光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急（慢）性心肌毒性药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急（慢）性心肌毒性药物中的应用。本发明专利技术通过将适量的胆固醇、卵磷脂和光甘草定混合后，加入氯仿‑甲醇混合液，采用旋转薄膜蒸发法制备均匀的脂质干膜，再加入PH=7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400 W的条件下超声5 min得到光甘草定脂质体。通过光甘草定脂质体预处理C57BL/6小鼠后注射阿霉素，心肌酶谱水平降低；小鼠体重降低趋势变缓，验证光甘草定可减弱阿霉素引起的心肌毒性，对人体正常细胞安全、低毒。

Application of Glycyrrhiza liposome in the preparation of adriamycin induced acute (slow) myocardial toxicity drugs

The invention discloses the application of Glycyrrhiza glycyrrhizin in the preparation of adriamycin induced acute (slow) myocardial toxicity drugs. The amount of cholesterol, lecithin and glabridin after mixing, adding chloroform methanol mixture, using lipid rotary film evaporation prepared by homogeneous dry film, phosphate buffered saline before adding PH=7, the lipid membrane fully swelling water, 5 min ultrasonic glabridin liposome in ultrasound 400 power under the condition of W. After the pretreatment of C57BL/6 mice with Glycyrrhiza urinensis liposome, the myocardial enzyme spectrum level was reduced, and the weight loss trend of mice was slowed down. The results showed that glycyrrhizin could reduce the myocardial toxicity induced by adriamycin, and it is safe and low toxic to human normal cells.

