一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法技术

本发明专利技术提供了一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法，属于药物、原料药、原料检测技术领域。该方法利用舒洛地特中各组分电泳淌度的差异，通过琼脂糖凝胶电泳进行组分的分离，再使用离子交换离心柱进行提取，然后利用酶的特异性将各组分酶解成组成单元，最后通过亲水相互作用色谱质谱联用方法检测舒洛地特的各个组分，从而实现对舒洛地特快速移动肝素(FMH)、慢速移动肝素(SMH)和硫酸皮肤素(DS)的定性及相对定量分析，并对各组分精细结构及末端结构进行鉴定与分析。

A method for detection of sulodipine by electrophoresis, hydrophilic interaction chromatography mass spectrometry

The invention provides an electrophoretic hydrophilic interaction chromatography-mass spectrometry detection method for sulodipine, which belongs to the field of detection technology for drugs, raw materials and raw materials. The method used the difference of the electrophoresis mobility of each component in suludiant to separate the components by agarose gel electrophoresis, and then use the ion exchange centrifuge column to extract the components. Then the enzyme's specificity was used to separate the components of the components. Finally, the hydrophilic interaction color spectroscopy was used to detect the sullock. The qualitative and relative quantitative analysis of the fast moving heparin (FMH), slow moving heparin (SMH) and derma sulphate (DS) was carried out, and the fine structure and terminal structure of each component were identified and analyzed.

【技术实现步骤摘要】
一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法
本专利技术涉及一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法，具体涉及一种将舒洛地特进行电泳分离后，再分别使用离子交换离心柱和酶对药物进行提取降解，最后通过亲水相互作用色谱与质谱联用对结构进行定性和相对定量分析的方法，属于药物、原料药、原料检测

技术介绍
舒洛地特是从猪小肠粘膜中提取精制的，一种在临床用作治疗各种心血管疾病的抗血栓药物。舒洛地特具有抗凝血、抗血栓、抗心血管疾病及降血脂等多种生物学功能。与临床常用的抗凝血药物肝素相比，舒洛地特具有更强的抗血栓作用、更长的半衰期、更高的脂解活性以及更低的凝血作用和出血参数。此外，不论静脉注射、肌肉注射甚至口服，舒洛地特均可被完全吸收，且具有较高的生物利用率和良好的耐受性。与临床常用的抗凝血药物肝素不同，舒洛地特主要由两种不同的糖胺聚糖组成，包括天然混合的含量约占80％的快速移动肝素(FMH)和含量占约20％硫酸皮肤素(DS)组成，此外，还存在含量不超过2％的慢速移动肝素(SMH)，这也使得对舒洛地特进行分析十分困难。使用常见的分析方法分析舒洛地特，凝胶渗透色谱(GPC)只能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法，步骤如下：a、将5μL 8‑12μg/μL的舒洛地特溶液与40‑60％蔗糖溶液等体积混合后加于0.4‑0.6％的琼脂糖凝胶的上样孔，在缓冲液A和缓冲液B中进行电泳，电泳结束后将凝胶按上样孔切胶，经固定、染色、脱色后根据条带位置切胶，将SMH与FMH和DS分离，分别装入EP管内加热融化，将融胶分别加入离子交换离心柱洗脱收集，然后利用10KDa的平底超滤膜进行超滤脱盐；b、向步骤a脱盐后的超滤膜上加入70‑100μL肝素酶酶解缓冲液，并加入肝素酶I、II和III各25‑45mIU，放置于36‑38℃酶解20‑28小时，每个超滤管中加入1μL 0....

【技术特征摘要】
1.一种舒洛地特的电泳亲水相互作用色谱质谱联用检测方法，步骤如下：a、将5μL8-12μg/μL的舒洛地特溶液与40-60％蔗糖溶液等体积混合后加于0.4-0.6％的琼脂糖凝胶的上样孔，在缓冲液A和缓冲液B中进行电泳，电泳结束后将凝胶按上样孔切胶，经固定、染色、脱色后根据条带位置切胶，将SMH与FMH和DS分离，分别装入EP管内加热融化，将融胶分别加入离子交换离心柱洗脱收集，然后利用10KDa的平底超滤膜进行超滤脱盐；b、向步骤a脱盐后的超滤膜上加入70-100μL肝素酶酶解缓冲液，并加入肝素酶I、II和III各25-45mIU，放置于36-38℃酶解20-28小时，每个超滤管中加入1μL0.7-0.9μg/μL的ΔIP溶液，离心收集膜下样品，冻干，分别得到SMH和FMH的组成单元；c、向步骤b含有DS的超滤膜上加入70-100μLCSABC酶酶解缓冲液，并加入CSABC酶90-110mIU，放置于36-38℃酶解20-28小时，超滤管中加入1μL0.7-0.9μg/μL的ΔIP溶液，离心收集膜下样品，冻干，得到DS的组成单元；d、将步骤b和c得到的SMH、FMH和DS的冻干样品复溶后，采用亲水相互作用色谱质谱联用检测舒洛地特的各个组分。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a中的缓冲液A为0.03-0.05M乙酸钡，pH5-6；缓冲液B为0.04-0.06M1,2-二氨基丙烷，pH2-3；固定液为0.1％-0.2％十六烷基三甲基溴化铵溶液；染色液为0.1％-0.3％甲苯胺蓝；脱色液为40％-50％乙醇、1％-2％乙酸水溶液。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a电泳的过程为：在缓冲液A中，110-130V、低温下电泳50-70min，电泳方向为负极到正极；再将凝胶转入缓冲液B中，110-130V、低温下继续电泳50-70min。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a固定、染色、...

【专利技术属性】
技术研发人员：迟连利，王聪聪，盛安然，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37