一种淫羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用制造技术

本发明专利技术提供一种羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用。该淫羊藿总黄酮在促进衰老小肠干细胞的数量增殖及分化能力上的应用以及调节衰老小肠干细胞微环境上的应用，所述的细胞微环境为Wnt/β‑catenin信号通路与BMP信号通路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种淫羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用，属于医学制药领域。
技术介绍
随着人类寿命的不断提高，老龄化相关问题日益严重，而近期相关研究提示机体衰老始于肠道的衰老。覆盖于小肠表面的上皮细胞层是哺乳动物体内自我更新能力最强的组织结构，处于小肠隐窝最底部的小肠干细胞(ISC)是小肠黏膜上皮细胞不断更新的源泉。目前发现有两种不同类型的小肠干细胞群：一种可迅速循环，位于隐窝基底潘氏细胞之间，称为隐窝基底柱状细胞(cryp base columnar cells，CBC)，为活化的干细胞，其特异性标记物为Lgr5(leucine-rich-repeat-containingG-protein-coupledreceptor-5)；而另一种则处于静止状态，称为DNA标记滞留细胞(DNA-label-retaining cells，LRC)，其特异性标记物为Bmi1(Bmilpolycombringfingeroncogene 1)。淫羊藿是我国传统中草药，具有补肾阳，强筋骨的功效，淫羊藿总黄酮(TotalFlavonesof Epimedium,TFE)为其主要药效成分，淫羊藿苷(Icariin，ICA)是TEF的主要活性成分。研究表明，TFE能改善多个物种实验模型的衰老相关性退化，延缓衰老相关疾病的发生发展，延长寿命。但TFE对衰老大鼠的小肠干细胞的数量及功能是否具有调节作用尚不明确。本研究探讨了衰老大鼠小肠干细胞数量及增殖分化能力的变化，并进一步研究了其微环境Wnt和BMP信号通路的变化及淫羊藿总黄酮对上述改变的调节作用。
技术实现思路
本专利技术提供一种淫羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用。具体为该淫羊藿总黄酮在促进衰老小肠干细胞的数量增殖及分化能力上的应用。该淫羊藿总黄酮调节衰老小肠干细胞微环境上的应用。淫羊藿可调节Wnt/β-catenin信号通路与BMP信号通路。附图说明图1为淫羊藿总黄酮对小肠形态学的影响(×100)，其中a：6月龄组b：24月龄组c：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；d：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；e：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)。图2为淫羊藿总黄酮对小肠干细胞增殖分化的影响(×200)。其中A、B组为：PAS染色及计数；C、D组为：PCNA染色及计数。A、C中，a：6月龄组b：24月龄组c：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；d：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；e：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)。图3为淫羊藿总黄酮对小肠干细胞数量的影响(×200)，其中，A为免疫荧光检测不同组别Lgr5的表达，B为Western Blot检测不同组别Bmi1的表达，C为Western Blot条带灰度分析不同组别Bmi1的表达。A中a、b、c、d、e分别为a：6月龄组b：24月龄组c：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；d：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；e：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)。与6月龄组比较：*P﹤0.05,**P﹤0.01；与24月龄组比较，#P﹤0.05,##P﹤0.01。图4为淫羊藿总黄酮对小肠Wnt/β-catenin信号通路的影响，其中，A为Western Blot检测不同组别Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达，B为Western Blot条带灰度分析不同组别Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。A中，adult：6月龄组；aging：24月龄组；TFE-10：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；TFE-20：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；TFE-60：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)；B中，a为Western Blot条带灰度分析不同组别p-GSK-3β/GSK-3β比值，b为Western Blot条带灰度分析不同组别Dkk1/actin比值，c为Western Blot条带灰度分析不同组别β-catenin/actin比值。与6月龄组比较：*P﹤0.05,**P﹤0.01；与24月龄组比较，#P﹤0.05,##P﹤0.01。图5为淫羊藿总黄酮对小肠BMP信号的影响，其中A为BMP4免疫组化检测不同组别表达，B为BMP4免疫组化图像分析，C为Western Blot检测不同组别BMP2的表达，D为Western Blot条带灰度分析不同组别BMP2/actin比值，A中，a、b、c、d、e分别为a：6月龄组b：24月龄组c：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；d：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；e：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)。adult：6月龄组；aging：24月龄组；TFE-10：淫羊藿总黄酮低剂量组(10mg/kg)；TFE-20：淫羊藿总黄酮中剂量组(20mg/kg)；TFE-60：淫羊藿总黄酮高剂量组(60mg/kg)。与6月龄组比较：*P﹤0.05,**P﹤0.01；与24月龄组比较，#P﹤0.05,##P﹤0.01。具体实施方式材料与方法实验药物淫羊藿总黄酮购自仁诚生物科技有限公司，采用1％的羧甲基纤维素钠进行超声助溶，制备相应各剂量的TFE溶液。实验动物SPF级雄性SD大鼠，购于三峡大学医学院实验动物中心，生产许可证号：SCXK(鄂)2011-0061，分笼饲养，自由饮水和摄食。按其不同发育阶段分为6月龄成年对照组(adult)和24月龄衰老模型组(aging)，大鼠从18月龄开始，淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组分别给与TFE 10mg/kg、20mg/kg、60mg/kg灌胃至24月龄，每天1次，每周给药6天，连续6个月。实验试剂总蛋白提取试剂盒、BCA法蛋白定量试剂盒：北京普利莱基因技术有限公司；一抗β-actin、Lgr5、Dkk1：Santa Cruz公司；Bmi1,BMP4,β-catenin，GSK3β,p-GSK3β：Abcam公司；PCNA、BMP2：苏州睿灜生物技术有限公司。羊抗兔、兔抗鼠、兔抗羊二抗：武汉科瑞生物技术有限公司，DAB试剂盒：武汉博士德生物。主要仪器Western blot垂直电泳槽：美国Bio-Rad公司；化学发光成像系统(Bioshine ChemiQ4800mini)：欧翔(上海)科学仪器有限公司；超薄切片机(ULTRACUTR)：Leica公司(德国)摊片烤片机(CS-V1)：宏业医用(湖北孝感)仪器有限公司；光学倒置显微镜(CX41)：Olympus公司(日本)；正置荧光显微镜(NIKON ECLIPSE CI)，日本尼康。HE染色和PAS染色大鼠麻醉后行心脏灌注，分离肠道组织取胃下端20cm处0.3-0.5mm空肠组织，经4％多聚甲醛固定24h，后常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色和PSA染色。每组随机选取5只大鼠，每只大鼠小肠各取5张不连续切片，每张切片中选取5根柱状细胞排列整齐且最长的肠绒毛，HE染色光学显微镜下观察不同组别小肠形态学变化，测量绒毛长度，隐窝深度，并计算绒毛/隐窝值(V/C值)。PAS染色计数不同组别每100个肠粘膜上皮细胞间杯状细胞的数量。免疫组织(荧光)化学染色本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淫羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用。

【技术特征摘要】
1.一种淫羊藿总黄酮在制备抗机体衰老的药物上的应用。2.权利要求1所述的应用，其特征在于，该淫羊藿总黄酮在促进衰老小肠干细胞的数量增殖及分化能力上的应用。3.权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁丁，张长城，顿耀艳，王婷，刘朝奇，何毓敏，周志勇，赵海霞，陈静，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42