修饰的γδ细胞及其用途制造技术

本发明专利技术提供了用于治疗人类中的癌症或感染性疾病的组合物和方法。本发明专利技术包括γδT细胞的产生和施用，所述γδT细胞表达嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体(CAR)包含抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、包含或不包含CD3ζ信号传导结构域的共刺激信号传导结构域。省略CD3ζ信号传导结构域的CAR序列在γδT细胞中的表达提供了体内CAR‑T治疗，其将仅对提供配体以便活化γδT细胞受体(TCR)的靶细胞产生细胞溶解。

Modified gamma delta cells and their uses

The present invention provides a composition and method for the treatment of cancer or infectious diseases in human beings. The present invention includes the generation and application of gamma delta T cells, the expression of the chimeric antigen receptor gamma delta T cells (CAR), a chimeric antigen receptor (CAR) costimulatory signal transduction domain contains the antigen binding domain, hinge domain, transmembrane domain, or may not contain CD3 signal transmission structure domain. The expression of CAR CD3 sequence signal transduction domain in zeta gamma delta T cells in vivo CAR T provides treatment, it will only provide ligand to activation of gamma delta T cell receptor (TCR) of the target cells to produce cell lysis.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰的γδ细胞及其用途
本申请涉及制备和使用gammadeltaT细胞(γδT细胞)的方法，适当地涉及γδT细胞在同种异体或自体受体受试者中用于治疗包括病毒感染、真菌感染、原生动物感染和癌症的状况的用途，具体涉及嵌合抗原受体(CAR)修饰的γδT细胞的用途。本专利技术还涉及用于产生表达嵌合抗原受体的γδT细胞和用于检测CAR表达的方法。另外，本专利技术涉及用本文讨论的方法产生的细胞在治疗疾病诸如癌症和感染性疾病中的制药用途。γδT淋巴细胞代表人类外周血的较小亚群(小于10％)。表达Vγ9Vδ2(γ9δ2)T细胞受体的γδT细胞识别癌细胞中由于甲羟戊酸途径的调节异常而过度产生的内源异戊烯焦磷酸(IPP)。γδT淋巴细胞产生丰富的促炎细胞因子如IFN-γ，其强有力的细胞毒性效应功能和不依赖MHC的抗原识别的能力使其成为癌症免疫治疗的重要角色。已经表明γδT细胞能够在体外杀死许多不同类型的肿瘤细胞系和肿瘤，包括白血病、成神经细胞瘤和多种癌。此外，已经证明，γδT细胞可以自发地或在用不同的二膦酸(bisphosphonate)(包括唑来膦酸(zoledronate))处理之后识别并杀死许本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种修饰的γδΤ细胞，所述修饰的γδΤ细胞包含嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含对疾病抗原具有结合特异性的细胞外抗原结合结构域、铰链、跨膜结构域，和(i)一个或更多个共刺激信号传导区域，其中CD3ζ结构域不存在(可调节)，或(ii)一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域(可调节)，或(iii)CD3ζ结构域，或(iv)一个或更多个共刺激信号传导区域和功能性CD3ζ结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.15 GB 1506423.1;2015.07.08 GB PCT/GB2015/01.一种修饰的γδΤ细胞，所述修饰的γδΤ细胞包含嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含对疾病抗原具有结合特异性的细胞外抗原结合结构域、铰链、跨膜结构域，和(i)一个或更多个共刺激信号传导区域，其中CD3ζ结构域不存在(可调节)，或(ii)一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域(可调节)，或(iii)CD3ζ结构域，或(iv)一个或更多个共刺激信号传导区域和功能性CD3ζ结构域。2.一种修饰的γδΤ细胞，所述修饰的γδΤ细胞包含嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含对疾病抗原具有结合特异性的细胞外抗原结合结构域、铰链、跨膜结构域、一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域。3.如权利要求1或权利要求2所述的修饰的γδΤ细胞，其中所述无功能性CD3ζ结构域通过所述嵌合抗原受体中不存在CD3ζ结构域来提供。4.如任一项前述权利要求所述的修饰的γδΤ细胞，所述修饰的γδΤ细胞包含至少两种嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体具有对不同疾病抗原的结合特异性。5.如任一项前述权利要求所述的修饰的γδΤ细胞，所述修饰的γδΤ细胞还包含抑制性嵌合抗原受体(ICAR)，其中所述抑制性嵌合抗原受体对抗原的结合将引起由嵌合抗原受体对疾病抗原的任意结合提供的信号被抑制，以使所述γδΤ细胞在脱靶细胞中的活化最小化，所述嵌合抗原受体包含对所述疾病抗原具有结合特异性的细胞外抗原结合结构域、铰链、跨膜结构域和(i)一个或更多个共刺激信号传导区域，其中CD3ζ结构域不存在(可调节)，或(ii)一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域(可调节)，或(iii)CD3ζ结构域，或(iv)一个或更多个共刺激信号传导区域和功能性CD3ζ结构域。6.如任一项前述权利要求所述的γδΤ细胞，其中γδ配对是来自Vγ1至Vγ9和Vδ1至Vδ8。7.如任一项前述权利要求所述的γδΤ细胞，其中所述γδΤ细胞是Vγ9Vδ2亚型。8.如任一项前述权利要求所述的γδΤ细胞，其中所述嵌合抗原受体的抗原识别结构域能够结合在细胞感染、细菌感染、真菌感染或原生动物感染中发现的或与细胞感染、细菌感染、真菌感染或原生动物感染相关的细胞表面靶或天然配体，来自病毒的有活性的或失活的病毒片段、肽、蛋白、抗原区段，肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原。9.如权利要求1至8中任一项所述的修饰的γδΤ细胞，用于在治疗癌症或感染中使用。10.如权利要求2至8中任一项所述的修饰的γδΤ细胞，用于在治疗癌症或感染中使用。11.如权利要求9所述的用于在治疗癌症或感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述修饰的γδT细胞通过同种异体移植被提供至受试者。12.如权利要求10所述的用于在治疗癌症或感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述修饰的γδT细胞通过同种异体移植被提供至受试者。13.如在权利要求9至12任一项中要求保护的用于在治疗感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述感染选自病毒感染、细菌感染、真菌感染或原生动物感染。14.如权利要求9中要求保护的用于在治疗癌症或感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述修饰的γδT细胞通过自体移植被提供至受试者。15.如权利要求10中要求保护的用于在治疗癌症或感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述修饰的γδT细胞通过自体移植被提供至受试者。16.如在权利要求14或15任一项中要求保护的用于在治疗感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述感染选自病毒感染、细菌感染、真菌感染或原生动物感染。17.如在权利要求9至15中任一项中要求保护的用于在治疗癌症或感染中使用的修饰的γδT细胞，其中所述修饰的γδT细胞与氨基二膦酸或其替代物被共施用至受试者，其中所述替代物能够经由生理甲羟戊酸途径的调节异常增强在靶细胞上存在的磷酸抗原的水平。18.一种核酸序列，所述核酸序列编码嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含细胞外抗原识别结构域、铰链、跨膜结构域和(i)一个或更多个共刺激信号传导区域，其中CD3ζ结构域不存在(可调节)，或(ii)一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域(可调节)，或(iii)CD3ζ结构域，或(iv)一个或更多个共刺激信号传导区域和功能性CD3ζ结构域。19.如权利要求18所述的核酸序列，所述核酸序列编码嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体(CAR)包含对疾病抗原具有结合特异性的细胞外抗原结合结构域、铰链、跨膜结构域、一个或更多个共刺激信号传导区域和无功能性CD3ζ结构域。20.如权利要求18或权利要求19所述的核酸序列，其中所述无功能性CD3ζ结构域通过所述嵌合抗原受体中不存在CD3ζ结构域来提供。21.如在权利要求18中要求保护的核酸序列，所述核酸序列包含核苷酸序列SEQIDNO:1或由核苷酸序列SEQIDNO:1组成，所述核苷酸序列SEQIDNO:1能够编码氨基酸序列SEQIDNO:2至6。22.如权利要求18至20中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列编码嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含细胞外抗原识别结构域、铰链、跨膜结构域、一个或更多个共刺激信号传导区域，但在所述一个或更多个共刺激信号传导区域中不存在功能性CD3ζ结构域，其中所述细胞外抗原识别结构域为识别B细胞蛋白CD19的scFv。23.如权利要求18所述的核酸序列，所述核酸序列包含核苷酸序列SEQIDNO:7或由核苷酸序列SEQIDNO:7组成，所述核苷酸序列SEQIDNO:7能够编码氨基酸序列SEQIDNO:8至11。24.一种提供CAR修饰的γδT细胞的方法，所述方法包括将如权利要求18至23中任一项所述的核酸掺入或转导到γδT细胞中以遗传修饰所述γδT细胞的步骤。25.如权利要求24所述的方法，其中转导步骤使用慢病毒CAR构建体。26.如权利要求24或25所述的方法，所述方法包括同时将如权利要求18至23中任一项所述的核酸转导到细胞中并选择性扩增CAR转导的γδT细...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·大卫·利克，阿黛尔·汉尼根，阿加皮托斯·帕塔卡斯，达莉亚·帕鲁齐纳，
申请(专利权)人：特希生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB