一种在Sf和Tn细胞中抗凋亡的杆状病毒表达载体制造技术

本发明专利技术公开了一种在草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda,Sf）和粉纹夜蛾（Trichoplusia ni,Tn）细胞中都能抗凋亡的杆状病毒表达载体。根据siRNA引导链与靶RNA识别时能容忍G‑U配对的原理，在Sf‑caspase‑1和Tn‑caspase‑1同源序列中广泛优选能同时在两种细胞系中抑制caspase‑1的shRNA。将所述shRNA编码序列克隆到杆状病毒表达载体上，即得到广谱抗凋亡杆状病毒表达载体。广谱抗凋亡杆状病毒在两种细胞系中都有良好的抗细胞凋亡效果；由于病毒感染后细胞凋亡延迟，外源蛋白表达水平显著提高。外源蛋白产量的提高能够降低工业生产成本。本发明专利技术在蛋白制品和疫苗工业领域具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于重组蛋白质表达，尤其涉及一种在多种昆虫细胞中抗凋亡的杆状病毒表达载体。

技术介绍

1、杆状病毒是特异感染节肢动物的双链dna病毒，苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒（autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, acmnpv）是杆状病毒的模式种。自从1983年smith ge等首次用杆状病毒在昆虫细胞中表达人β-干扰素基因以来，由于具有低成本、高产量，而且具备各种翻译后修饰等优点，杆状病毒表达载体系统在科研和生产中被广泛应用。

2、杆状病毒表达系统是一种瞬时表达系统，昆虫细胞被病毒感染3-4天后就会凋亡。基于晚期启动子的杆状病毒表达系统的表达时限是从感染后20小时开始至宿主细胞死亡，外源蛋白只能在这个时限内表达。如果能延长感染细胞的存活时间，就能大幅增加外源蛋白的产量。

3、细胞凋亡是宿主抵御病毒侵染的策略之一，其中细胞编码的caspase活性对细胞凋亡非常重要。而草地贪夜蛾（spodoptera frugiperda, sf）细胞中研究最多的是caspase-1本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种shRNA编码序列，其特征在于，所述shRNA编码序列包含ATCTTTGGCATACAGCATTCC序列。

2.如权利要求1所述的shRNA编码序列，其特征在于，所述shRNA编码序列包含GGRRTGYTGTRTGYYRRRGRT序列。

3.一种DNA，其特征在于，所述DNA包含如权利要求2所述的shRNA编码序列。

4.一种质粒，其特征在于，所述质粒包含如权利要求2所述的shRNA编码序列。

5.一种杆状病毒表达载体，其特征在于，所述杆状病毒表达载体包含如权利要求1或2所述的shRNA编码序列。

6.一种重组杆状病毒，...

【技术特征摘要】

1.一种shrna编码序列，其特征在于，所述shrna编码序列包含atctttggcatacagcattcc序列。

2.如权利要求1所述的shrna编码序列，其特征在于，所述shrna编码序列包含ggrrtgytgtrtgyyrrrgrt序列。

3.一种dna，其特征在于，所述dna包含如权利要求2所述的shrna编码序列。

4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：许晓东，张瑞瑞，南昊，兰兰，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：