细胞计数方法、细胞计数装置和细胞计数程序制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种细胞计数方法，在细胞培养中，即使在细胞密集而形成立体的细胞团时，也能够不打散该细胞团而准确地计数培养细胞数。该方法如下：取得培养细胞的图像，并由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，分别依据细胞团的图像和单独细胞的图像，计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞计数方法、细胞计数装置和细胞计数程序
本专利技术涉及计数细胞的方法，特别涉及用于在培养浮游细胞时，不损害增殖效率而准确地计数培养中的细胞数的细胞计数方法、细胞计数装置和细胞计数程序。
技术介绍
近年，在药品生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞、组织、微生物等。 当这样大量培养细胞时，有必要在培养浮游细胞时计数培养中的细胞数，掌握细胞数随时间的变化、增殖效率的变化。但是，对于准确地计数培养中的细胞数，一直以来存在各种各样的问题。 即，在浮游细胞的增殖中，存在细胞立体地集合而形成的细胞团和独自分离的单独细胞。 一直以来，进行如下的方法:从上方或下方拍摄这些培养细胞，依据所得图像中的培养细胞的投影面积，通过用细胞团的投影面积除以每一个的平均细胞面积，从而计数细胞数。 但是，由于细胞团是立体的，因此按照这样得到的细胞数被计数为少于细胞团的实际细胞数。另外，在单独细胞呈平面密集连接时，通过用单独细胞的投影面积除以每一个的平均细胞面积而得到的细胞数被计数为多于单独细胞的实际细胞数。因此存在如下问题，依据培养细胞的投影面积计数的细胞数不是准确的值。 另一方面，为了得到准确的细胞数，也考虑将细胞团完全打散并计数。 但是，通常存在细胞团的过于打散而招致细胞的扩增效率降低这一进一步的问题。因此，一直以来在培养过程中不能进行准确的计数，仅在细胞回收时能够进行准确的计数。 在此，作为计数培养细胞的细胞数的现有方法，可以列举例如专利文献I中记载的细胞数计量方法。在该方法中，取得存在于培养容器内的培养细胞的观察图像，在取得的观察图像内计算培养细胞所占有的面积比率作为占有面积率，根据计算的占有面积率和规定的关系式计算存在于培养容器内的培养细胞的细胞数。 现有技术文献 专利文献 专利文献1:日本特开2007 - 124913号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题 但是，由于该方法是根据占有面积率计算细胞数的方法，因此如上所述，不能够进行准确的计数。另一方面，为了进行准确的计数，若将细胞团打散，则招致增殖效率的降低。 本专利技术是鉴于上述情况而完成的，目的在于提供即使存在细胞团也能够不将其打散而准确地计数细胞数的细胞计数方法、细胞计数装置和细胞计数程序，该方法如下:取得培养中的培养细胞的图像，并由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，对细胞团的图像和单独细胞的图像分别进行图像处理，分别计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数。 用于解决课题的方法 为了达成上述目的，本专利技术的细胞计数方法是计数培养细胞的方法，其中，取得培养中的培养细胞的图像，由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，分别依据细胞团的图像和单独细胞的图像，计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数。 另外，本专利技术的细胞计数装置是用于计数培养细胞的细胞计数装置，其具备:取得培养中的培养细胞的图像的单元、由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像的单元、和分别依据细胞团的图像和单独细胞的图像，计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数的单元。 另外，本专利技术的细胞计数程序是用于计数培养细胞的细胞计数程序，其使计算机执行以下内容:输入培养中的培养细胞的图像，由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，分别依据细胞团的图像和单独细胞的图像，计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数。 专利技术效果 根据本专利技术， 能够不损害增殖效率而准确地计数培养中的细胞数。 【附图说明】 图1是表示从培养容器的底面方向拍摄在培养容器中培养中的浮游细胞而得到的图像的图。 图2是表示从培养容器的底面方向拍摄在培养容器中培养中的浮游细胞而得到的图像中的细胞的投影面积的图。 