【技术实现步骤摘要】
光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急(慢)性心肌毒性药物中的应用
本专利技术属于中草药领域，具体涉及光甘草定脂质体在降低阿霉素引起的心肌毒性中的新用途。
技术介绍
心力衰竭是一种复杂的临床症状群，是各种心脏病的严重阶段，其发病率高，五年存活率与恶性肿瘤相仿。经诊断的心衰病人将有一半于4年内死亡，而严重心衰患者的1年死亡率高达50％。与其它心血管病不同，经过年龄调整的心衰死亡率仍呈上升趋势。心衰已经日益成为心血管病中最常见、对患者危害最大的疾病，而导致心衰的原因又十分复杂多样，因此心衰已成为心血管病研究领域的重点和难点。阿霉素(Doxorubicin)是从松链丝菌浅灰色变株中提取的一种蒽环类抗生素，是临床上常用的高效广谱抗肿瘤药物之一。自60年代初以来被广泛地用于白血病、恶性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、肉瘤等多种肿瘤疾病的治疗。阿霉素抗肿瘤的主要作用机制是其蒽环平面可以直接嵌入DNA碱基对之间，干扰转录过程,阻止mRNA的合成既抑制DNA的合成又抑制RNA的合成，因此对细胞周期各阶段均有作用，属于细胞周期非特异性药物。是目前应用最广泛和有效的治疗实体瘤和白血病的抗肿瘤药之一，蒽环类抗生素均有心脏毒性，其中以阿霉素较为严重，虽然毗柔比星和表阿霉素的心脏毒性较小，但仍无法完全避免。由于它具有心肌毒性作用而严重限制了其临床使用剂量和疗程。其急性心肌毒性主要表现为急性心律失常和心力衰竭；而慢性迟发型心肌毒性呈现累积性和剂量依赖性，有可能在完成疗程数月或数年以后发展为不可逆性心肌病和充血性心力衰竭(Steinherz,L.J.,etal.,1991)。美国的一项回顾性研究表明，当阿霉素蓄积量达500～550mg/m2时，超过4％的患者出现充血性心力衰竭；蓄积量达550～600mg/m2时，发病率大于18％；蓄积量超过600mg/m2时，发病率高达36％(Lefrak,E.A.,etal.,1973)。阿霉素所致心肌病的机制并不同于其抗肿瘤的作用机制，但其确切机制至今仍不完全明了。然而，许多研究表明阿霉素可致心肌细胞氧化应激、钙超载、线粒体损伤，某些心肌细胞特异性基因表达抑制等，从而诱导心肌细胞凋亡、坏死，心肌纤维化增多，心肌收缩力降低，并最终导致心室重塑和充血性心力衰竭(Lee,V,A.Ketal.,1991)。其中，氧化应激可能扮演着关键的始动触发角色，而心肌细胞凋亡则被视为阿霉素诱导的心肌毒性的最基本机制。甘草是常用的药食两用中药。在亚洲和欧洲甘草的根被用于解药、消毒、消炎、抗过敏及调味剂和甜味剂的历史已经有几个世纪。光甘草定是一种多酚黄酮类的化合物，来自甘草提取物的疏水部位，也是甘草的一种主要活性成分。光甘草定具有广泛的生物学效应，它在细胞色素氧化系统中显示出很强的抗自由基、抗氧化作用，能明显抑制体内新陈代谢过程中所产生的自由基、以免低密度脂蛋白(LDL)、脱氧核糖核酸(DNA)和细胞壁等被自由基损伤(Kennedy,T.C.,etal.,1998)。从而可以防治动脉粥样硬化，细胞衰老等。在最近的文献中有报道光甘草定能抑制非小细胞肺癌的转移，也对其他肿瘤细胞具有一定的抑制效果。(叶献青等，2014)因此，对于肿瘤患者而言，在用阿霉素进行抗肿瘤治疗时，需要使用心肌保护剂。好的心肌保护剂应该是在不影响阿霉素抗肿瘤的作用下又能保护心肌细胞不受损害。
技术实现思路
为了解决现有技术中用阿霉素进行抗肿瘤治疗时可诱导心肌细胞凋亡、坏死，心肌纤维化增多，心肌收缩力降低，并最终导致心室重塑和充血性心力衰竭的问题，本专利技术提供光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急(慢)性心肌毒性药物中的应用，光甘草定脂质体性质稳定，进入体内后，降解周期较长，药效持久，具有较好的生物相容性，且已有报道光甘草定能抑制肿瘤的生长。因此，光甘草定脂质体对降低阿霉素引起的心肌毒性作用高效低毒。为了实现以上目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急(慢)性心肌毒性药物中的应用。优选地，所述光甘草定脂质体的制备方法为：称取胆固醇、卵磷脂和纯度为98％的光甘草定置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比＝2:1，采用旋转薄膜蒸发法在50-60℃条件旋转制膜20-50min获得均匀的厚度为0.1-0.2mm脂质干膜，以氮气吹干残余溶剂，再加入PH＝7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400W的条件下超声5min即得，超声中按照超声5秒，停5秒的频率进行；所述胆固醇与卵磷脂质量比为胆固醇：卵磷脂＝1:5；所述光甘草定与卵磷脂摩尔比为光甘草定：卵磷脂＝1:10。本专利技术通过以下实验证明光甘草定脂质体减弱心肌损伤的作用：①光甘草定脂质体预处理C57BL/6小鼠后注射阿霉素，心肌酶谱水平降低；②光甘草定脂质体预处理C57BL/6小鼠后注射阿霉素，小鼠体重降低趋势变缓。本专利技术具有以下优点：1)本专利技术制备光甘草定脂质体工艺成熟可靠，原料来源广泛且质量优良。2)现有的降低心衰的药会导致诸如骨髓抑制、肝、肾功能异常等，同时该药会降低蒽环类药物的抗癌药效且其价格昂贵。光甘草定脂质体性质稳定，具有较好的生物相容性，且已有报道光甘草定能抑制肿瘤的生长。因此，光甘草定脂质体对降低阿霉素引起的心肌毒性作用高效低毒。3)光甘草定脂质体在发挥降低心肌毒性的同时,还可以通过扶正培本、清热解毒、化痰活血等作用提高机体的免疫功能。4)光甘草定脂质体性质稳定进入体内后，降解周期较长，药效持久。5)将光甘草定脂质体作为药物，可避免连接配基带来的免疫原性问题，同时大幅度降低制药成本。6)本专利技术采用常规给药剂型，技术成熟，生产工艺简单易行。7)本专利技术采用常规给药方式，给药方便，无痛苦。附图说明图1光甘草定脂质体减缓小鼠体重降低趋势；图2光甘草定脂质体降低心肌酶谱水平；具体实施方式通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本专利技术的特点和优点。所提供的实施例仅是对本专利技术方法的说明，而不以任何方式限制本专利技术揭示的其余内容。以下实施例所用的光甘草定，纯度为98％，成都曼思特生物科技有限公司，批号：11060201。【实施例1】光甘草定脂质体制备及表征检测(一)光甘草定脂质体制备1.制备方法：称取胆固醇、卵磷脂和光甘草定置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比＝2:1，在50-60℃条件下旋转薄膜蒸发法旋转制膜20-50min，制成均匀的脂质干膜；所述脂质干膜厚度为0.1-0.2mm；以氮气吹干残余溶剂，再加入PH＝7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400W的条件下超声5min，即得；所述超声中按照超声5秒，停5秒的频率进行；所述胆固醇与卵磷脂质量比为胆固醇：卵磷脂＝1:5；所述光甘草定与卵磷脂摩尔比为光甘草定：卵磷脂＝1:10。上述制备得到的光甘草定脂质体的粒径为224.8±4.5nm,其包封率＞55％。2.处方设计与优化参照文献和单因素试验预试分析，确定正交实验的因素及水平。以药物包封率为评价指标，采用正交实验进行处方筛选和优化。(二)光甘草定脂质体表征1.形态学观察和粒径大小测定采用普通光学显微镜和透射电镜磷钨酸负染法观察脂质体。采用激光粒径测量仪测定平均粒径。2.脂质体包封率测定1本文档来自技高网...

【技术保护点】
光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急（慢）性心肌毒性药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.光甘草定脂质体在制备治疗阿霉素诱导的急（慢）性心肌毒性药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述光甘草定脂质体的制备方法为：称取胆固醇、卵磷脂和纯度为98%的光甘草定置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比=2:1，采用旋转薄膜蒸发法在50-60℃条件旋转制膜20...

【专利技术属性】
技术研发人员：周晓阳，黄可晴，杨静，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42