一种耐高温葡萄糖异构酶突变体及其应用制造技术
A high temperature glucose isomerase mutant and its application
The invention discloses a high temperature glucose isomerase mutant and its application in the preparation of D glucose isomerization in the preparation of D fructose. The mutant is obtained by single or multiple mutation of one or more of the eighty-ninth, 136th, 352nd bits of the amino acid sequence shown by the SEQ ID NO.1. The invention realizes high expression of high conversion glucose isomerase gene, and the enzyme activity is 7.23U/mg. The optimum reaction temperature of the ToGI mutant in the present invention is 110 C, and the catalyst has a high concentration of 61.3% of the D fructose in the high fructose syrup that catalyzes the preparation of the 400g/L glucose D glucose at high temperature at high temperature.
【技术实现步骤摘要】
一种耐高温葡萄糖异构酶突变体及其应用(一)
本专利技术涉及一种葡萄糖异构酶突变体，具体地说涉及利用基因突变技术制备的具备超高反应温度的葡萄糖异构酶突变体的方法，以及该突变体在超高温下能稳定的异构化葡萄糖生产超高D-果糖浓度高果糖浆的应用。(二)
技术介绍
葡萄糖异构酶(glucoseisomerase，简称GI，EC5.3.1.5)，在体外主要用于催化D-葡萄糖异构化生成D-果糖，是工业上利用生物转化法制备高果糖浆的关键酶。根据GI的一级结构，可以将其分为两类，即I类和II类酶。与I类GI相比，II类GI的肽链N端含有多余的40-50个氨基酸残基(DengH.etal.，BioprocessandBiosystemsEngineering，37：1211-1219，2014)。高果糖浆(highfructosecornsyrup，简称HFCS)是葡萄糖和果糖的混合物，是一种重要的甜味剂。高果糖浆具有溶解度高、化学和热稳定性好、渗透压大、吸潮性和保湿性强、与其它添加剂混合不影响食品风味等优势。根据其果糖含量的不同，高果糖浆主要有3种产品：HFCS-42、HFCS-5...
【技术保护点】
一种耐高温葡萄糖异构酶突变体，其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第89位、第136位、第352位中的一个或多个进行单突变或多突变获得的。
【技术特征摘要】
1.一种耐高温葡萄糖异构酶突变体，其特征在于所述突变体是将SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第89位、第136位、第352位中的一个或多个进行单突变或多突变获得的。2.如权利要求1所述耐高温葡萄糖异构酶突变体，其特征在于所述突变体是将第89位、第136位、第352位的氨基酸突变为丙氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸或亮氨酸中的一种。3.如权利要求1所述耐高温葡萄糖异构酶突变体，其特征在于所述突变体为下列之一：(1)将SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第89位苏氨酸突变为谷氨酰胺；(2)将SEQIDNO.1所示氨基酸序列第89位的苏氨酸突变为谷氨酰胺、第136位色氨酸突变为丝氨酸，同时第352位苏氨酸突变为亮氨酸。4.一种权利要求1所述耐高温葡萄糖异构酶突变体在催化D-葡萄糖异构化制备D-果糖中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含耐高温葡萄糖异构酶突变体基因的重组菌经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以D-葡萄糖为底物，以锰盐为助剂，以pH8.0、50mM的Na2HPO4/NaH...
【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，贾东旭，郑裕国，刘子健，王腾，金利群，王远山，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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