一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物及其制备方法及应用技术

本专利申请公开了一氯取代的II型卤化聚酮类化合物，所述一氯取代的II型卤化聚酮类化合物的结构式为：

A Chloro Substituted II type halogenated polyketone compound and its preparation method and Application

The patent application discloses chlorosubstituted II halogenated polyketones, and the structure of the chlorinated substituted II halogenated polyketones is:

【技术实现步骤摘要】
一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物及其制备方法及应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物及其制备方法及应用，尤其涉及一种一氯取代卤化II型聚酮类化合物zunyimycinD及其应用。
技术介绍
链霉菌来源的天然产物往往具有很好的生物活性和成药潜力，是抗生素的重要来源。但随抗生素的滥用，许多“超级细菌”的出现，给临床上病原菌感染等疾病的治疗带来巨大的挑战，有些超级细菌出现了无药可医的现象。鉴于当前日益严峻的抗菌形势，加大抗生素研发力度，探索和研发新抗生素成为当务之急，也是解决抗生素耐药问题有效途径。链霉菌来源的卤化天然产物具有结构新颖、活性良好等特点。如：具有抗白血病活性的氯化聚酮neocarzillinA；对小鼠肿瘤细胞具有抑制作用的BE－19412A及其甲基化产物；对人体不同肿瘤细胞具有抑制作用的聚酮chinikomycinsA；对多耐药结核分枝杆菌有杀菌作用的chlorophenazine。此外临床上抗感染的万古霉素，替考拉宁以及2014年美国FDA批准上市的抗耐药菌感染抗生素新药达巴万星，奥利万星及泰地唑胺，它们都属于卤化天然产物。本课题组前期从贵州特殊生境梵净山土壤中分离鉴定一株命名为链霉菌Streptomycessp.FJS31-2菌株(菌株保藏号：CGMCCNO.4.7321)，保藏日为2016年6月2日，通过次级代谢产物研究，分离鉴定得到新型氯化聚酮系列的化合物如中国专利CN106432262A公开的一种链霉菌来源卤化聚酮化合物、制备方法及应用，该卤化II型聚酮类抗生素化合物即为化合物zunyimycinA；如中国专利CN106167494A公开的一种卤化II型聚酮类抗生素化合物、制备方法及其应用，该卤化II型聚酮类抗生素化合物即为化合物zunyimycinB；如中国专利CN106167495A公开的一种卤化II型聚酮类抗生素化合物、制备方法及其应用，该卤化II型聚酮类抗生素化合物即为化合物ZunyimycinD。申请人继续对该菌株进行研究，以期获得其他化合物。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种新的II型卤化聚酮类化合物及其应用。一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物，所述化合物的结构式为：所述化合物由保藏号：CGMCC4.7321链霉菌的代谢产物中分离获得。该一氯取代的II型卤化聚酮类化合物的制备方法，包括以下步骤：步骤一、菌株的活化：从-80℃冰箱中取出保存的分类名为：链霉菌Streptomycessp.FJS31-2菌株，菌株的保藏编号为CGMCCNO.4.7321，保藏日期为2016年6月2日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，活化时：以无菌接种环挖取菌株的孢子，十字划线接种于基础培养基的平板上，静置培养，挑取单菌落传代至第三代后放大培养；步骤二、发酵产物的发酵培养：选用固体培养基发酵培养，培养基中加入琼脂粉，静置培养，菌体连同培养基捣碎，加入乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，减压浓缩，得到发酵产物；步骤三、发酵产物纯化分离：a、发酵产物用丙酮溶剂溶解后，与硅胶粉混合后采用氯仿-丙酮按照纯氯仿；30:1；15:1；10:1；5:1；2:1；纯丙酮，依次7个梯度洗脱收集洗脱剂，洗脱剂旋转蒸发减压回收后，用展开剂展开，合并365nm荧光显黄绿色、8％硫酸乙醇显黄色、迁移值Rf在0.5的点，合并后得到F5；b、F5采用正相硅胶柱色谱分离，丙酮溶剂溶解F5组分后，与硅胶粉混合采用石油醚-丙酮按照6:1；4:1；2:1依次3个梯度洗脱，收集洗脱溶剂，洗脱溶剂旋转蒸发减压回收后，用展开剂展开，合并365nm荧光显黄绿色、8％硫酸乙醇显黄色、迁移值Rf在0.5的点，合并后称量得到F5-2；c、F5-2用丙酮溶解后，采用薄层层析方法，将365nm荧光下显黄绿色荧光的硅胶粉刮下来，将刮下来的硅胶粉装入分离柱，采用丙酮洗脱，回收丙酮溶剂，得到zunyimycinD化合物。