高品质iPS细胞的制造方法技术

本发明专利技术的目的在于，提供iPS细胞的品质改善剂、iPS细胞的制造方法、通过该制造方法制造的iPS细胞、以及iPS细胞制造用组合物。本发明专利技术的iPS细胞的制造方法的特征在于，包括将(a)核重编程物质和(b)H1foo基因或其基因产物导入体细胞的工序。通过不仅将核重编程物质、而且将H1foo基因或其基因产物导入体细胞，能够更多地制造品质高的iPS细胞。

The manufacturing method of high quality iPS cells

The purpose of the invention is to provide quality improvement agents for iPS cells, methods for manufacturing iPS cells, iPS cells made by the manufacturing method, and iPS cell manufacturing compositions. The manufacturing method of the iPS cell of the present invention is characterized by including the process of introducing (a) nuclear reprogrammed substance and (b) H1foo gene or its gene products into somatic cells. By introducing not only the nuclear reprogramming substance, but also the introduction of the H1foo gene or its gene products into the body cells, more high quality iPS cells can be produced.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高品质iPS细胞的制造方法
本专利技术涉及iPS细胞的品质改善剂、iPS细胞的制造方法、通过该制造方法制造的iPS细胞、以及iPS细胞制造用组合物。
技术介绍
iPS(inducedpluripotentstem)细胞(也被称为“人工多能性干细胞”或“诱导多能性干细胞”。)能够通过导入Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc而由体细胞产生(非专利文献1、专利文献1)。这可以通过对亲本细胞的转录网络和表观遗传标记(epigeneticsignature)进行重新编程来实现。iPS细胞在基础研究、药品革新和再生医疗中也带来各种利益。可是，生成的iPS细胞的细胞组与胚性干细胞(ES细胞)细胞组相比品质不均一(heterogeneousquality)，这仍然是个严重的问题。例如，就ES细胞的情况而言，各个细胞性质的差异小，大体上任何细胞都能分化成目标细胞，而iPS细胞各个细胞性质的差异大，常有细胞不能分化成目标细胞。任何iPS细胞均显示无差异的高品质对于基础研究和临床目的是重要的。为了解决iPS细胞的细胞组品质不均一的问题，进行了大量的尝试。例如专利文献2中记载了如下内容：如果将规定量的Oct3/4基因、Klf4基因、c-Myc基因和Sox2基因在体细胞中导入规定次数，则能够提高iPS细胞的制造效率和稳定性。此外，专利文献3中记载了如下内容：通过在Oct3/4基因及其基因产物、Sox2基因及其基因产物、Klf4基因及其基因产物和c-Myc基因及其基因产物的基础上，将Prdm14基因及其基因产物、Esrrb基因及其基因产物、以及Sall4a基因及其基因产物导入体细胞，能够有效地在短时间内制造品质方面优异的人工多能性干细胞(iPS细胞)。进而，专利文献4中记载了如下内容：通过在Oct3/4基因及其基因产物、Sox2基因及其基因产物、Klf4基因及其基因产物和c-Myc基因及其基因产物的基础上将Jarid2突变体基因及其基因产物导入体细胞，能够有效地在短时间内制造品质方面优异的人工多能性干细胞(iPS细胞)。可是，iPS细胞的品质仍有改善的余地。因此，需要开发品质更高且品质差异更小的iPS细胞的制造方法。另外，为了使连接组蛋白H1家族与连接DNA结合而控制基因表达，因此使其产生高级染色质结构。连接组蛋白H1家族的成员包括组蛋白H1a、H1b、H1c、H1d、H1e、H1foo、H1x、H1.0、H1t、H1T2、HILS1。连接组蛋白家族的大部分成员由使染色质压缩的体细胞连接组蛋白构成。因此，所述结构一般抑制整体基因转录活性(非专利文献2、3)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特许第4183742号公报专利文献2：日本特开2011-004674号公报专利文献3：日本特开2014-217344号公报专利文献4：日本特开2014-217345号公报非专利文献非专利文献1：Takahashi,K.&Yamanaka,S.Inductionofpluripotentstemcellsfrommouseembryonicandadultfibroblastculturesbydefinedfactors.Cell126,663-676(2006)非专利文献2：Steinbach,O.C.,Wolffe,A.P.&Rupp,R.A.SomaticlinkerhistonescauselossofmesodermalcompetenceinXenopus.Nature389,395-399(1997)非专利文献3：Hebbar,P.B.&Archer,T.K.AlteredhistoneH1stoichiometryandanabsenceofnucleosomepositioningontransfectedDNA.TheJournalofbiologicalchemistry283,4595-4601(2008)
