一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法，本发明专利技术用甲醇提取干燥的固体药材或者保健品样品，利用高效液相色谱，以乙腈和0.5％(v/v)的磷酸为流动相，上样后梯度洗脱得到分离度良好的葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚的色谱图，根据各黄酮的特征峰积分面积计算出原材料中五种黄酮的含量。本发明专利技术的方法尤其适用于快速检测保健品或中草药中极性差异较大黄酮的鉴定和定量，评价其药效物质含量。

Method for simultaneously measuring five flavone in Chinese herbal medicine or health-care product

The invention discloses a method for the simultaneous determination of five flavonoids in Chinese herbal medicine or health products, medicine or health products dry solid sample was extracted with methanol in the invention, by using high performance liquid chromatography, with acetonitrile and 0.5% phosphoric acid (v/v) as mobile phase, sample after gradient elution separated good degree of Puerarin in two, hydrogen chromatogram, bayberry rutin, quercetin and kaempferol, calculate the content of five kinds of flavonoids in raw materials according to the integral area of characteristic peaks of flavonoids. The method of the invention is especially suitable for the rapid identification of the difference of the polarity of the flavone in the health care product or in the Chinese herbal medicine, and the evaluation of the material content of the efficacy of the flavone.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法
本专利技术涉及化学分析检测领域，尤其涉及一种利用HPLC同时检测五类极性差异较大黄酮类物质的方法。
技术介绍
黄酮类物质是诸多保健品和药材的药效成分，葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚等黄酮类物质为常见的黄酮类成分，广泛分布于中草药中。葛根素有增加脑血流、提高免疫、改善学习记忆、抗肿瘤、降血糖、解酒等作用；二氢杨梅素具有抗氧化、抗菌消炎、护肝、调节血糖血脂及对平滑肌等作用；芦丁具有降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，抗炎、利尿、解痉、镇咳、降血脂等方面的作用；槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗菌、抗病毒，清除体内自由基、抑制恶性肿瘤生长和转移等作用；山奈酚具抗氧化、抗炎、抑制肿瘤生长及保护肝细胞等作用。随着黄酮生理功效研究的深入，诸多保健品加入了含有保健功能的黄酮的中草药，而这些黄酮的含量也成为评价保健品有效成分的检测指标。然而不同黄酮化合物极性差异较大，这样就导致同时检测极性差异较大的多种黄酮用时过长影响检测效率。另外，天然药材中常存在类似结构的黄酮，在用一种洗脱体系分离某一类黄酮时会导致另外一类黄酮不易分离。因此，建立一种快速、准确的分析测定多种极性差异较大的黄酮类成分的方法，对含多种黄酮的保健品和中药材的品质控制及科学评价具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种利用高效液相色谱同时检测多种极性黄酮的方法，该方法简单，精确度高，重现性好，可为科学评价和有效控制含上述五类黄酮的保健品和中草药的内在质量提供可靠依据。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的，一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法，所述五类黄酮类物质是葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚，所述方法包括以下步骤：(1)样品制备：保健品或中草药冷冻干燥后，经粉碎磨成粉末状，过80目筛；将粉末按质量体积比(g/mL)1:200加入甲醇中，摇动20min后，超声处理60min，3000g离心10min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，得到样品，存于样品瓶中准备进样；(2)将步骤1制备好的样品用反相高效液相色谱分析，即可测定样品中葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素、山奈酚的峰面积y1、y2、y3、y4、y5；采用的色谱柱为C18柱；进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃；检测波长：254nm和290nm；流动相：有机A相为乙腈；无机B相为含有体积分数为0.5％(v/v)的磷酸的水溶液；采用梯度洗脱，以有机A相在流动相中的体积含量计，洗脱程序为：0-10min，16％A-13％A；10-15min，13％A-15％A；15-20min，15％A-35％A；20-35min，35％A-45％A；35-43min，45％A-15％A；(3)获得样品中葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素、山奈酚的质量体积浓度(mg/L)：由式y1＝39.977x1-1.251可得到样品中葛根素的质量体积浓度x1；由式y2＝21.918x2+19.74可得到样品中二氢杨梅素的质量体积浓度x2；由式y3＝19.398x3+12.15可得到样品中芦丁的质量体积浓度x3；由式y4＝30.844x4-7.8948可得到样品中槲皮素的质量体积浓度x4；由式y5＝35.457x5-12.72可得到样品中山奈酚的质量体积浓度x5；(4)获得中草药或者保健品中葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素、山奈酚的质量含量(mg/g)：葛根素的质量含量为0.2x1；二氢杨梅素的质量含量为0.2x2；芦丁的质量含量为0.2x3；槲皮素的质量含量为0.2x4；山奈酚的质量含量为0.2x5。