绝经后骨质疏松症诊疗靶点及其应用制造技术

本发明专利技术涉及绝经后骨质疏松症诊疗靶点及其应用，具体涉及绝经后骨质疏松检测靶点FBXW7及其应用。发明专利技术人针对绝经后骨质疏松分子标记物仍然十分稀缺的现状，对绝经后骨质疏松患者服用六味地黄丸前、后外周血和健康人对照外周血进行高通量测序，挑选出候选基因FBXW7，进一步，通过实验证实了基因与绝经后骨质疏松的相关性及用药相关性，本发明专利技术为基因诊断绝经后骨质疏松及临床用药提供理论基础，具有很好的临床应用价值。

The target of diagnosis and treatment of postmenopausal osteoporosis and its application

The invention relates to a target for diagnosis and treatment of postmenopausal osteoporosis and its application, in particular to a postmenopausal osteoporosis target FBXW7 and its application. In view of the present situation that the molecular markers of osteoporosis are still very scarce after menopause, the high flux sequencing of the six flavored rehmannia pill before and after the postmenopausal osteoporosis patients and the healthy people compared with the peripheral blood was selected to select the candidate gene FBXW7. Further, the experiment confirmed the phase of the gene and postmenopausal osteoporosis. The invention provides a theoretical basis for gene diagnosis of postmenopausal osteoporosis and clinical medication, and has good clinical application value.