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题在于，提供iPS细胞的品质改善剂、iPS细胞的制造方法、通过所述制造方法制造的iPS细胞、以及iPS细胞制造用组合物。用于解决课题的方法为了改善iPS细胞的品质，本专利技术人等进行了深入研究，结果发现，在将核重编程物质导入体细胞而制造iPS细胞的方法中，如果不仅将核重编程物质，而且将“H1foo基因或其基因产物”导入体细胞，则能够制造品质更高而且品质差异更小的iPS细胞，从而完成了本专利技术。通过将“H1foo基因或其基因产物”与核重编程物质并用，能够制造品质更高而且品质差异更小的iPS细胞，这对本领域技术人员而言是意料之外的。即，本专利技术提供：(1)一种iPS细胞的品质改善剂，其特征在于，包含H1foo基因或其基因产物；(2)上述(1)中记载的iPS细胞的品质改善剂，其特征在于，包含含有H1foo基因的表达载体。此外，本专利技术还提供：(3)一种iPS细胞的制造方法，其特征在于，包括将(a)核重编程物质和(b)H1foo基因或其基因产物导入体细胞的工序；(4)上述(3)中记载的iPS细胞的制造方法，核重编程物质包括选自由Oct基因家族基因、Sox基因家族基因、Klf基因家族基因、Myc基因家族基因、Lin基因家族基因、和Nanog基因、以及它们的基因产物组成的组的至少一种；(5)上述(3)或(4)中记载的iPS细胞的制造方法，核重编程物质包括Oct基因家族基因或其基因产物、Sox基因家族基因或其基因产物、以及Klf基因家族基因或其基因产物；(6)上述(3)～(5)中任一项记载的iPS细胞的制造方法，核重编程物质包括Oct3/4基因或其基因产物、Sox2基因或其基因产物、以及Klf4基因或其基因产物；(7)上述(3)～(5)中任一项记载的iPS细胞的制造方法，核重编程物质包括Oct3/4基因或其基因产物、Sox2基因或其基因产物、Klf4基因或其基因产物、以及L-Myc基因或其基因产物。进而，本专利技术还提供：(8)一种iPS细胞，其通过上述(1)～(7)中任一项记载的iPS细胞的制造方法制造；(9)一种iPS细胞制造用组合物，其特征在于，包含(a)核重编程物质和(b)H1foo基因或其基因产物。专利技术效果本专利技术能够提供iPS细胞的品质改善剂、iPS细胞的制造方法、通过所述制造方法制造的iPS细胞、以及iPS细胞制造用组合物。根据本专利技术，能够制造品质更高而且品质差异更小的iPS细胞。附图说明图1为利用显微镜得到的表达外源性(小鼠)H1foo的C57BL/6J小鼠尾部成纤维细胞(以下简称为“小鼠成纤维细胞”)的图像。图1a的“BF”、“DAPI”、“H1foo”和“MERGE”图像分别表示相位差图像、DAPI荧光染色图像、H1foo荧光染色图像和将前述3种图像重合而得的图像。图1b左右的图像分别表示H1foo荧光染色2维和2.5维图像。图1c左右的图像分别表示对照细胞(小鼠成纤维细胞)和表达外源性H1foo的小鼠成纤维细胞的电子显微镜图像。图2中，图2a为表示将3种核重编程物质(小鼠Oct3/4、Sox2和Klf4基因[OSK基因])、OSK基因和连接组蛋白H1基因(OSK+H1c基因)、或OSK基因和H1foo基因(OSK+H1foo基因)导入小鼠成纤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种iPS细胞的品质改善剂，其特征在于，含有H1foo基因或其基因产物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.10 JP 2015-1386451.一种iPS细胞的品质改善剂，其特征在于，含有H1foo基因或其基因产物。2.根据权利要求1所述的iPS细胞的品质改善剂，其特征在于，含有包含H1foo基因的表达载体。3.一种iPS细胞的制造方法，其特征在于，包括将(a)核重编程物质和(b)H1foo基因或其基因产物导入体细胞的工序。4.根据权利要求3所述的iPS细胞的制造方法，核重编程物质包括选自由Oct基因家族基因、Sox基因家族基因、Klf基因家族基因、Myc基因家族基因、Lin基因家族基因、和Nanog基因、以及它们的基因产物组成的组的至少一种。5.根据权利要求3或4所述的iPS细胞的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤浅慎介，福田恵一，国富晃，
申请(专利权)人：心脏康复株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP