HPLC测定山楂含片熊果酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，旨在提供一种操作简便，专属性强的HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，该方法依次包括下述步骤：对照品溶液的制备；供试品溶液的制备；分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算，即得；制备标准曲线；属于化学检测技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种熊果酸的测定方法，具体地说，是一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，属于化学提取

技术介绍
山楂含片由山楂、白砂糖制成。山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理气，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治疗脂肪肝和肝纤维化等症状。本研究采用HPLC法对三箭草和堂山楂含片中指标成分熊果酸进行含量测定。经查阅文献，尚未有对其成分熊果酸做含量测定的报道。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种操作简便，专属性强的HPLC测定山楂含片熊果酸的方法。为解决上述问题，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，依次包括下述步骤：1)对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液；2)供试品溶液的制备精密量取本品粉末3g，置于50ml锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20min，放置室温后用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤
液，即得；3)分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算，即得。4)标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度作为对照品储备液，精密吸取对照品储备液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，按分别进样分别吸取上述对照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，熊果酸对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，得线性方程：Y＝1941.82X+0.185，r＝0.9999。进一步的，上述的一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，所述的流动相为乙腈-0.1％磷酸按体积比68:32。进一步的，上述的一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，所述的检测波长210nm。与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案检测方法简单，稳定，可重复性好，专属性强，有利于控制楂含片的质量。附图说明图1是熊果酸对照品HPLC色谱图；图2是样品HPLC色谱图；图3是阴性样品HPLC色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何人在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。本专利技术所涉及到的百分浓度，没有特别说明的，液体均为体积浓度，溶质为固体的指质量浓度。实施例11仪器与试药1.1仪器Aglient 1260生物惰性四元高效液相色谱仪，德国梅特勒-托利多XA205DU电子分析天平。1.2样品：草和堂山楂含片:广西梧州三箭制药有限公司保健品厂出品(批号20120816,20121217,20120320)；阴性样品：按处方缺山楂按工艺制备。熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所(批号：110742-200517，供含量测定用)；其他化学试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18100A柱(100mm×4.6mm，5μm)；乙腈-0.1％磷酸水溶液(68:32)为流动相；流速为1.0ml.min-1；检测波长为210nm。2.2对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。2.3供试品溶液的制备精密量取本品粉末3g，置于50ml锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20min，放置室温后用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，即得。2.4测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色
谱仪，测定峰面积积分值。按外标法以峰面积计算，即得。2.5专属性考察取阴性样品，按2.3制备阴性供试品溶液，按2.1色谱条件测定。结果表明在该色谱条件下，阴性对照无干扰，结果见图1至图3。2.6标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度(浓度为：1.078mg.mL-1)作为对照品储备液，精密吸取对照品储备液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度(浓度为：0.1078mg.mL-1)，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，按2.1色谱条件分别进样分别吸取上述对照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，熊果酸对照品进样量(mg)为横坐标(X)绘制标准曲线，得线性方程：Y＝1941.82X+0.185(r＝0.9999)结果表明：熊果酸在13.5～53.9ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。2.7精密度实验取同一份供试品溶液，按2.1色谱条件，连续进样5次，测定峰面积积分值，RSD＝0.3％。表明仪器精密度良好。2.8稳定性实验取同一份样品溶液，放置0、2、4、6、8、10h，按2.1色谱条件，分别测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算RSD为0.8％。结果表明待测物在10小时内稳定。2.9重复性实验精密称取同一批的样品(批号：20120816)，按2.3供试品溶液的制备方法试验，平行操作5份，按2.1色谱条件近样测定，按外标法以峰面积计算，结果平均含量是5.3mg.g-1，RSD＝0.6％。结果表明本方法重复性良好。2.10加样回收率实验精密称取已测定含量的山楂含片(批号：20120816)，(熊果酸含量为5.3mg.g-1)1.0g，平行取样9份。分别上述浓度为1.078mg.mL-1的熊果酸对照品溶液0.5、0.8、1ml，每个加样量平行做3份。按2.3供试品溶
液的制备方法制备供试品溶液、按2.1色谱条件测定，按外标法以峰面积计算回收率，平均回收率为97.6％(n＝9)，RSD＝0.9％。2.11样品含量测定按2.3供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，2.1的色谱条件,2.4测定法测定了本品2批样品中的熊果酸含量，结果见表2。表2、样品测定结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液；2)供试品溶液的制备精密量取本品粉末3g，置于50ml锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20min，放置室温后用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；3)分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算，即得。4)标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度作为对照品储备液，精密吸取对照品储备液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，按分别进样分别吸取上述对照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，熊果酸对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，得线性方程：Y＝1941.82X+0.185，r＝0.9999。

【技术特征摘要】
1.一种HPLC测定山楂含片熊果酸的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液；2)供试品溶液的制备精密量取本品粉末3g，置于50ml锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20min，放置室温后用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；3)分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算，即得。4)标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学松，黄林杰，韦韬，林冬杰，严飞龙，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西;45