一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺制造技术

本发明专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，属于枯草芽孢杆菌领域，旨在解决在发酵枯草芽孢杆菌的过程中杂菌较多的问题。该枯草芽孢杆菌的发酵工艺包括：一级种子培养、二级种子培养、三级种子培养、生成发酵物制品，其中，所述固体培养基，其原料包括，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶、1‑(2‑(β‑D‑吡喃葡萄糖氧基)‑4,6‑二羟基苯基)‑3‑(4‑羟基苯基)‑丙酮、D‑2,3,5,6‑四羟基‑2‑己烯酸‑γ‑内酯。利用该发酵工艺大大降低了杂菌的污染，制得到的枯草芽孢杆菌的制品的产品性能大大提高，对雏鸡的生长具有良好的促进作用，是一种具有生物活性的饲料添加剂。

A fermentation process of Bacillus subtilis

The invention relates to a fermentation process of Bacillus subtilis, which belongs to the field of Bacillus subtilis and aims to solve the problem of more miscellaneous bacteria in the process of Bacillus subtilis. The fermentation technology of Bacillus subtilis includes first class seed culture, two stage seed culture, three grade seed culture, and fermenting products. The solid medium, including straw, corn flour, bran, two ethanethiethyl crosslinked dextran gel, and 1 D (beta glucosanoxyl) 4,6, two hydroxyphenyl) 3, 4 (hydroxyphenyl) acetone, D, 2,3,5,6, four, hydroxy, 2, hexenoic acid, gamma, lactone. The fermentation technology greatly reduced the contamination of the mixed bacteria. The products of Bacillus subtilis produced greatly improved the product performance, and had a good promoting effect on the growth of the chicks. It was a kind of biological activity feed additive.

