川崎病冠状动脉病变风险诊断与检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体提供了一种川崎病关联物质作为生物标志物在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质；其中，所述川崎病关联基因包括以下1~8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因本发明专利技术可以评估川崎病患者以及可疑患儿的川崎病冠状动脉病变风险，从而使医护人员可以及早采取相应治疗或预防措施。

Diagnosis and detection kit for coronary artery lesions in Kawasaki disease

The invention relates to the field of biotechnology and specifically provides a use of a Kawasaki disease associated substance as a biomarker in the preparation of a kit for the risk assessment of coronary artery disease in Kawasaki's disease. The related substances of the Kawasaki disease are selected from the following or a number of the Kawasaki associated base or its fragments and the associated base of the Kawasaki disease. MRNA, the associated gene of the Kawasaki disease or the protein encoded by its fragment, including the following 1~8 items: the CD247 gene, the TNFRSF1A gene, the SMAD2 gene, the MMP9 gene, the BMP2 gene, the ACVR2B gene, the CXCL14 gene, and the CD14 gene, which can evaluate the patients with Kawasaki disease. And the risk of coronary artery lesions in Kawasaki disease of suspected children, so that medical staff can take appropriate treatment or preventive measures as early as possible.

【技术实现步骤摘要】
川崎病冠状动脉病变风险诊断与检测试剂盒
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种川崎病冠状动脉病变风险诊断与检测试剂盒。
技术介绍
川崎病(Kawasakidisease，KD)是一种病因未明的儿童系统性血管炎，是儿童获得性心脏病的最常见病因之一，临床表现为持续发热，皮疹，颈部淋巴结肿大，眼球结膜充血，肢端和口腔粘膜改变等。如不及时治疗，四分之一的患儿将并发冠状动脉病变。这四分之一的患儿可以称为高危川崎病冠状动脉患儿。KD引发的冠状动脉炎可能导致血管重塑和重建，导致内皮增生和血管狭窄，血管内壁明显增厚。并且KD引发的持续性冠状病变有很高的心脏并发症概率，包括血栓形成或狭窄导致的心肌梗死。一般在川崎病发病10天内进行用药可以预防冠状动脉病变的发生，但是发病10天后用药，效果不显著。因此，川崎病的及早诊断对于预防其引发的冠状动脉病变具有重要意义，特别是对于高危川崎病冠状动脉病患儿。目前诊断的主要参考依据是患者的临床表现和血液常规检测数据，如白细胞、中性粒细胞、带状核细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞等细胞浓度，血红蛋白浓度、血小板浓度、C-反应蛋白浓度、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰转移酶，以及红细胞沉降率等生理生化指标。上述临床指标都是川崎病已发病甚至引发了冠状动脉病变时而表现的，因此，根据上述指标难以及时的诊断川崎病以及预防冠状动脉病变，也难以发现川崎病冠状动脉病变的高危患儿。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒，可以评估川崎病患儿或可疑患儿的川崎病冠状动脉病变风险，以便及早采取相应治疗或预防措施。本专利技术第一方面提供了川崎病关联物质作为生物标志物在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质，其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因。在一种可能的实现方式中，所述川崎病关联基因或其片段为含有川崎病关联SNP位点的核苷酸片段。本专利技术的第二方面提供用于检测川崎病关联物质的试剂在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质；其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因。在一种可能的实现方式中，所述用于检测川崎病关联物质的试剂用于获得川崎病关联SNP位点。在一种可能的实现方式中，所述用于检测川崎病关联物质的试剂选自以下试剂中的任一种：突变位点PCR扩增所需试剂、ARMs扩增检测所需试剂、融合曲线扩增所需试剂、生物芯片阵列所需试剂、Sanger测序所需试剂，高通量测序所需试剂。在一种可能的实现方式中，所述用于检测川崎病相关物质的试剂包括所述川崎病关联基因或其片段对应的引物、探针；其中所述探针具体为生物素、荧光探针或荧光探针的衍生物，所述荧光探针的衍生物包括FAM、TET、JOE、HEX、ROX、AlexaFour488、Quasar670、TexasRed、Cy3中的任一种。在一种可能的实现方式中，所述用于检测川崎病相关物质的试剂用于检测受试者生物样品中的川崎病相关物质的试剂；其中，所述受试者生物样品选自以下任一项：受试者的外周血、尿、唾液，口腔上皮细胞中。本专利技术的第三方面，提供一种用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒，其特征在于，包括所述的用于检测川崎病相关物质的试剂。进一步地，所述试剂盒还包括川崎病关联基因的单核苷酸多态性的标准样品。本专利技术的第四方面，提供一种存储程序的计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质包括指令，所述指令被计算机执行时，使得所述计算机执行如下步骤：(1)接收受试者川崎病关联基因或其片段的核苷酸序列信息；其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因；(2)根据评估模型至少对所述受试者川崎病关联基因或其片段的核苷酸序列信息进行评估，判断所述受试者是否为川崎病冠状动脉病变高危者。在一种可能的实现方式中，所述川崎病关联基因或其片段为含有川崎病关联SNP位点的核苷酸片段。在一种可能的实现方式中，所述评估模型是根据川崎病患者的川崎病关联基因的核苷酸序列信息和非川崎病患者的川崎病关联基因的核苷酸序列信息得出的，其中，所述川崎病患者包括川崎病冠状动脉非扩张患者和川崎病冠状动脉扩张患者。在一种可能的实现方式中，利用R语言中的caret包对若干已知突变型的样本的川崎病关联基因对应的训练数据集进行训练，获得R语言环境中使用的评估模型。在一种可能的实现方式中，采用caret包中的“train”函数中的LAD方法来对所获得的训练数据集进行训练获得评估模型。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的用于检测川崎病关联物质的试剂、用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒，可以评估川崎病患者以及可疑患儿的川崎病冠状动脉病变风险，从而使医护人员可以及早采取相应治疗或预防措施。附图说明图1为本专利技术实施例提供的一种计算用于评估川崎病冠状动脉病变风险的评估模型的流程示意图。具体实施方式川崎病是儿童获得性心脏病的主要原因，超过80％的川崎病病例出现于6个月至4岁的年龄中。川崎病的原因是未知的，并且虽然怀疑是传染原(infectiousagent)，但是遗传和环境似乎也在该疾病中起作用。目前川崎病诊断仅可以通过临床特征的组合来实现，因此快速诊断是不可能的。不幸的是，延迟诊断(和在应用适当治疗中所产生的延迟)使得严重并发症的概率增加。事实上，冠状动脉瘤在多达20％的未经治疗的患者中形成，而仅5％的经治疗的患者形成这样的动脉瘤。因此，川崎病快速诊断方法和川崎病冠状动脉病变风险评估方法在临床诊断领域有非常重要的意义。全基因组关联分析(Genome-wideassociationstudy，GWAS)已被成功地用于复杂疾病中高频遗传变异。GWAS可以检测到的高频单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphisms，SNP)只能解释一小部分遗传变异性。随着高通量测序技术的发展，研究人员发现越来越多的证据支持低频突变在复杂遗传疾病中的作用。然而，普遍的做法是把高频和低频的变异分别进行关联分析的。本专利技术采用一种高频和低频变异综合效应的联合分析的方法针对川崎病冠状动脉扩张患者、川崎病冠状动脉非扩张患者以及非川崎病患者的基因组序列进行关联分析，发现了与川崎病，特别是川崎病冠状动脉扩张密切相关的基因，称之为川崎病关联基因。川崎病关联基因具体包括CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基本文档来自技高网...

