肿瘤化疗药物敏感预测试剂配制方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种药物敏感性预测试剂，特别涉及一种治疗恶性肿瘤的化疗药物敏感性预测试剂的配制方法，以及由此方法制成的试剂盒。本发明专利技术选有ＲＰＭＩ１６４０培养基，免除了ＣＯ↓［２］培养箱，应用ＡｇＮＯＲ技术检测细胞核内基因转录水平变化，从而解决了以往类似方法所带来的实验条件要求高、检测周期长、体积大、成本高、操作复杂等缺陷，使之易于在临床上推广使用，与临床符合率高，达８０％以上。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药物敏感性预测试剂，特别涉及一种治疗恶性肿瘤的化疗药物敏感性预测试剂的配制方法，以及由此方法制成的试剂盒。目前，化疗仍是治疗各种恶性肿瘤的主要手段之一。由于肿瘤类型不同，甚至同一类型肿瘤在不同个体上的化疗效果也存在着较大差异，因而仅凭临床经验选择化疗药物就带有相当大的盲目性，不能对某一具体的恶性肿瘤有针对性地施以某种化疗药物进行治疗。据统计，在临床中，具体的恶性肿瘤与化疗药物选定的符合率很低，即与临床符合率很低，只有14%。这样，无针对性的化疗药物注入人体内不仅不能有效地控制肿瘤细胞的生长，而且还能导致人体肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性，给以后的治疗埋下难以克服的隐患。因此，在临床化疗之前，对化疗药物的敏感性、抗药性进行预测，选择针对性较强的个体化治疗的敏感化疗药物，就成为治疗恶性肿瘤的关键。这种做法不仅可以提高化疗效果，而且可以避免抗药性及药物副作用。自六十年代开展肿瘤化疗药物敏感性预测以来，逐渐发展成体内、体外两大系列化疗药物敏感性检测方法，与临床符合率达70%以上，效果不错。但这种方法存在着对实验条件要求高、检测周期长、操作复杂、成本高、体积大及不方便，因而无法在临床实践中大量推广使用。本专利技术的目的就是要克服上述缺陷，设计一种采用密闭式培养体系，直接观察肿瘤细胞基因转录水平变化，确定药物对细胞的影响。本专利技术的技术方案选用RPMI1640培养基，免除CO2培养箱，应用AgNOR技术检测细胞核内基因转录水平变化(1)取300-400m.l三蒸水加入中性容器中;(2)加入5-6g RPMI1640培养基粉;(3)加入青链霉素、庆大霉素各5万单位/500ml培养液;(4)加入0.8-1.2g HEPES;(5)加入95-105ml灭活小牛血清，混匀;(6)滴加0.5mol/l NaOH，至PH值为7.0-7.4;(7)抽滤、除菌;试剂盒内装试剂瓶、检测液瓶、肿瘤标本瓶、若干个药物标本瓶。本专利技术的优点和效果在于由于不需CO2培养箱，故对实验条件要求相对降低，体积也变小了;同时由于加入HEPES缓冲剂，使肿瘤细胞生长顺利，采用AgNOR技术直接观察细胞核内基因转录水平变化，因而检测周期短，最长只需48小时，操作也简单，成本也大为降低，与临床符合率高，达80%以上。具体实施例方式(1)取350ml三蒸水加入到1000ml中性容器中;(2)加入5.2gRPMI1640培养基粉;(3)加入青链霉素、庆大霉素各5万单位/500ml培养液;(4)加入1gHEPES;(5)将100ml小牛血清置于67℃水洛锅中灭活30分钟，然后加入到上述中性容器中，混合均匀;(6)滴加0.5mol/l NaOH，调节PH值为7.2-7.4;(7)抽滤、除菌。将上述试剂培养液20ml无菌注入30ml试剂瓶，放在试剂盒内;试剂盒内再放置检测液瓶银染液、显影液;取5ml容量瓶加入试剂培养液2ml，作肿瘤标本瓶也放置在试剂盒内，按现在普遍使用的8种化疗药物制作8个化疗药物标本瓶，其内分别含有0.5mgrcR、10mgAdR、25mgmts、25mgrp16-213、150mg(5-Fr)、2mgmme、7.5mgPDD、2.5mg平阳霉素，并被分别放置在试剂盒内。使用时，先将肿瘤组织置于试剂盒中的肿瘤标本瓶中，同时取病人血5ml放入血样瓶中，在无菌操作台上，将肿瘤标本放入消毒培养器皿中，吸入试剂培养液，剪碎标本，用吸管吹打已剪碎的标本，将细胞悬液吸回培养液(试剂)瓶中，再将细胞悬液按每瓶1ml均匀注入8种化疗药物标本瓶中，摇匀、加盖，用消毒注射器将瓶中的空气吸出，置于37℃，培养40-48小时。过后分别滴于玻片上，加银染液、显影液数滴，混匀复盖细胞表面，37℃、避光20分钟，用水冲洗染色液，待干燥。计数均值下降率＝ (对照组平均颗粒数-加药组平均颗粒数)/(对照组平均颗粒数) ×100%下降率≥50%为敏感，30-50%为中度敏感;＜30%为耐药。从而可选择下降率较大的化疗药物治疗肿瘤，以取得最佳疗效。如果有新的化疗药物专利技术并用于临床，则化疗药物标本瓶可相应增加。权利要求1.肿瘤化疗药物敏感预测试剂配制方法，其特征在于选用RPMI1640培养基，免除CO2培养箱，应用AgNOR技术检测细胞核内基因转录水平变化(1)取300-400ml三蒸水加入中性容器中；(2)加入5-6g RPMI1640培养基粉；(3)加入青链霉素、庆大霉素各5万单位/500ml培养液；(4)加入0.8-1.2g HEPES；(5)加入95-105ml灭活小牛血清，混匀；(6)滴加0.5mol/l NaOH，至PH值为7.0-7.4；(7)抽滤、除菌；2.根据权利要求1所述的肿瘤化疗药物敏感预测试剂配制方法，其特征在于使用小牛血清前，将其置于50-60℃水洛锅中灭活30-40分钟。3.上述配制方法生产的试剂盒，其特征在于内装试剂瓶、检测液瓶、肿瘤标本瓶、若干个化疗药物标本瓶。全文摘要本专利技术涉及一种药物敏感性预测试剂，特别涉及一种治疗恶性肿瘤的化疗药物敏感性预测试剂的配制方法，以及由此方法制成的试剂盒。本专利技术选有RPMI1640培养基，免除了CO文档编号C12Q1/04GK1096542SQ9311155公开日1994年12月21日 申请日期1993年6月18日 优先权日1993年6月18日专利技术者田富荣, 徐荣臻 申请人:泰兴市长江精细化工厂本文档来自技高网...

【技术保护点】
肿瘤化疗药物敏感预测试剂配制方法，其特征在于选用ＲＰＭＩ１６４０培养基，免除ＣＯ↓［２］培养箱，应用ＡｇＮＯＲ技术检测细胞核内基因转录水平变化：（１）取３００－４００ｍｌ三蒸水加入中性容器中；（２）加入５－６ｇ ＲＰＭＩ１６４０培养 基粉；（３）加入青链霉素、庆大霉素各５万单位／５００ｍｌ培养液；（４）加入０. ８－１. ２ｇ ＨＥＰＥＳ；（５）加入９５－１０５ｍｌ灭活小牛血清，混匀；（６）滴加０. ５ｍｏｌ／ｌ ＮａＯＨ，至ＰＨ值为７. ０－７. ４；（７） 抽滤、除菌；。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：田富荣，徐荣臻，
申请(专利权)人：泰兴市长江精细化工厂，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]