图3是使用从培养容器的底面方向拍摄在培养容器中培养中的浮游细胞而得到的图像，将单独细胞和细胞团进行分离，表示细胞团的投影面积的图。 图4是使用从培养容器的底面方向拍摄在培养容器中培养中的浮游细胞而得到的图像，将单独细胞和细胞团进行分离，表示单独细胞的投影面积的图。 图5是表示培养中的浮游细胞中的单独细胞的直径变化的图。 图6是表示培养中的浮游细胞中的细胞团的体积的校正系数的图。 图7是表示本专利技术的细胞计数装置的构成的模块图。 图8是表示通过本专利技术的细胞计数装置执行的细胞计数程序的处理顺序的流程图。 图9是表示对基于本专利技术的细胞计数方法和现有的细胞计数方法的在培养容器中培养中的浮游细胞的计数结果进行比较的图。 【具体实施方式】 下面对于本专利技术的细胞计数方法、细胞计数装置和细胞计数程序的优选实施方式，参照附图进行说明。 [细胞计数方法] 首先，对于本实施方式的细胞计数方法，参照图1~图6进行说明。 本实施方式的细胞计数方法是计数培养容器中的培养细胞数的方法，只要是如下的方法即可:取得培养容器中的规定的区域的图像，由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，对细胞团的图像和单独细胞的图像分别进行图像处理，分别计算细胞团的细胞数和单独细胞的细胞数。并不限定于实施方式和实施例的具体构成，可以成为具备例如以下的工序的方法。 (A)培养细胞的图像的取得 首先，拍摄培养容器中的规定的区域，取得图像。具体例如从透明的培养容器的上方照射光，从下方经由显微镜利用相机自动地拍摄培养细胞，从而能够取得培养容器中的规定的区域的图像。下面有时将该图像称为“观察图像”。图1表示按照这样得到的拍摄培养容器中的浮游细胞而得到的观察图像。在该图中示出了细胞团1、单独细胞2存在于培养液3中的样态。 需要说明的是，可以仅拍摄培养容器中的规定的区域，将该区域中的细胞数计数后，依据该区域相对于培养容器整体的比例计算培养容器整体的培养细胞数。 在此，以往，使用该观察图像制成如图2中所示的细胞的投影面积图像，用细胞的投影面积11除以每一个细胞的平均面积来计算细胞数。但是，对于用这样的方法得到的细胞数而言，由于细胞团I是立体的，因此与细胞团I对应的部分变得少于实际的细胞数。另外，关于与单独细胞2对应的部分，单独细胞2平面地连接的部分也包含于细胞投影面积11中，其结果是被计数为多于实际的细胞数。因此，在这样的现有方法中不能够准确地计数培养细胞数。 (B)细胞团与单独细胞的图像分离 接着，将观察图像中的细胞团I和单独细胞2的图像进行分离，分别制成细胞团的图像和单独细胞的图像。 具体地，首先如图3所示，制成仅表示细胞团I的细胞投影面积21的细胞团的图像。然后，使用该细胞团的图像，计量细胞团I的细胞投影面积21。 另外，如图4所示，从观察图像删去细胞团1，制成单独细胞的图像。然后，使用该单独细胞的图像，以能够将单独细胞2分别计数的方式将单独细胞2以圆形近似从而进行将它们分别区分的圆形近似处理。由此，在单独细胞的图像中示出进行了圆形近似的单独细胞22。然后，使用该单独细胞的图像计量单独细胞2的个数，并且计量单独细胞2的平均面积。 在此，如图5所示，有时培养中的培养细胞的大小根据培养时间而变化。在该图中表示了将人的淋巴球细胞增殖时的细胞直径的变化。 如该图所示，在培养的初期，培养细胞的直径逐渐增加，但在经过一定时间后反而能够看到直径变小的倾向。因此，由于单独本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞计数方法，其是计数培养细胞的方法，其特征在于，取得所述培养细胞的图像，由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像，分别依据所述细胞团的图像和所述单独细胞的图像，计算所述细胞团的细胞数和所述单独细胞的细胞数。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.31 JP 2012-0184031.一种细胞计数方法，其是计数培养细胞的方法，其特征在于， 取得所述培养细胞的图像， 由该图像分离细胞团的图像和单独细胞的图像， 分别依据所述细胞团的图像和所述单独细胞的图像，计算所述细胞团的细胞数和所述单独细胞的细胞数。2.根据权利要求1所述的细胞计数方法，其特征在于， 依据所述单独细胞的图像进行单独细胞的圆形近似，并计算所述单独细胞的细胞数和平均面积。3.根据权利要求2所述的细胞计数方法，其特征在于， 依据所述细胞团的投影面积计算所述细胞团的体积， 依据所述单独细胞的平均面积计算所述单独细胞的体积， 通过所述细胞团的体积除以所述单独细胞的体积，计算所述细胞团的细胞数。4.根据权利要求1或2所述的细胞计数方法，其特征在于， 预先设定所述单独细胞的体积， ...

【专利技术属性】
技术研发人员：国则正弘，末永亮，太田恭平，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP