大豆转基因时间MON87705及其检测方法技术

本发明专利技术提供了转基因大豆事件MON87705以及包含可判断该大豆事件的DNA的细胞、种子和植物。本发明专利技术还提供了包含可判断样品中所述大豆事件的核苷酸序列的组合物，用于检测样品中所述大豆事件核苷酸序列的存在的方法，用于检测可判断样品中所述大豆事件的存在的核苷酸序列的探针和引物，培育这种大豆事件的种子成为大豆植物的方法，和产生包含可判断该大豆事件的DNA的大豆植物的育种方法。

【技术实现步骤摘要】
大豆转基因时间MON87705及其检测方法本申请是申请日为2009年09月28日和专利技术名称为“大豆转基因时间MON87705及其检测方法”的200980138582.7号专利技术专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求享有于2008年9月29日提交的美国临时申请61/100,859的优先权。序列表的引入作为AnnexC/ST.25文本格式的序列表拷贝，含有2009年9月22日创建的、名称为“56047-0000WO_seqlist.pdf”、大小为50995字节(在MS-DOS中确定)的文件，在此经由EFS网络以电子方式提交，并通过引用并入本文。
本专利技术涉及转基因大豆事件MON87705及其植物部分和种子。该事件显示出包含改变的脂肪酸水平的油组成。本专利技术还涉及检测生物样品中大豆事件的存在的方法，并且提供能够进行该检测的核苷酸序列。
技术介绍
大豆是一种重要的作物，并且是世界许多地区的主要食物来源。生物技术方法已经应用于大豆以改进农艺学性状和产品质量。一种这样的质量性状是包含改变的脂肪酸水平的大豆油。能够检测特定植物的转基因/基因组DNA的存在以确定有性杂交的后代是否含有感兴趣的转基因/基因组DNA将是有利的。另外，当遵守要求上市前审批及对源自重组作物植物的食品进行标注的规定时，检测特定植物的方法是有用的。大豆油已经通过多种育种方法改良，以产生对于特定市场的利益。但是，对于诸如色拉油、烹饪用油和煎炸用油消费者等主要大豆油使用者和诸如生物柴油(biodiesel)和生物润滑油(biolube)市场等工业市场广泛有益的大豆油无法获得。现有的大豆油或者太过昂贵，或者缺乏重要的食品质量性质，如氧化稳定性、良好的煎炸食物味道或饱和脂肪含量，或重要的生物柴油性质，如适当的一氧化氮排放或耐寒性或低温流动性。大豆油一般含有大约20％的油酸。油酸具有一个双键，但是在高温下仍然相对稳定，具有高油酸含量的油适于烹饪和其它需要加热的过程。最近，推荐增加食用高油酸含量的油，因为油酸似乎能降低血液中的低密度脂蛋白(“LDLs”)的水平，而不影响高密度脂蛋白(“HDLs”)的水平。但是，油酸水平的一些限制是希望的，因为当油酸在高温下降解时，它产生味道不好的化合物，并且减少了亚油酸氧化产生的好味道。Neff等人，JAOCS，77：1303-1313(2000)；Warner等人，J.Agric.FoodChem.49：899-905(2001)。因此优选使用油酸水平为65-85％(重量)或更低的油，以限制食品应用(例如煎炸用油和煎炸的食物)中的异味。其它优选的油为了改善氧化稳定性而具有高于55％(重量)的油酸水平。对于许多油应用来说，低于8％(重量)或甚至低于大约2-3％(重量)的饱和脂肪酸水平是理想的。大豆油一般含有大约16-20％的饱和脂肪酸：13-16％的棕榈酸和3-4％的硬脂酸(总体参见Gunstone等人，TheLipidHandbook，Chapman&Hall，London(1994))。饱和脂肪酸具有高熔点，这在许多应用中是不希望的。当用作原料或燃料时，饱和脂肪酸导致在低温下变浑浊(clouding)，并且赋予燃料较差的低温流动性能，例如倾点和低温过滤器堵塞点。含有低水平饱和脂肪酸的油产品受到消费者和食品工业的偏爱，因为它们被认为是更健康的和/或可以按照FDA的规定标上“不含饱和脂肪”。另外，低饱和度的油减少或者消除了对诸如色拉油等食品用油进行防冻准备的需求。在生物柴油和润滑油应用中，具有低水平饱和脂肪酸的油赋予改进的低温流动性能，并且在低温下不会浑浊。产生具有中油酸和低饱和物含量的种子的大豆系是理想的。此处公开的方法使得能够产生油酸水平在55-80％的中等油酸范围且饱和脂肪酸水平低于8％的大豆种子。已知外来基因在植物中的表达受其染色体位置的影响，可能是由于染色质结构(如异染色质)或靠近整合位点的转录调控元件(如增强子)的接近性(Weising等人，1988，Ann.Rev.Genet22：421-477)。基于这个原因，通常需要筛选大量的事件以判断以引入的目标基因的最佳表达为特征的事件。例如，在植物和其它生物中已观察到：引入基因的表达水平在事件之间差异很大。在表达的空间或时间模式上也有差异，例如，转基因在不同植物组织中的相对表达的差异，这可能不符合从引入的基因构建体中存在的转录调控元件预期的模式。基于这个原因，通常产生数百至数千个不同的事件，并对这些事件进行筛选，以选择具有所需转基因表达水平和用于商业目的的模式的单一事件。具有理想的转基因表达水平或模式的事件可以用于通过使用传统育种方法的有性远交将转基因渗入其它遗传背景中。这种杂交的后代保持原转化体的转基因表达特征。这一策略用来确保适当地适应当地特定生长条件的许多品种中的可靠的基因表达。可以通过任何公知的核酸检测方法如聚合酶链反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交来检测转基因的存在。这些检测方法一般集中于经常使用的遗传元件，如启动子、终止子、标记基因等。因此，这些方法可能无法用于区分不同的事件，特别是使用相同的DNA构建体产生的那些，除非邻近插入的DNA的染色体DNA(“侧翼DNA”)的序列是已知的。例如，Taverniers等人(J.Agric.FoodChem.，53：3041-3052，2005)讨论了事件特异性的PCR分析方法，其中证明了用于转基因玉米株系Bt11、Bt176和GA21及用于油菜(canola)事件GT73的事件特异性追踪系统。在这项研究中，事件特异性的引物和探针基于各事件的基因组/转基因连接区(junction)的序列进行设计。转基因植物事件特异性的DNA检测方法也已在美国专利6,893,826、6,825,400、6,740,488、6,733,974、6,689,880、6,900,014和6,818,807中描述。本专利技术涉及具有包含改变的脂肪酸水平的油组成的转基因大豆(Glycinemax)植物MON87705，并且涉及大豆植物MON87705的DNA构建体和大豆MON87705及其后代中转基因/基因组插入区域的检测。专利技术概述本专利技术包括被命名为MON87705的转基因大豆植物及其与大豆事件MON87705不可区分的后代(这些后代也含有至少一个对应于插入的转基因DNA的等位基因)，其种子以保藏号PTA-9241保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。本专利技术的另一方面是大豆事件MON87705的后代植物或种子或该植物和种子的可再生部分。本专利技术也包括大豆事件MON87705的植物部分，该植物部分包括但不限于：花粉、胚珠、花、芽、根、茎、叶、荚、种子和分生组织。MON87705的基因组中含有的新型遗传组合物和来自MON87705的产物，如油、粗粉、细粉、食品、蛋白质补充剂和残留在已收获对应于MON87705的大豆植物的田间的生物质，是本专利技术的方面。本专利技术提供一种大豆植物，其能够产生具有包含大约55-80％(重量)的油酸和少于8％(重量)的饱和脂肪酸的油组成的种子，其中所述油组成的遗传决定因素可从ATCC保藏号为PTA-9241的大豆获得。根据本专利技术的一个方面，提供了用于检测是否存在来自被命名为MON87705的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大豆植物细胞，其包含含有多核苷酸的DNA分子，该多核苷酸具有是选自SEQ ID NO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列,其中所述大豆植物细胞是非繁殖细胞。

