【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞培养技术，特别涉及使用培养容器的细胞培养中的培养基更换。
技术介绍
1、近年来，在药物的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效大量地培养细胞或组织等。
2、基于这种情况，为了大量培养细胞，正在开发使用培养容器自动培养细胞的各种方法。
3、使用培养容器进行细胞培养时，在容器内被使用一段时间的培养基需要在指定时间更换为新的培养基。
4、作为容器内培养基的更换方法，主要可列举使容器内培养基循环而进行更换的循环法，在不使容器内培养基循环的情况下，向单一方向送液从而进行更换的非循环法。
5、这里所述的循环法是指，从培养容器排出一定比例的已使用的培养基，供应新的培养基后，为了使这些培养基在培养容器内均匀地混合，使用循环路径使培养基循环的方法。
6、现有技术文献
7、专利文献
8、专利文献1：日本特开2020-188691号公报
技术实现思路
1、专利技术所要解决的问题
2、然而，循环法存在如下问题，想要将培养基的更换率提高至接近100％时，需要进行非常繁杂的操作。也就是说，这种循环法在进行过程中有以下的情况。
3、首先，在从培养容器排出已使用的培养基的情况下，将培养基全部排出时存在细胞也会被排出的问题。因此，需要通过在将容器内培养基的液面高度保持在一定水平以上的状态下进行培养基的排出，从而使已使用的培养基的一部分残留在容器内。
4、
5、此外，从培养容器排出已使用的培养基后，向容器内供应新的培养基时，容器内培养基变得不均匀，存在培养效率低下的问题。
6、为此，需要实施如下循环法，即在培养容器设置2个端口，用管连接这些端口形成环状流路，通过循环容器内的培养基而使培养基均匀化，或者需要对培养容器施加振动等方式搅拌培养基而使其均匀化。
7、像这样，实施循环法时，为了将培养基的更换率提高至接近100％，需要繁杂的作业，需要反复进行如下操作，即将已使用的培养基从培养容器排出，向容器内供应新培养基，形成环状流路而实施循环法。而且，为了培养基的均匀化对培养容器施加振动的情况也需要手动搅拌或使用搅拌工具，因此繁杂。
8、另一方面，在非循环法中，可以进行培养基更换率为100％的培养基更换，但存在难以控制培养基更换率的问题。
9、也就是说，根据非循环法，通过在培养容器设置两个端口，将培养基供应用管和培养基排出用管与各端口连接，从培养基排出用管排出已使用的培养基，同时从培养基供应用管供应新培养基，由此可以将培养基100％更换。
10、但是，已有实验得知，例如在将球体分化诱导为中胚层等的情况下，当进行接近100％的培养基更换时，细胞的培养效率反会受到阻碍(参见参考例1)。因此，希望将培养基更换率不仅控制在100％，还可以控制在期望的水平，但非循环法中难以进行。此外，非循环法还存在更换培养基所需的培养基量增多的问题。
11、因此，本专利技术人等进行了深入研究，成功开发了如下方法，并完成了本专利技术，该方法不需要为了培养容器内的培养基均匀化而形成环状流路或进行培养容器的搅拌，能够适当控制容器内的培养基的更换率。
12、在此，专利文献1中公开了用于进行连续的细胞培养的细胞培养装置，记载了控制培养基供应的结构。然而，该细胞培养装置不能适当控制培养基的更换率。
13、本专利技术是鉴于上述情况而完成的，目的在于提供一种在使用培养容器的细胞培养中可适当控制容器内培养基的更换率的细胞培养方法、细胞培养试剂盒、及细胞培养系统。
14、解决问题的方法
15、为了达到上述目的，本专利技术的细胞培养方法，使用填充有细胞和培养基并进行细胞培养的培养容器，和填充有新培养基并向上述培养容器供应培养基的培养基供应容器，上述培养容器至少具备用于供应培养基的第一端口和用于排出培养基的第二端口，将上述培养基供应容器作为用于调整向上述培养容器供应的新培养基的浓度的混合用容器，将上述培养容器中已使用的培养基的一部分从上述培养容器移送至上述混合用容器，在上述混合用容器中将上述新培养基和上述已使用的培养基的一部分混合而制备已调整浓度的培养基，将上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器，同时从上述培养容器排出上述已使用的培养基的剩余部分，向上述培养容器填充上述已调整浓度的培养基。
16、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，将上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器，同时从上述培养容器排出上述已使用的培养基的剩余部分时，上述培养容器内的培养基量不发生变化，上述培养容器内的上述已使用的培养基的剩余部分被上述已调整浓度的培养基置换后，停止从上述培养容器的排出，将与上述已使用的培养基的一部分相当的量的上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器。
17、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，将上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器，同时从上述培养容器排出上述已使用的培养基的剩余部分之前，将上述培养容器中上述已使用的培养基的剩余部分的一部分从所述培养容器排出，降低上述培养容器中培养基的液面高度，维持上述培养容器中培养基的液面高度降低的状态，并将上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器，同时从上述培养容器排出上述培养容器中上述已使用的培养基的剩余部分全部，向上述培养容器填充上述已调整浓度的培养基。