其中，固体培养基配方：葡萄糖4g/L，麦芽抽提物4g/L，酵母粉4g/L，碳酸钙2g/L，微量元素预混液0.5mL，10g/L无水乙醇浸泡24h的腐殖酸B，加入去离子水定容至1000mL，121℃高压灭菌30min。微量元素预混液：ZnSO4·7H2O2g、FeSO4·7H2O2g、MnCl2·4H2O2g、CuSO4·5H2O2g、Na2B4O4·10H2O2g和(NH4)6MO7·4H2O2g，用双蒸水定容至1L配制而成。本专利技术的制备方法对培养基和微量元素预混肥进行科学配置，充分满足菌株的生长代谢，为制备更多一氯取代的II型卤化聚酮类化合物提供营养基础。一氯取代的II型卤化聚酮类化合物的应用，所述化合物用于抗革兰氏阳性细菌、抗革兰氏阴性细菌或者抗真菌活性。进一步，所述革兰氏阳性细菌为金黄色葡萄球菌及其耐药菌、表皮葡萄球菌或者枯草芽孢杆菌。进一步，所述革兰氏阴性细菌为变形杆菌、布氏杆菌或者产生超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌。进一步，所述真菌为白色念珠菌。本专利技术的优点：1)该化合物ZunyimycinD为链霉菌生物碱，来源于Streptomycessp.FJS31-2菌株次级代谢产物，该菌株是从贵州特殊生境梵净山分离得到。目前该菌株除了保藏在本实验室外，还保藏在中国普通菌种保藏中心(保藏号：CGMCC4.7321)。通过活化培养分离即可得到化合物ZunyimycinD，因此采用原料特殊、容易且对环境没有任何污染，所以也不会造成资源不可逆破坏。2)化合物ZunyimycinD具有较好的抗革兰氏阳性细菌、抗革兰氏阴性细菌或者抗真菌活性，同时该化合物的制备分离鉴定，为抗生素的研发提供化合物来源，也为其他有生物活性化合物的合成提供先导物。附图说明图1为ZunyimycinD分离流程图；图2为ZunyimycinD质谱图；图3为ZunyimycinD1H-NMR图；图4为ZunyimycinD13C-NMR和DEPT图；图5为ZunyimycinDHSQC图；图6为ZunyimycinDHMBC图；图7为ZunyimycinDCOSY图；图8为ZunyimycinD抗表皮葡萄球菌活性图；图9为ZunyimycinD抗变形杆菌活性图；图10为ZunyimycinD抗布氏杆菌活性图；图11为ZunyimycinD抗白色念珠菌活性图；图12为ZunyimycinD抗枯草芽孢杆菌活性图；图13为ZunyimycinD抗MRSA活性图；图14为ZunyimycinD抗ESBL活性图。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明：1、链霉菌Streptomycessp.FJS31-2菌株活化从-80℃冰箱中取出甘油斜面保存的菌种，以无菌接种环挖取1环链霉菌Streptomycessp.FJS31-2的孢子，十字划线接种于直径11cm的基础培养基平板，28℃静置培养3d，挑取单菌落传代至第三代可放大培养。2、发酵产物富集选用改良GYD固体培养基发酵培养，培养基中加入琼脂粉，28℃，静置培养17d，菌体连同培养基捣碎，加入乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，减压浓缩，得到发酵产物。3、发酵产物的纯化分离(1)发酵产物用丙酮溶剂溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物，其特征在于：所述化合物的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种一氯取代的II型卤化聚酮类化合物，其特征在于：所述化合物的结构式为：2.根据权利要求1所述的一氯取代的II型卤化聚酮类化合物的制备方法，其特征在于：所述化合物由保藏号：CGMCC4.7321链霉菌的代谢产物中分离获得。3.根据权利要求2所述的一氯取代的II型卤化聚酮类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、菌株的活化：从-80℃冰箱中取出保存的链霉菌Streptomycessp.FJS31-2菌株，菌株的保藏编号为CGMCC4.7321，保藏日为2016年6月2日，活化时：以无菌接种环挖取菌株的孢子，十字划线接种于基础培养基的平板上，静置培养，挑取单菌落传代至第三代后放大培养；步骤二、发酵产物的发酵培养：选用固体培养基发酵培养，培养基中加入琼脂粉，静置培养，菌体连同培养基捣碎，加入乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，减压浓缩，得到发酵产物；步骤三、发酵产物纯化分离：a、发酵产物用丙酮溶剂溶解后，与硅胶粉混合后采用氯仿-丙酮按照纯氯仿；30:1；15:1；10:1；5:1；2:1；纯丙酮，依次7个梯度洗脱收集洗脱剂，洗脱剂旋转蒸发减压回收后，用展开剂展开，合并365nm荧光显黄绿色、8％硫酸乙醇显黄色、迁移值...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱声艳，刘建国，杨彩玲，李爱苹，张权，王倩，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52