本发明专利技术提供了一种基于UPLC/Q‑TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法，包括两个步骤：1）用40%乙醇超声提取淫羊藿药材；2）采用超高效液相色谱‑飞行时间质谱联用技术对淫羊藿药材中的淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2"‑鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B和宝藿苷II成分进行定性和定量测定。本发明专利技术提供一种利用液质联用高效对淫羊藿药材中的多种指标性成分进行定性定量检测的方法，本方法检测效率高，结果准确，在淫羊藿药材生药的质量控制中具有显著地意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种色谱方法，更具体的说涉及一种基于UPLC/Q-TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法。技术背景黄酮类化合物(flavonoids)是一类重要的植物次级代谢产物，在植物花色形成、花粉萌发、吸引授粉虫媒和种子传播、抵抗紫外线辐射、防止病原微生物侵染以及植物与微生物互相识别等过程中均发挥重要作用。此外,黄酮类还具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，是一些重要中药的主要有效成分。已证实淫羊藿药用成分黄酮类化合物(简称“有效黄酮类”)具有调节雄性发育、阻止骨质疏松、调节免疫功能、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗肝毒素、舒张血管等生理功能,因此淫羊藿被认为是我国应用最广泛、最悠久、最具开发潜力的中药之一。淫羊藿药材的化学成分主要有黄酮类化合物和多糖类化合物，淫羊藿药材中有效成分主要是指黄酮类化合物，淫羊藿总黄酮的含量占1.01％-8.81％，《药典》规定总黄酮不低于5％。淫羊藿药材中特征成分是淫羊藿苷，含量约0.1897％-1.8742％，《药典》规定不得少于0.50％。其中，主要的淫羊藿黄酮类成分有淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B、宝藿苷II等10种。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种基于UPLC/Q-TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法，包括两个步骤：1)用40％乙醇超声提取淫羊藿药材；2)采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术对淫羊藿药材中的淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B和宝藿苷II成分进行定性和定量测定。所述超高效液相色谱的色谱条件为：50mm×2.1mm，3μm，C18色谱柱Phenomenex；流动相：0.1％甲酸水溶液和乙腈，流速：0.2mL/min；柱温：40℃；进样量：2μL，梯度洗脱条件为：0～8min，40％～53％乙腈；8～8.1min，40％乙腈；8.1～10min，40％乙腈。所述飞行时间质谱为Q-TOF高分辨质谱，Q-TOF高分辨质谱的质谱条件为：离子源：ESI，正/负离子模式分别采集，IS：+5500V/-4500V；GS1：50Psi；CUR：20Psi；GS2：45Psi；TEMP：550℃；DP：65V；CE：45V；CES：15V；检测模式为信息关联采集模式，多重质量亏损和动态背景扣除为触发二级的条件，满足该条件优先进行二级扫描。本专利技术的有益技术效果是：本专利技术提供一种利用液质联用高效对淫羊藿药材中的多种指标性成分进行定性定量检测的方法，本方法检测效率高，结果准确，在淫羊藿药材生药的质量控制中具有显著的意义。附图说明图1混合对照品的XIC图；图2混合对照品的TIC图；图3样品的的XIC图；图4样品的的TIC图；备注：本专利技术中设备是采用AB公司(ABSCIEX公司)的API4000型三重四级杆质谱仪，未接紫外检测器模块，检测模式为MRM+，共10个标准品，且含定性、定量离子对共20个，所以从工作站软件中只能得到XIC图和TIC图。“图3图4质谱图”是工作站自带定量软件MultiQuant3.0根据定量参数提取的定量离子图可以与图2的提取离子重叠图一一对应，所以没有必要再对每个离子进行标注。具体实施方式实施例1色谱条件的考察1.色谱及质谱条件UPLC条件：色谱柱PhenomenexC18柱(50mm×2.1mm，3μm)；流动相：A为甲酸水溶液(0.1％)，B为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为：0～8min，40％～53％B；8～8.1min，40％B；8.1～10min，40％B。流速：0.2mL/min；柱温：40℃；进样量：2μL。MS/MS质谱条件：离子源：ESI；IS：5500V；GS1：55Psi；CUR：15Psi；GS2：55Psi；TEMP：600℃；检测模式：MRM+；碰撞气：Medium。