一种用纸片快速检测啤酒中大肠菌群的方法技术

一种用纸片快速检测啤酒中大肠菌群的方法，包括大肠菌群检测纸片的制作和大肠菌群的检测，其特征是所述的培养基为水培养基，每１００ｍｌｓｈｕｉ水培养基中含有乳糖０．１－５ｇ、蛋白胨０．１－５ｇ、氯化钠０．１－２．０ｇ、磷酸氢二钾０．１－０．ｇ４、牛肉膏０．１－３ｇ、琼脂０．０５－０．１ｇ、１．６％溴甲酚紫０．０１－３．０ｍｌ、４．０％ＴＴＣ０．０５－５．０ｍｌ、其余为水，该水培养基的ｐＨ值为７．０－７．２。本发明专利技术可在１５ｈ内一次完成啤酒酿造过程中大肠菌群的检测，操作简捷、快速，培养基成本低，操作费用低，劳动强度低，对大肠菌群的敏感性高，阳性菌落检出率高。更为重要的是，短时间内就能得出检测结果，可以及时、有效地指导啤酒生产，实现了检测目的的根本性转变，对啤酒生产的过程控制及产品销售具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
大肠菌群的检测是食品卫生检测指标中的一项重要内容。大肠菌群为人与动物肠道正常寄生菌，无致病性。从食品的安全出发，食品中不应含有人类致病菌，否则该食品流入市场的后果将不堪设想。但检测致病菌非常困难，特别是一般的食品生产单位，而检测大肠菌群则相对简单。当人们检测到食品中有大肠菌群存在时，就可以判定该食品已被人或动物的粪便污染，由此推断可能已被人类致病菌污染，因而该食品不能够食用。纸片法是上世纪80年代发展起来的一种快速检测食品及与食品接触的物体表面、餐具、茶具中大肠菌群污染情况的方法，但该法在啤酒方面的应用尚未见有报道。国内外用于检测大肠菌群的标准方法为MPN(MPNmost probable number)法，即大肠菌群最近似值法，又称国标法或发酵法。该检测方法分为如下几步首先让样品在乳糖胆盐发酵管中发酵，若样品产酸、产气，就可能有大肠菌群存在，第二步用伊红-美兰培养基进行分离，将得到的阳性菌落再进行乳糖复发酵试验并配合革兰氏染色，革兰氏染色为阴性、发酵乳糖的无芽孢杆菌为大肠菌群。但该法的缺点是培养基配制繁琐、操作复杂，整个检测周期长，检测结果严重滞后，检测一个周期需72小时，严重地制约了生产过程对微生物指标的控制及成品酒的出库。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，它采用水培养基能克服现有技术的上述缺点。，包括将新华中速滤纸切成大小两种纸块，用高压蒸气灭菌，于无菌条件下浸入灭除过菌的培养基中，取出纸片，干燥；吸取2个啤酒样品，分别涂布于两个大纸片，同时吸取10个样品，分别涂布于10个小纸片，用压模压平，然后用夹子将装上述纸片的塑料袋夹紧，置于生化培养箱中，培养后观察结果；结果判定标准为①纸片蓝色不变，出现紫红色斑点，其周围有黄色或黄圈者为阳性；②纸片呈紫色，有紫红色斑点，其周围无黄圈者为阳性；③纸片变黄色，有红色斑点者为阳性；④纸片蓝色不变，有红色斑点，其周围变黄者为阳性；⑤纸片蓝色不变，有两个以上红色斑点为阳性；⑥纸片蓝色不变者为阴性；⑦纸片为一种颜色，无斑点者为阴性；⑧酸性食品，如半成品酒及麦汁等接种后，纸片变黄，经培养无斑点者为阴性；⑨纸片变色不典型，结果可疑者，应做伊红美兰平板划线进行验证.；根据纸片的阳性数和阴性数，查大肠菌群MPN检索表，得知大肠菌群近似数；其特征是所述的培养基为水培养基，每100mlshui水培养基中含有乳糖0.1-5g、蛋白胨0.1-5g、氯化钠0.1-2.0g、磷酸氢二钾0.1-0.g4、牛肉膏0.1-3g、琼脂0.05-0.1g、1.6％溴甲酚紫0.01-3.0ml、4.0％TTC0.05-5.0ml、其余为水，该水培养基的PH值为7.0-7.2。本专利技术采用纸片法可在15h内一次完成啤酒酿造过程中大肠菌群的检测，操作简捷、快速，培养基成本低，操作费用低，劳动强度低，对大肠菌群的敏感性高，阳性菌落检出率高。更为重要的是，短时间内就能得出检测结果，可以及时、有效地指导生产过程与产品出库，特别是对于生啤酒这一产品。采用纸片法进行啤酒发酵过程大肠菌群的快速检测，将以前的大肠菌群检测作为补救措施，变为主动地指导生产，实现了检测目的的根本性转变，对啤酒生产的过程控制及产品销售具有重要的指导意义。具体实施例方式1.大肠菌群检测纸片的制作将新华中速滤纸切成10×12cm(双层)和5×6cm(双层)大小两种纸块，用高压蒸汽灭菌30min，再在40℃烘箱中烘干，于无菌条件下浸入灭过菌的培养基中，纸片经培养基浸透后，于无菌条件下放入除过菌的大方搪瓷盘中，置于40℃恒温箱内烘干，然后装入无菌塑料袋中，密封，最后置于冰箱中保存。上述整个操作均需在无菌条件下进行。2、培养基的制作本专利技术用滤纸做培养基的载体，所述的培养基为水培养基，每100ml水培养基中含有乳糖1.5g、蛋白胨3g、氯化钠0.5g、磷酸氢二钾0.4g、牛肉膏0.9g、琼脂0.1g、1.6％溴甲酚紫0.5ml、4.0％TTC2.5ml、培养基的PH值7.0-7.2。3、大肠菌群检测方法吸取2个10ml样品，分别涂布于两个大纸片，同时吸取10个1ml样品，分别涂布于10个小纸，用压模轻轻压平，然后用夹子将装上述纸片的塑料袋夹紧，置于生化培养箱中，36±1℃培养15h后观察结果。结果判定标准为①纸片蓝色不变，出现紫红色斑点，其周围有黄色或黄圈者为阳性。②纸片呈紫色，有紫红色斑点，其周围无黄圈者为阳性。③纸片变黄色，有红色斑点者为阳性。④纸片蓝色不变，有红色斑点，其周围变黄者为阳性。⑤纸片蓝色不变，有两个以上红色斑点为阳性。⑥纸片蓝色不变者为阴性。⑦纸片为一种颜色，无斑点者为阴性。⑧酸性食品，如半成品酒及麦汁等接种后，纸片变黄，经培养无斑点者为阴性。⑨纸片变色不典型，结果可疑者，应做伊红美兰平板划线进行验证.根据纸片的阳性数和阴性数，查大肠菌群MPN检索表，得知大肠菌群近似数(个/L)，结果见表1(试验材料选自青岛啤酒厂)表1、纸片法与发酵法结果比较 本专利技术的纸片法与发酵法的对比试验将175个待侧样品接种于大肠菌群检测纸片，同时用发酵法做对照。36±1℃培养。15h时观察纸片的颜色变化及菌落特征，根据阳性纸片数查MPN检索表，计算MPN值，同时根据发酵检索结果查MPN检索表，计算MPN值。对照结果，两者相符的有167个样品，符合率为95.57％表2 本专利技术的纸片法与发酵法测定MPN值的比较 表3.本专利技术的纸片法与发酵法评价合格率比较 由表2、3中的数据可以看出，在被检的175个样品中，本法的合格率为82.86％，发酵法的合格率为84％，总符合率为95.57％，经统计学处理(x2＝3.841、α＞0.05)两法在测定MPN值和合格率方面无显著性差异。本专利技术的纸片法与国标法的对照试验表明，两者之间的符合率高达95.57％。特别是当样品中大肠菌群数目少时，本法比国标法更敏感。大肠菌群检测纸片的敏感性试验结果证实，样品中大肠菌群数目少至每100毫升5个细胞时，纸片法就可检出。特异性试验表明，检测纸片只对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、柠檬酸细菌(Citrobacter)及克雷伯氏菌(Klebsiella)敏感，对其他的细菌不敏感。用检测纸片对啤酒酿造中的待检样品如洗涤水、冷麦汁、后酵酒、清酒、回滤酒检测时，可将检测时间缩短至15小时，比国标法至少提前9小时。与国标法对照试验表明两者的符合率为100％，本法为一种较为理想的检测啤酒酿造中大肠菌群的替代方法。权利要求1.，包括将新华中速滤纸切成大小两种纸块，用高压蒸气灭菌，于无菌条件下浸入灭除过菌的培养基中，取出纸片，干燥；吸取2个啤酒样品，分别涂布于两个大纸片，同时吸取10个样品，分别涂布于10个小纸片，用压模压平，然后用夹子将装上述纸片的塑料袋夹紧，置于生化培养箱中，培养后观察结果；结果判定标准为①纸片蓝色不变，出现紫红色斑点，其周围有黄色或黄圈者为阳性；②纸片呈紫色，有紫红色斑点，其周围无黄圈者为阳性；③纸片变黄色，有红色斑点者为阳性；④纸片蓝色不变，有红色斑点，其周围变黄者为阳性；⑤纸片蓝色不变，有两个以上红色斑点为阳性；⑥纸片蓝色不变者为阴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用纸片快速检测啤酒中大肠菌群的方法，包括将新华中速滤纸切成大小两种纸块，用高压蒸气灭菌，于无菌条件下浸入灭除过菌的培养基中，取出纸片，干燥；吸取２个啤酒样品，分别涂布于两个大纸片，同时吸取１０个样品，分别涂布于１０个小纸片，用压模压平，然后用夹子将装上述纸片的塑料袋夹紧，置于生化培养箱中，培养后观察结果；结果判定标准为：①纸片蓝色不变，出现紫红色斑点，其周围有黄色或黄圈者为阳性；②纸片呈紫色，有紫红色斑点，其周围无黄圈者为阳性；③纸片变黄色，有红色斑点者为阳性；④纸片蓝色不变，有红色斑点，其周围变黄者为阳性；⑤纸片蓝色不变，有两个以上红色斑点为阳性；⑥纸片蓝色不变者为阴性；⑦纸片为一种颜色，无斑点者为阴性；⑧酸性食品，如半成品酒及麦汁等接种后，纸片变黄，经培养无斑点者为阴性；⑨纸片变色不典型，结果可疑者，应做伊红美兰平板划线进行验证．；根据纸片的阳性数和阴性数，查大肠菌群ＭＰＮ检索表，得知大肠菌群近似数；其特征是所述的培养基为水培养基，每１００ｍｌｓｈｕｉ水培养基中含有乳糖０．１－５ｇ、蛋白胨０．１－５ｇ、氯化钠０．１－２．０ｇ、磷酸氢二钾０．１－０．ｇ４、牛肉膏０．１－３ｇ、琼脂０．０５－０．１ｇ、１．６％溴甲酚紫０．０１－３．０ｍｌ、４．０％ＴＴＣ０．０５－５．０ｍｌ、其余为水，该水培养基的ＰＨ值为７．０－７．２。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩红，单俊伟，
申请(专利权)人：王彩红，单俊伟，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]