一种新的微生物及其基因片段序列和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新的放线菌ＤＬ２－Ｆ－５菌株，分类命名是弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｆｒａｄｉａｅ），保藏号为ＣＣＴＣＣ　　Ｍ　２０６１３５。该放线菌ＤＬ２－Ｆ－５菌株是从海洋或淡水水体微生物有益菌群中分离的，能产生抗菌物质或增强免疫活性成分，可以防治水产动物疾病的发生，并且对藻类无杀灭作用，避免了使用消毒剂或杀生剂对净化水环境有益藻类的破坏，同时在水体中这些抗菌放线菌大量地增殖，抑制了水体中病原菌的繁殖以及分解了水体中的有机质，起到净化水质的作用。另外，放线菌还能分解水体中的有机污染物及残余饵料，消除致病微生物因子的滋生，改善养殖水体环境。在生产药物和作为食品、饲料添加剂中有广泛用途。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从海洋或淡水水体微生物有益菌群中分离的新的放线菌，以及该放线菌的16SrRNA的基因序列和用途。
技术介绍
近年来，我国水产养殖业逐步从粗放式养殖过渡到集约化、规模化养殖，不仅增加了养殖的品种，而且大大提高了产量，丰富了人民的生活。但是由于集约化养殖规模不断扩大，养殖水体污染严重，养殖生态环境遭到破坏，导致水产动物的病害日益猖獗，严重制约了水产养殖业的发展。 长期以来，为防治病害的发生，化学药物作为一种快速、有效、经济的手段在我国得到大面积的广泛应用，因此，水产动物病害防治主要依靠广谱性抗菌素、消毒剂、重金属盐以及强氧化剂等，在生产上往往发生很多不利的因素，一是有些水产品由于长期使用抗菌素不但使病原菌产生耐药性，增加了疾病防治的难度，而且药残损害消费者身体健康以及面临水产品出口绿色贸易壁垒问题；二是大量使用消毒剂在杀灭病原菌的同时，也杀灭了水体中净化水质的有益菌群、藻类等，严重破坏了水体微生物净化系统，导致养殖水体日益恶化，严重破坏了生态环境。20世纪90年代以后我国引进了有效微生物菌群(EM)的基本技术，大量微生态制剂产品不断出现，并作为某些化学药物的替代品越来越广泛地应用于水产养殖中，从微生态学观点来防治病害发生，减少环境污染，增进动物健康。但是微生态制剂的菌种往往局限于芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌等传统菌种，这些菌种大多杀菌作用不强或无杀菌作用，且多数对常用抗生素敏感，虽然能在一定程度上或通过间接的方法来防治水产动物病害的发生，但其防治作用有限，治标不治本。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题与缺陷，本专利技术目的在于提供一种能够产生抗菌物质或免疫增强活性成分，以防治水产动物疾病的发生，对藻类无杀灭作用，在水体中能够大量地增殖，抑制水体中病原菌的繁殖以及分解水体中的有机物及残余饵料，消除致病微生物因子的滋生，改善养殖水体环境的新的放线菌。 实现上述专利技术目的的技术方案是一种放线菌DL2-F-5，分类命名是弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)，于2006年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，其保藏号为CCTCC M 206135。 本专利技术的另一目的是提供一种上述放线菌DL2-F-55菌株的16SrRNA基因片段序列。 本专利技术还有一目的是放线菌DL2-F-5菌株在水质改良剂和药物组合物中的应用。 本专利技术还有一目的是放线菌DL2-F-5菌株作为添加剂动物饲料中的应用。 该株放线菌DL2-F-5是从大连海域海泥中，经分离、筛选获得。 与现有技术相比，本专利技术的放线菌DL2-F-5菌株具有以下优点 1)放线菌DL2-F-5能够产生抗菌物质或免疫增强活性成分，可以防治水产动物疾病的发生，并且对藻类无杀灭作用，避免了使用消毒剂或杀生剂对净化水环境有益藻类的破坏； 2)在水体中放线菌DL2-F-5大量地增殖，抑制了水体中病原菌的繁殖以及分解了水体中的有机质，起到净化水质的作用； 3)将这些来自水环境中的放线菌DL2-F-5制剂成生物渔药，来抑制养殖水体中的病原微生物，或内服控制水产动物体内的病害菌，可以替代化学药物进行疾病防治，且不破环生态环境； 4)放线菌DL2-F-5还能分解水体中的有机物及残余饵料，消除致病微生物因子的滋生，改善养殖水体环境。 附图说明 图1是本专利技术的放线菌DL2-F-5的基内菌丝在400倍的显微镜图。 图2是本专利技术的放线菌DL2-F-5的气生菌丝在400倍的显微镜图。 图3是依据16SrDNA序列构建的放线菌DL2-F-5株的系统进化树图。 图4是庆大霉素标准曲线图。 图5DL2-F-5菌株16SrRNA基因片段序列长度是1289bp核苷酸序。 具体实施例方式 以下结合专利技术人给出的附图和具体试验例及具体实施例来进一步说明本专利技术放线菌DL2-F-5的有益效果和制备方法。 实施例1.放线菌DL2-F-5的分离筛选 1)、海泥来源采自大连海域海底泥层。 2)、菌株的分离筛选 将采集的海泥通过采样箱空运实验室中。每份样品取3g，分别加入27mL灭菌的去离子水，用磁力搅拌器搅拌20min，即成10-1浓度的悬液，然后用灭菌去离子水依次稀释至10-2，10-3，10-4，分别取各稀释度上清液0.1mL，涂抹到高氏1号培养基平板上(培养基中含0.0075％的重铬酸钾，以抑制细菌和真菌的生长)，放入28℃的培养箱中培养7d，挑取不同形态的菌落到高氏1号斜面上进行培养，将分离的菌落在平板上反复划线纯化，直至得到纯培养，命名为DL2-F-5菌株。4℃保存备用。 所述的高氏1号培养基的组分及配比为可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO40.5g，NaCl 15g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂粉15g，水1000mL，pH7.2～7.4，121℃灭菌30min。 实施例2.放线菌DL2-F-5的鉴定 1)、形态学的特征 放线菌DL2-F-5菌株在高氏1号上，采用插片法，培养3d，7d，15d，30d后，在光学显微镜下观察，可见基内菌丝发达，呈分枝状，无横隔无断裂见(图1)；气生菌丝较少，呈螺旋或曲线状，孢子椭圆形见(图2)。 2)、培养学的特征 放线菌DL2-F-5株在9种培养基上，28℃培养，分别于3d，7d，15d，30d观察其生长情况，气丝、基丝的颜色及产色素情况，其培养特征见表1。 表1海洋放线菌DL2-F-5菌株的培养特征 所述的上述培养基的组分及配比分别为 蔗糖察氏琼脂蔗糖30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，KCl 0.5g，MgSO40.5g，FeSO4 0.01g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，112℃灭菌30min。 葡萄糖酵母膏琼脂葡萄糖10g，酵母膏10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，112℃灭菌30min。 酪氨酸琼脂酵母膏1g，L-酪氨酸1g，NaCl 8.5g，琼脂15g，水1000mL，pH7.2，121℃灭菌30min。 甘油天门冬素琼脂L-天门冬素1g，微量盐溶液1mL，甘油10g，K2HPO410g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，112℃灭菌30min。 (微量盐溶液FeSO4·7H2O 0.1g，MnCl2·4H2O 0.1g，ZnSO4·7H2O0.1g，蒸馏水100mL)。 普通营养琼脂蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，121℃灭菌30min。 燕麦粉琼脂燕麦粉20g，微量盐溶液1mL(同上)，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，121℃灭菌30min。 无机盐淀粉琼脂可溶性淀粉10g，NaNO3 1g，MgCO3 1g，K2HPO4 0.3g，NaCl 0.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2，121℃灭菌30min。 伊莫松琼脂牛肉膏4g，蛋白陈4g，酵母膏10g，葡萄糖10g，氯化钠2.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0，112℃30min高压灭菌。 3)、生理生化特征 参照《微生物分类学》(张继忠.复旦大学出版社，1990)，对放线菌DL2-F-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种放线菌ＤＬ２－Ｆ－５菌株，分类命名是弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅ），它于２００６年１２月１２日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为ＣＣＴＣＣＭ２０６１３５。

【技术特征摘要】
1.一种放线菌DL2-F-5菌株，分类命名是弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)，它于2006年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 206135。2.如权利要求1所述的放线菌DL2-F-5菌株，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王高学，顾忠旗，叶道林，原居林，穆杨，黄海洪，付维法，梁朝军，崔婧，姚嘉赟，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，四川华强渔牧药业有限公司，
类型：发明
国别省市：61[中国|陕西]