一种结直肠癌生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种结直肠癌生物标志物，所述生物标志物为miR‑92a；本发明专利技术还提供了一种用于诊断结直肠癌的试剂盒，其包含上述结直肠癌生物标志物，还包括PCR反应常用的酶和试剂；本发明专利技术还进一步提供了上述结直肠癌生物标志物在制备用于结直肠癌诊断药物中的应用以及在制备用于抑制结直肠癌肿瘤血管新生药物中的应用。本发明专利技术提供的结直肠癌生物标志物在结直肠癌细胞和组织中高表达，与肿瘤血管新生增加密切相关，可通过抑制PTEN的表达发挥其促进结直肠癌血管新生的生物学功能。

【技术实现步骤摘要】
一种结直肠癌生物标志物及其应用
本专利技术涉及涉及生物医学
，尤其涉及一种结直肠癌生物标志物及其对结直肠癌诊断和抑制结直肠癌肿瘤血管新生中的应用。
技术介绍
结直肠癌(colorectalcancer，CRC)是人类常见的消化系统恶性肿瘤，发病率居恶性肿瘤的第3位，起病隐匿，预后较差川。近年研究发现，microRNAs(miRNAs)是一类独特的非编码小RNA，在肿瘤细胞中高表达或低表达起到癌基因或抑癌基因的作用，使细胞增殖和分化失去控制，导致肿瘤的发生发展。研究证实，miR-92a在结直肠癌等多种肿瘤组织中异常高表达，并与结肠癌的淋巴结转移和预后相关，因此，miR-92a被认为是一种癌基因，可能在CRC发生发展中起着关键调控作用。具有非可控的血管新生能力是恶性肿瘤的基本生物学特征之一，肿瘤的生长、侵袭和转移均与血管新生密切相关。研究发现，miR-92a与血管内皮细胞形成、肿瘤血管新生有关。然而，目前有关miR-92a对结直肠癌血管新生功能的影响及其调控机制尚不清楚。本专利技术通过检测miR-92a在结直肠癌组织中的表达水平，分析其与肿瘤血管新生的相关性；通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平，观察miR-92a对HUVEC血管内皮细胞新生功能的影响及对其下游潜在靶点PTEN表达的调控作用，探讨miR-92a影响结直肠癌血管新生的作用及机制，为结直肠癌的分子靶向治疗提供实验依据。
技术实现思路
鉴于现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种结直肠癌生物标志物及其对结直肠癌诊断和抑制结直肠癌肿瘤血管新生中的应用。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种结直肠癌生物标志物，所述生物标志物为miR-92a。本专利技术采用qRT-PCR方法检测了广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达；免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvesseldensity，MVD)，Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic，inhihitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平，采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响，免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果表明：结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01)；4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05)；结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01)，miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r＝0.580，P＝0.01)；上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HLJVEC小管形成(P<0.05)；上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。因此得出：miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达，与肿瘤血管新生增加密切相关；miR-92a可通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。根据本专利技术，所述结直肠癌生物标志物miR-92a，其可以反映出在结直肠癌患者及健康者中的差异表达，体现了对结直肠癌诊断的高敏感度和高特异性。第二方面，本专利技术还提供了一种用于诊断结直肠癌的试剂盒，该试剂盒包含与结直肠癌相关的miRNA标志物；所述标志物为miR-16、miR-21和miR-92a的组合。本专利技术提供的用于诊断结直肠癌的试剂盒中，除了包含上述结直肠癌生物标志物外，其还包括PCR反应常用的酶和试剂。具体地，试剂盒中还含有PCR酶、裂解液、TE缓冲液、超纯水以及Marker等，其中裂解液例如可以是由50mMTris-base，EDTA2mM，pH为8.0以及裂解液总体积5％的tritonX-100组成的混合溶液；PCR酶例如可以含有10mM的Tris-base，50mM的KCl，3mM的MgCl2、25mM的dNTPMixture以及0.5U的TaqDNApolymerase/μl。本专利技术对于试剂盒中除了结直肠癌生物标志物以外的其它试剂不做特殊限定，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择。第三方面，本专利技术还提供了根据第一方面所述的结直肠癌生物标志物在制备用于结直肠癌诊断药物中的应用。第四方面，本专利技术还提供了根据第一方面所述的结直肠癌生物标志物在制备用于抑制结直肠癌肿瘤血管新生药物中的应用。根据本专利技术，所述结直肠癌生物标志物miR-92a在结直肠癌组织和细胞中的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01)和正常肠上皮组织(P<0.05)；结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01)，miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r＝0.580，P＝0.01)；因此miR-92a在结直肠癌细胞和组织中均可高表达，并与肿瘤血管新生增加密切相关，可将其作为结直肠癌新的分子标志物及治疗靶点。与现有技术方案相比，本专利技术至少具有以下有益效果：本专利技术提供的结直肠癌生物标志物miR-92a不仅在结直肠癌组织和细胞中都有高表达，而且与肿瘤血管新生增加密切相关，因此可以成为结直肠癌的分子标志物及治疗靶点从而实现对结直肠癌的诊断和治疗。附图说明图1是miR-92a在结直肠癌组织及细胞中的表达水平，其中图1-A是miR-92a在结直肠癌组织与癌旁组织中的表达对比，图1-B是miR-92a在结直肠癌细胞和正常肠上皮组织中的表达对比；图2是结直肠癌组织miR-92a表达与肿瘤血管新生的相关性，其中图2-A是CRC和邻近组织中的微血管(左：CRC组织；右：肿瘤的邻近组织；箭头：微血管与标记的CD31阳性表达，IHC×400)；图2-B是CRC中CD31阳性微血管密度(MVD)与邻近组织中的对比；**P<0.01；图2-C是miR-92a表达和MVD在CRC组织中的表达相关性；图3是转染miR-92amimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞miR-92a表达水平；图4是结直肠癌细胞miR-92a高表达或抑制表达对HUVEC小管形成能力的影响，其中图4-A是人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)在来自具有miR-92a过表达的HCT116细胞的条件培养基中的管形成；图4-B是人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)在来自具有miR-92a过表达的SW620细胞的条件培养基中的管形成；图4-C是图4-A中的封闭血管数目；图4-D是图4-C中的封闭血管数目；*P<0.05；图5是miR-92a高表达或抑制表达对结直肠癌细胞PTEN蛋白表达的影响，其中，图5-A是通过TargetScan软件预测的miR-92a与磷酸酶和张力蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结直肠癌生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为miR‑92a。

【技术特征摘要】
1.一种结直肠癌生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为miR-92a。2.根据权利要求1所述的结直肠癌生物标志物，其特征在于，所述生物标志物在结直肠癌细胞和组织中高表达，与肿瘤血管新生增加相关。3.一种用于诊断结直肠癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含结直肠癌生物标志物；所述生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜冀晖，黄虞，王秀，
申请(专利权)人：深圳市南山区人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44