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺
本专利技术涉及枯草芽孢杆菌领域，更具体的说，它涉及一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺。
技术介绍
药物饲料添加剂，尤其是抗生素饲料添加剂的利用，在动物防病治病等方面发挥着重要的作用，但是，与此同时，也给畜牧业生产和人类带来一定的影响，长期使用抗生素会使动物产生耐药性以及内源性感染等问题，因此导致抗生素的应用逐渐受到限制。微生物饲料添加剂是根据微生态学理论研制的含有对动物有益微生物的活菌制品，他们通过维持动物肠道内微生物态平衡而挥发作用，具有促进动物生长发育，提高动物机体免疫力等多种功能，且无污染、无残留、无耐药性、对环境无害等，是一类新型绿色环保的饲料添加剂。目前，常用的禽畜用益生菌制品有芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌等。其中，芽孢杆菌具有对外界不良环境有很强的抵抗力，能耐60℃以上的高温，保存时间长，培养容易，便于加工制成各种制品，且制品的效果稳定，已经在畜牧业中广泛使用。芽孢杆菌的培养基种类有多种，在牛肉汤的基础上，常采用玉米粉、豆饼、麸皮等制备成固体培养基进行发酵。但是在固体培养基上发酵的过程中，由于原料成分复杂，芽孢杆菌经过多级培养和开放式发酵易受到杂菌感染，产品质量难以达到标准。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，利用该发酵工艺大大降低了杂菌的污染，发酵后的枯草芽孢杆菌应用于禽类时，能大大促进禽类的生长，是一种具有生物活性的饲料添加剂。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，至少包括以下步骤：S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基20-30kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28-36℃的有氧条件下培养12-18h，成为一级种子；S2、将一级种子接种至液体培养基30-40kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28-36℃的有氧条件下培养24-32h，成为二级种子；S3、将二级种子接种在液体培养基20-30kg中培养，28-36℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵的方式培养32-34h，培养结束后恒温静置12-16h，成为三级种子；S4、将三级种子接种至固体培养基68-81.6kg上，发酵培养32-36h后，粉碎，得到枯草芽孢杆菌的发酵物制品；其中，所述固体培养基，其原料包括，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯。优选的，所述固体培养基中，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶混合物、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯的质量比为2:2:1:1:0.5:0.3。优选的，所述固体发酵步骤中，首先取二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯均匀混合，之后加入水中浸泡0.3-0.5h，之后加入秸秆、玉米粉、麸皮，均匀搅拌后，得到固体培养基。优选的，所述二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶与水的质量比为1:3。优选的，所述步骤S1中，液体培养基的pH为7-8。优选的，所述步骤S2中，液体培养基的pH为7-8。优选的，所述液体培养基包括硫酸镁0.2份、硫酸铵2份、柠檬酸钠1份、磷酸二氢钾6份、磷酸氢二钾4份，蛋白胨10份、氯化钠1份、磷酸二氢钾1份。优选的，所述液体培养基与固体培养基在使用前均需灭菌。综上所述，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术得到的枯草芽孢杆菌的发酵物制品中，杂菌的污染大大降低，制得的枯草芽孢杆菌的发酵物制品是一种具有生物活性的饲料添加剂。2、本专利技术在固体发酵的过程中，固体培养基中的1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮与D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯首先吸附于二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶的大分子链中，在培养枯草芽孢杆菌的过程中，1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮与D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯氧化，生成的氧化产物具有抑菌效果，有效抑制杂菌的生成。通过1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮与D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯的配合使用，抑菌效果达到最佳。随着1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮与D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯消耗，二者逐渐释放，不会影响枯草芽孢杆菌的培养。具体实施方式本专利技术实施例中所涉及的所有物质均为市售。一、制作实施例实施例1S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基25kg中，调节液体培养基的pH至7.5，32℃的有氧条件下培养15h，成为一级种子；其中，液体培养基包括硫酸镁0.2份、硫酸铵2份、柠檬酸钠1份、磷酸二氢钾6份、磷酸氢二钾4份，蛋白胨10份、氯化钠1份、磷酸二氢钾1份；S2、将一级种子接种至液体培养基35kg中，调节液体培养基的pH至7.5，32℃的有氧条件下培养28h，成为二级种子；S3、将二级种子接种在液体培养基25kg中培养，32℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵的方式培养33h，培养结束后恒温静置14h，成为三级种子；S4、将三级种子接种至固体培养基上，发酵培养33h后，粉碎，得到枯草芽孢杆菌的发酵物制品；其中，固体培养基的制备方法为：首先取二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶11kg、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮5.5kg、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯3.3kg均匀混合，之后加入水33kg中浸泡0.4h，之后加入秸秆22kg、玉米粉22kg、麸皮11kg，均匀搅拌后，得到固体培养基。实施例2S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基20kg中，调节液体培养基的pH至7，28℃的有氧条件下培养18h，成为一级种子；其中，液体培养基包括硫酸镁0.2份、硫酸铵2份、柠檬酸钠1份、磷酸二氢钾6份、磷酸氢二钾4份，蛋白胨10份、氯化钠1份、磷酸二氢钾1份；S2、将一级种子接种至液体培养基40kg中，调节液体培养基的pH至7，32℃的有氧条件下培养32h，成为二级种子；S3、将二级种子接种在液体培养基20kg中培养，28℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵的方式培养32h，培养结束后恒温静置12h，成为三级种子；S4、将三级种子接种至固体培养基上，发酵培养36h后，粉碎，得到枯草芽孢杆菌的发酵物制品；其中，固体培养基的制备方法为：首先取二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶10kg、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮5kg、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯3kg均匀混合，之后加入水30kg中浸泡0.3h，之后加入秸秆24kg、玉米粉24kg、麸皮10kg，均匀搅拌后，得到固体培养基。实施例3S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基30kg中，调节液体培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，其特征是，至少包括以下步骤：S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基20‑30kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28‑36℃的有氧条件下培养12‑18h，成为一级种子；S2、将一级种子接种至液体培养基30‑40kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28‑36℃的有氧条件下培养24‑32h，成为二级种子；S3、将二级种子接种在液体培养基20‑30kg中培养，28‑36℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵的方式培养32‑34h，培养结束后恒温静置12‑16h，成为三级种子；S4、将三级种子接种至固体培养基68‑81.6kg上，发酵培养32‑36h后，粉碎，得到枯草芽孢杆菌的发酵物制品；其中，所述固体培养基，其原料包括，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶、1‑(2‑(β‑D‑吡喃葡萄糖氧基)‑4,6‑二羟基苯基)‑3‑(4‑羟基苯基)‑丙酮、D‑2,3,5,6‑四羟基‑2‑己烯酸‑γ‑内酯。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，其特征是，至少包括以下步骤：S1、将枯草芽孢杆菌接种至液体培养基20-30kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28-36℃的有氧条件下培养12-18h，成为一级种子；S2、将一级种子接种至液体培养基30-40kg中，调节液体培养基酸碱度至中性，28-36℃的有氧条件下培养24-32h，成为二级种子；S3、将二级种子接种在液体培养基20-30kg中培养，28-36℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵的方式培养32-34h，培养结束后恒温静置12-16h，成为三级种子；S4、将三级种子接种至固体培养基68-81.6kg上，发酵培养32-36h后，粉碎，得到枯草芽孢杆菌的发酵物制品；其中，所述固体培养基，其原料包括，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮、D-2,3,5,6-四羟基-2-己烯酸-γ-内酯。2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌的发酵工艺，其特征是，所述固体培养基中，秸秆、玉米粉、麸皮、二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶混合物、1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮、D-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张伶燕，李卫军，于洪恩，
申请(专利权)人：北京中科润之农业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11