【技术实现步骤摘要】
绝经后骨质疏松症诊疗靶点及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及骨质疏松症诊疗靶点及其应用，更具体的涉及绝经后骨质疏松检测靶点FBXW7及其应用。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis)发生是遗传和环境因素共同作用的结果，是一个复杂的多因子疾病。近年来，国内外学者对骨质疏松症的相关基因开展了大量的研究，寻找敏感的遗传标记，预测发生骨质疏松的危险性，我们之前的研究发现一些骨质疏松相关的基因，如IFT52基因(CN2015106280814)、EPS8L3基因(CN2015106280424)、CERS2基因(CN2015106293481)、MTUS1基因(CN2015106280246)等。绝经后骨质疏松症(postmenopausalosteoporosis，PMOP)是骨质疏松的一种，与衰老有关，主要发生在绝经后妇女，由于雌激素缺乏导致骨量减少及骨组织结构变化，使骨脆性增多易于骨折以及由骨折引起的疼痛、骨骼变形、出现合并症，乃至死亡等问题，严重地影响老年人的身体健康及生活质量，甚至缩短寿命增加国家及家庭财力与人力负担。目前，对于绝经后骨质疏松症的治疗方法主要包括性激素替代疗法、钙剂及维生素D、双膦酸盐、氟化物等方法。另外，对于绝经后骨质疏松症的防治，一定要注意生活方式和膳食结果的调整，增加户外活动，适当增加口照时间，多食用富含钙的膳食，适当进行体育锻炼，防治具有跌倒危险的疾病，增强自身保护措施，预防跌倒引起骨折等。近年来中医研究已经证实骨质疏松的发病与肾虚密切相关，多种补肾方剂，如六味地黄丸，对绝经后骨质疏松具有明显的疗效，且未发现明显副作用，已逐渐受到重视，如李涛研究发现六味地黄丸加味能减轻绝经后骨质疏松症患者骨痛，提高骨密度，改善其生活质量，且无明显不良反应，其与唑来膦酸注射液合用可增强疗效(六味地黄丸加味治疗肝肾阴虚证绝经后骨质疏松症临床研究，医药论坛杂志，2014年8月第35卷第8期)。高通量测序技术的快速发展和应用，为骨质疏松发病机理的研究提供了更加全面和快速的分析手段，研究人员利用生物信息学分析工具，从基因调控的角度阐述六味地黄丸治疗绝经期骨质疏松症的分子机制，卢严方等人利用GEO数据库相关数据挖掘分析表明，六味地黄丸对绝经期肾阴虚骨质疏松症的有益影响主要是通过促进雌激素表达及与其受体结合，并平衡免疫应答而促进骨组织的形成，从而达到改善骨质疏松(六味地黄丸对绝经期肾阴虚骨质疏松症的基因表达调控数据分析，中国骨质疏松杂志2017年3月第23卷第3期)。目前绝经后骨质疏松分子标记物仍然十分稀缺，故而，专利技术人对3例绝经后骨质疏松患者服用六味地黄丸前外周血样本、3例绝经后骨质疏松患者服用六味地黄丸半年后外周血样本和3例健康人对照外周血样本进行高通量测序，结合生物信息学方法分析进行基因的筛选，挑选出候选基因FBXW7，进一步，通过实验证实了基因与绝经后骨质疏松的相关性，本专利技术为临床诊治绝经后骨质疏松及用药提供理论基础，具有很好的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供检测FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的试剂在制备绝经后骨质疏松诊断制剂中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因FBXW7，继而通过分子生物学方法验证了FBXW7与绝经后骨质疏松的具有很好的相关性，并且骨质疏松患者服用六味地黄丸后FBXW7基因表达量明显下降，显示该基因不仅和绝经后骨质疏松相关，还是六味地黄丸的作用靶点，可用于制备绝经后骨质疏松诊断制剂和治疗靶点，具有重要的临床应用价值。进一步，FBXW7基因和/或FBXW7蛋白在绝经后骨质疏松样本中高表达。进一步，绝经后骨质疏松诊断制剂检测外周血中FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的表达情况。进一步，所述绝经后骨质疏松的诊断制剂采用下列方法中的一种或者几种检测FBXW7基因的表达：荧光定量PCR方法、基因芯片方法、高通量测序方法。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。高通量测序(High-throughputsequencing)又称下一代测序技术(nextgenerationsequencing)是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，极大提高了测序效率。这类大规模测序技术极大的提高了多个物种遗传信息的解读速度，为获取所有mRNA的序列信息，解密mRNA图谱提供了保证。同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序。高通量测序平台的代表是罗氏公司(Roche)的454测序仪(RochGSFLXsequencer)，Illumina公司的Solexa基因组分析仪(IlluminaGenomeAnalyzer)和ABI的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer)。所述用于荧光定量PCR方法检测绝经后骨质疏松中FBXW7基因的产品含有一对特异性扩增FBXW7基因的引物；所述的基因芯片包括与FBXW7基因的核酸序列杂交的探针。优选的，一对特异性扩增FBXW7基因的引物，上游引物序列为SEQIDNO.1，下游引物序列为SEQIDNO.2。进一步，绝经后骨质疏松的诊断制剂还包括用免疫方法检测FBXW7蛋白的表达。优选所述免疫方法检测绝经后骨质疏松中FBXW7蛋白表达为westernblot和/或ELISA和/胶体金法。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的试剂在制备绝经后骨质疏松诊断制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的试剂在制备绝经后骨质疏松诊断制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，绝经后骨质疏松诊断制剂检测外周血中FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的表达情况。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，绝经后骨质疏松的诊断制剂采用下列方法中的一种或者几种检测FBXW7基因的表达：荧光定量PCR方法、基因芯片方法、高通量测序方法，优选的，荧光定量PCR法采用一对特异性扩增FBXW7基因的引物；基因芯片包括与FBXW7基因的核酸序列杂交的探针。4.检测FBXW7基因和/或FBXW7蛋白的试剂在制备绝经后骨质疏松临床用药基因检测制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，FBXW7基因和/或FBXW7蛋白高表达的样本组适用六味地黄丸。6.FBXW7基因和/或其蛋白抑制剂在制备治疗绝经后骨质疏松药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，治疗绝经后骨质疏松药物采用下述方法中的一种和/或几种抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖枫，孙耀兰，常鹏，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11