定量离子对、定性离子对去簇电压(Declusteringpotential，DP)、碰撞能量(Collisionenergy，CE)。Q-TOF高分辨质谱条件：离子源：ESI，正/负离子模式分别采集，IS：+5500V/-4500V；GS1：50Psi；CUR：20Psi；GS2：45Psi；TEMP：550℃；DP：65V；CE：45V；CES：15V；检测模式为IDA(信息关联采集模式)，多重质量亏损(MMDF)和动态背景扣除(DBS)为触发二级的条件，满足该条件优先进行二级扫描。2.对照品贮备液制备分别取淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B、宝藿苷II对照品适量，精密称定，置于同一25mL容量瓶中，加色谱甲醇适量使溶解，制成含淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B、宝藿苷II分别为0.1024、0.1004、0.0972、0.1044、0.1028、0.0992、0.1004、0.1068、0.1020、0.0984mg/mL的混合对照品贮备溶液。3.供试品溶液制备药材预处理：将不同产地新鲜的药材样品洗净，置烘箱中60℃烘干，取干燥叶片于高速粉碎机中粉碎，过3号筛备用。供试品溶液制备：取淫羊藿药材粉末约0.2g，精密称定，置10mL量瓶中，加入40％乙醇适量，超声40min，取出，放冷至室温，再以40％乙醇定容至刻度，混匀，过0.22μm微孔滤膜，即得。4.检测限的确证取上述项下的对照品储备液适量，进行逐级稀释，按照上述色谱、质谱条件进样检测，以目标化合物S/N＝3时的浓度做为其检测限；淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B、宝藿苷II的检测限分别为：0.47ng/mL、0.72ng/mL、0.89ng/mL、0.87ng/mL、0.52ng/mL、0.67ng/mL、0.72ng/mL、0.43ng/mL、0.58ng/mL、0.12ng/mL。5.线性关系考察取上述混合对照品储备液适量，用色谱甲醇逐级稀释为9个不同浓度的系列混合对照品溶液，0.22μm微孔滤膜滤过，按上述色谱、质谱条件分别进样2μL，以峰面积(Y)为纵坐标，以进样浓度(X)为横坐标绘制标准曲线。6.精密度实验精密吸取混合对照品溶液2μL(淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B、宝藿苷II含量分别为：512ng/mL、502ng/mL、486ng/mL、522ng/mL、514ng/mL、496ng/mL、502ng/mL、534ng/mL、510ng/mL、492ng/mL)，连续进样5次，分别记录10种成分的峰面积，计算RSD值，结果淫羊藿苷为1.38％、朝藿定A为1.72％、朝藿定B为2.37％、朝藿定C为2.15％、淫羊藿次苷I为2.34％、淫羊藿次苷II为2.78％、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于UPLC/Q‑TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法，其特征在于：包括两个步骤：1）用40%乙醇超声提取淫羊藿药材；2）采用超高效液相色谱‑飞行时间质谱联用技术对淫羊藿药材中的淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2‑鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B和宝藿苷II成分进行定性和定量测定。
【技术特征摘要】
1.一种基于UPLC/Q-TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法，其特征在于：包括两个步骤：1）用40%乙醇超声提取淫羊藿药材；2）采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术对淫羊藿药材中的淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷II、2\-鼠李糖基淫羊藿次苷II、箭藿苷A、箭藿苷B和宝藿苷II成分进行定性和定量测定。2.根据权利要求1所述的基于UPLC/Q-TOF的淫羊藿多种黄酮成分快速测定方法，其特征在于：所述超高效液相色谱的色谱条件为：50mm×2.1mm，3μm，C18色谱柱Phenomenex；流动相：0.1%甲酸水溶液和乙腈，流速：0.2mL/min；柱温：40...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘翔，秦伟瀚，瞿显友，阳勇，张植玮，危永胜，潘瑞，
申请(专利权)人：重庆市中药研究院，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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