【技术保护点】
川崎病关联物质作为生物标志物在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质；其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因。

【技术特征摘要】
1.川崎病关联物质作为生物标志物在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质；其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述川崎病关联基因或其片段为含有川崎病关联SNP位点的核苷酸片段。3.用于检测川崎病关联物质的试剂在制备用于川崎病冠状动脉病变风险评估的试剂盒中的用途，所述川崎病关联物质选自以下一项或多项：川崎病关联基因或其片段、所述川崎病关联基因或其片段转录的mRNA、所述川崎病关联基因或其片段编码的蛋白质；其中，所述川崎病关联基因包括以下1～8项：CD247基因、TNFRSF1A基因、SMAD2基因、MMP9基因、BMP2基因、ACVR2B基因、CXCL14基因、CD14基因。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述用于检测川崎病关联物质的试剂用于获得川崎病关联SNP位点。5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述用于检测川崎病关联物质的试剂选自以下试剂中的任一种：突变位点PCR扩增所需试剂、ARMs扩增检测所需试剂、融合曲线扩增所需试剂、生物芯片阵列所需试剂、Sanger测序所需试剂，高通量测序所需试剂。6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述用于检测川崎病相关物质的试剂包括所述川崎病关联基因或其片段对应的引物、探针；其中所述探针具体为生物素、荧光探针或荧光探针的衍生物，所述荧光探针的衍生物包括FAM、TET、JOE、HEX、ROX、AlexaFour488、Quasar670、TexasRed、Cy3中的任...

【专利技术属性】
技术研发人员：裘峰，杨竞，黄敏，朱丹颖，宋思瑞，张泓，
申请(专利权)人：上海市儿童医院，上海生物信息技术研究中心，上海产业技术研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31