18、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，上述培养容器内的上述已使用的培养基的剩余部分的全部被上述已调整浓度的培养基置换后，停止上述培养容器的排出，将与上述已使用的培养基的一部分相当的量的上述已调整浓度的培养基从上述混合用容器移送至上述培养容器
19、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，调整上述混合用容器中新培养基的量与从上述培养容器移送至上述混合用容器的已使用的培养基的量的混合比例，控制上述培养容器的培养基更换率。
20、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，调整上述混合用容器中新培养基的量与从上述培养容器移送至上述混合用容器的已使用的培养基的量的混合比例之前，测量上述培养容器内的培养基更换所需的送液量，并且确定向上述培养容器供应的新培养基的期望浓度，根据上述所需的送液量以及上述期望浓度，确定上述混合用容器中新培养基的量以及从上述培养容器移送至上述混合用容器的已使用的培养基的量。
21、此外，本专利技术的细胞培养方法，优选地，将上述培养容器的培养基更换率控制在50％以上且小于100％。
22、此外，本专利技术的细胞培养试剂盒具备：培养容器，其至少具备用于供应培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞培养方法，所述方法使用填充有细胞和培养基并进行细胞培养的培养容器，和填充有新培养基并向所述培养容器供应培养基的培养基供应容器，所述方法特征在于，
2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，将所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器，同时从所述培养容器排出所述已使用的培养基的剩余部分时，所述培养容器内的培养基量不发生变化，所述培养容器内的所述已使用的培养基的剩余部分被所述已调整浓度的培养基置换后，停止从所述培养容器的排出，将与所述已使用的培养基的一部分相当的量的所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器。
3.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，将所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器，同时从所述培养容器排出所述已使用的培养基的剩余部分之前，将所述培养容器中所述已使用的培养基的剩余部分的一部分从所述培养容器排出，降低所述培养容器中培养基的液面高度，
4.根据权利要求3所述的细胞培养方法，其特征在于，所述培养容器内的所述已使用的培养基的剩余部分的全部被所述已调整浓度的培养
5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞培养方法，其特征在于，调整所述混合用容器中新培养基的量与从所述培养容器移送至所述混合用容器的已使用的培养基的量的混合比例，
6.根据权利要求5所述的细胞培养方法，其特征在于，调整所述混合用容器中新培养基的量与从所述培养容器移送至所述混合用容器的已使用的培养基的量的混合比例之前，
7.根据权利要求5或6所述的细胞培养方法，其特征在于，将所述培养容器的培养基更换率控制在50％以上且小于100％。
8.一种细胞培养试剂盒，其特征在于，具备：
9.一种细胞培养系统，其特征在于，具备：
10.根据权利要求9所述的细胞培养系统，其特征在于，
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞培养方法，所述方法使用填充有细胞和培养基并进行细胞培养的培养容器，和填充有新培养基并向所述培养容器供应培养基的培养基供应容器，所述方法特征在于，
2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，将所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器，同时从所述培养容器排出所述已使用的培养基的剩余部分时，所述培养容器内的培养基量不发生变化，所述培养容器内的所述已使用的培养基的剩余部分被所述已调整浓度的培养基置换后，停止从所述培养容器的排出，将与所述已使用的培养基的一部分相当的量的所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器。
3.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，将所述已调整浓度的培养基从所述混合用容器移送至所述培养容器，同时从所述培养容器排出所述已使用的培养基的剩余部分之前，将所述培养容器中所述已使用的培养基的剩余部分的一部分从所述培养容器排出，降低所述培养容器中培养基的液面高度，
4.根据权利要求3所述的细胞培养方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：西山乔晴，田中乡史，小关修，户谷贵彦，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：
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