CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法技术

本发明专利技术公开了CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法，该方法用于非诊断或治疗目的，包括如下步骤：对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA序列如序列表中SEQ ID NO：1‑6所示，构建sgRNA表达载体；利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hCas9质粒共转染caco‑2细胞，进行单克隆化扩大培养，即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。本发明专利技术获得的caco‑2细胞模型将有效排除不同转运体之间相互干扰，为药物转运研究提供更特异、更灵敏的细胞模型。

CRISPR/CAS9 mediated drug transporter targeted deletion of the Caco 2 cell model and its method

【技术实现步骤摘要】
CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco-2细胞模型及其方法
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco-2细胞模型及其方法。
技术介绍
药物转运研究是新药研发过程的重要内容。转运体，通过转运体进行继发性主动转运，即依靠存在于细胞外高浓度钠离子的势能(该势能由原发性主动转运提供)转运，即相当于间接消耗ATP的能量。例如小肠粘膜上皮细胞主动吸收葡萄糖的过程中，转运能量并不直接来自于ATP的分解，而是依靠上皮细胞(低)与肠腔液(高)之间的钠离子浓度梯度，在钠离子顺浓度梯度进入上皮细胞的同时，葡萄糖逆浓度梯度一同被转运进细胞。ATP结合转运体家族主要成员P-gp、BCRP及MRP2参与大量化合物转运，是目前常用候选转运体。然而三者底物及抑制剂的交叉反应严重影响结果分析。CRISPR-Cas9具有更快速、简便、高效、多位点、特异性靶向敲除基因的优势。CRISPR-Cas9的工作原理是crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/本文档来自技高网...

【技术保护点】
CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除caco‑2细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA的序列如序列表中SEQ ID NO：1‑ SEQ ID NO：6所示，再构建sgRNA表达载体；2）利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hCas9质粒共转染caco‑2细胞，进行单克隆化扩大培养，即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。

【技术特征摘要】
1.CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除caco-2细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）对P-gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA的序列如序列表中SEQIDNO：1-SEQIDNO：6所示，再构建sgRNA表达载体；2）利用CRISPR/CAS9分别设计P-gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hC...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄黎珍，钟国瑞，谢水林，庞土慧，姜二岗，邹淑香，李浩健，戴仁科，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44