r/min离心15 min，残渣再加10 mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25 mL，得供试样品溶液；3）将所得混合标准品溶液与供试样品溶液分别经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量；其高效液相色谱的条件为：色谱柱：VisionHT C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：无水甲醇‑0.4wt%磷酸水溶液；流速：1.0 mL·min‑1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290 nm，360 nm；梯度洗脱程序为：0~20 min，无水甲醇的体积浓度为30%；20~30 min，无水甲醇的体积浓度由30%增加至40%；30~45 min，无水甲醇的体积浓度由40%增加至42%；45~60 min，无水甲醇的体积浓度由42%增加至50%。...
【技术特征摘要】
1.一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液；2）供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎、过筛后，称取所得冻干粉0.1g于三角瓶中，加入10mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12h，4500r/min离心15min，残渣再加10mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25mL，得供试样品溶液；3）将所得混合标准...
【专利技术属性】
技术研发人员：许明，郑金贵，刘江洪，曹晓华，杨志坚，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。