【技术特征摘要】
2008.09.29 US 61/100,8591.一种大豆植物细胞，其包含含有多核苷酸的DNA分子，该多核苷酸具有是选自SEQIDNO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列,其中所述大豆植物细胞是非繁殖细胞。2.从大豆植物获得的大豆植物细胞，其中所述植物细胞包含多核苷酸，该多核苷酸具有是选自SEQIDNO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列,其中所述大豆植物细胞是非繁殖细胞。3.一种油组合物，其包含大约55-80％的油酸和少于8％的饱和脂肪酸，其中所述油组合物的遗传决定因素可从包含大豆转基因事件MON87705的植物获得，包含所述事件的代表性种子样品以ATCC保藏号PTA-9241保藏于ATCC，其中所述油组合物还包含具有选自SEQIDNO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列的多核苷酸。4.如权利要求3所述的油组合物，其中所述所述油组合物包含72.8％的油酸。5.如权利要求4所述的油组合物，其中所述所述油组合物还包含2.5％的棕榈酸和3.4％的硬脂酸。6.一种产生包含改变的脂肪酸水平的大豆植物的方法，包括将包含大豆事件MON87705的植物与缺乏大豆事件MON87705的大豆植物杂交，以获得包含所述大豆事件MON87705和改变的脂肪酸水平的植物，其中包含所述事件的种子的代表性样品以ATCC保藏号PTA-9241保藏。7.从包含大豆转基因事件MON87705的种子获得的包含具有选自SEQIDNO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列的多核苷酸的油组合物。8.由权利要求7所述的油组合物衍生的包含具有选自SEQIDNO:1、2和18的两个或多个序列或互补于该序列的序列的多核苷酸的商品，选自烹饪用油、色拉油、起酥油、卵磷脂、无毒塑料、印刷油墨、润滑剂、蜡、液压流体、变压器流体、溶剂、化妆品、护发产品和生物柴油。9.一种包含多核苷酸的DNA分子，该多核苷酸具有选自SEQIDNO:1、2和18列出的两个或多个序列或互补于该序列的序列。10.一种分离的DNA分子，该DNA分子包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的至少大约11个至大约20个连续核苷酸。11.包含多核苷酸的大豆细胞的基因组，所述多核苷酸具有选自SEQIDNO:1、2和18列出的序列的两个或多个序列或互补于该序列的序列。12.一种检测生物样品中大豆事件MON87705DNA的存在的方法，包括：i.使样品接触探针，该探针在严格杂交条件下与选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2及其互补序列的序列杂交，并且在严格杂交条件下不与不含选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2及其互补序列的序列的大豆植物基因组DNA杂交；ii.使所述样品和所述探针经受严格杂交条件；和iii.检测所述探针与所述样品的结合；其中结合则判断所述样品中存在所述DNA。...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·瓦格纳，W·C·伯恩斯，E·J·古西，P·D·罗伯斯，
申请(专利权)人：孟山都技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US