桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法技术

本发明专利技术公开一种桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法，该方法包括下列步骤：１）一步法提取桂竹香幼叶总ＲＮＡ；２）利用ＲＮＡ直接进行反转录；３）利用同源序列合成探针；４）用地高辛标记探针，噬菌斑原位杂交的方法筛选桂竹香苗期ｃＤＮＡ文库；５）利用ＰＣＲ的方法快速确定阳性克隆是所筛选的重组子；６）限制酶切分析，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析确定为重组子；７）测序，并通过Ｂｉｏｉｎｆｏ ｍａｔｉｃｓ分析，确定该基因为新的未被克隆过的桂竹香外膜蛋白ｃＤＮＡ序列。本发明专利技术方法易行，操作简便，效果好。克隆出的桂竹香外膜蛋白的ｃＤＮＡ序列还可应用与研究桂竹香细胞的物质运输，信号传递和细胞代谢等。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法，包括下列步骤：（１）一步法提取桂竹香幼叶总ＲＮＡ；（２）利用总ＲＮＡ直接进行反转录，并用ＬＤ－ＰＣＲ方法构建桂竹香苗期ｃＤＮＡ文库；（３）利用同源序列设计并合成同源探针；（４）用地高辛标记同 源探针，噬菌斑原位杂交方法筛选桂竹香苗期ｃＤＮＡ文库；（５）利用ＰＣＲ的方法快速筛选并确定阳性克隆；（６）限制性酶切分析，Ｓｏｕｒｔｈｅｎ杂交分析确定为重组子；（７）测序，并通过Ｂｉｏｉｎｆｏｍａｔｉｃｓ分析，确定桂竹香外膜蛋白 基因序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李旭锋，刘天艳，王劲，袁旭，
申请(专利权)人：成都天友发展有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]