本专利技术的有益效果是，本专利技术用甲醇提取干燥的固体药材或者保健品样品，利用高效液相色谱，以乙腈和0.5％(v/v)的磷酸为流动相，上样后梯度洗脱得到分离度良好的葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚的色谱图，根据各黄酮的特征峰积分面积计算出原材料中五种黄酮的含量。本专利技术的方法尤其适用于快速检测保健品或中草药中极性差异较大黄酮的鉴定和定量，评价其药效物质含量。本专利技术提供的检测方法可将保健品和中药材中的葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚等黄酮类物质一次性分离开，操作简单、准确可靠，节省时间。附图说明图1是黄酮标准样品色谱图；其中，检测波长为245nm，峰1，葛根素；峰2，二氢杨梅素；峰3，芦丁；峰4，槲皮素；峰5，山奈酚；图2是黄酮标准样品色谱图；其中，检测波长为290nm，峰1，葛根素；峰2，二氢杨梅素；峰3，芦丁；峰4，槲皮素；峰5，山奈酚；图3是保健品提取物样品色谱图；其中，检测波长为245nm，峰1，葛根素；峰2，二氢杨梅素；峰3，芦丁；峰4，槲皮素。图4是保健品提取物样品色谱图；其中，检测波长为290nm；峰1，葛根素；峰2，二氢杨梅素；峰3，芦丁；峰4，槲皮素。具体实施方式下面根据实施例详细描述本专利技术，本专利技术的目的和效果将变得更加明显。实施例1、5种黄酮类物质的标样定性分离检测1、样品制备：配制二氢杨梅素75.8μg/mL、山奈酚66μg/mL、葛根素34μg/mL、槲皮素88.4μg/mL、芦丁38.6μg/mL的混合液；2、将步骤1制备好的样品用反相高效液相色谱分析，分析条件如下：色谱柱：ZorbaxEclipseXDB-C18；进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃；检测波长：254nm和290nm；流动相：有机A相为乙腈；无机B相为含有体积分数为0.5％(v/v)的磷酸的水溶液；采用梯度洗脱，洗脱程序为：0-10min，16％A-13％A；10-15min，13％A-15％A；15-20min，15％A-35％A；20-35min，35％A-45％A；35-43min，45％A-15％A。所得标样色谱图如图1和图2所示：峰1，葛根素；峰2，二氢杨梅素；峰3，芦丁；峰4，槲皮素；峰5，山奈酚。不同黄酮依出峰时间的不同而区分，其中二氢杨梅素在254nm波长无吸收峰，在290nm波长有吸收峰，葛根素极性最大出峰时间最早，其它三种黄酮对应特定的出峰时间。该体系流动相洗脱体系中极性组分先升再降使得非目标检测物质快速洗脱，相比已有洗脱体系，检测时间减少。通过控制流动相梯度洗脱分离极性差异较大的黄酮，可以很好的分离多种极性差异较大的黄酮。实施例2、检测方法的精密度、稳定性、重现性和加样回收率评估精密度试验分别取6.8μg/mL、13.6μg/mL、20.4μg/mL、27.2μg/mL、34μg/mL葛根素对照品按对照品按10μL进样量各重复进样2次，记录葛根素标准液的峰面积，计算相对标准偏差(RSD)，不同进样量的相对标准偏差分别为0.05％、0.13％、0.26％、0.00％、0.42％。分别取6.96μg/mL、13.92μg/mL、20.88μg/mL、27.84μg/mL、34.8μg/mL二氢杨梅素对照品按10μL进样量各重复进样3次，记录二氢杨梅素标准液的峰面积，计算相对标准偏差(RSD)，不同进样量的相对标准偏差分别为0.35％、0.38％、0.06％、0.04％、0.38％。分别取10.56μg/mL、21.12μg/mL、31.68μg/mL、42.24本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法，其特征在于，所述五类黄酮类物质是葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚，所述方法包括以下步骤：(1)样品制备：保健品或中草药冷冻干燥后，经粉碎磨成粉末状，过80目筛；将粉末按质量体积比(g/mL)1:200加入甲醇中，摇动约20min后，超声处理约60min，3000g离心10min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，得到样品，存于样品瓶中准备进样。(2)将步骤1制备好的样品用反相高效液相色谱分析，即可测定样品中葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素、山奈酚的峰面积y

【技术特征摘要】
1.一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法，其特征在于，所述五类黄酮类物质是葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素和山奈酚，所述方法包括以下步骤：(1)样品制备：保健品或中草药冷冻干燥后，经粉碎磨成粉末状，过80目筛；将粉末按质量体积比(g/mL)1:200加入甲醇中，摇动约20min后，超声处理约60min，3000g离心10min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，得到样品，存于样品瓶中准备进样。(2)将步骤1制备好的样品用反相高效液相色谱分析，即可测定样品中葛根素、二氢杨梅素、芦丁、槲皮素、山奈酚的峰面积y1、y2、y3、y4、y5；采用的色谱柱为C18柱；进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温约30℃；检测波长：254nm和290nm；流动相：有机A相为乙腈；无机B相为含有体积分数为0.5％(v/v)的磷酸的水溶液；采用梯度洗脱，以有机A相在流动相中的体积含量计，洗脱程序为：0-10min，16％A-13％A；10-15m...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈晓霞，孙健，刘聪，赵那，吴加梁，王志安，沈宇峰，
申请(专利权)人：浙江省中药研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33