具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法技术

本发明专利技术属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子被敲除；所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子的敲除技术为CRISPR技术；所述通用型CART/TCRT细胞既保留了肿瘤特异抗原的靶向性，又排除了GvHD和排斥的问题，并减弱对化疗药物Fludarabine和Clofarabine的敏感度，可以作为一种通用型的简易，低成本，高活性CART/TCRT细胞制剂使用。

General CART/TCRT cells with chemotherapeutic drug resistance and their construction methods

The invention belongs to the field of synthetic biology and genetic engineering, in particular to a chemotherapy drug resistance of general CART/TCRT cell and its construction method, the general type CART/TCRT cells are the chimeric antigen receptor and T cell receptor of allogeneic T cells, the T cell receptor alpha and beta chains and deoxycytidine kinase molecules by knockout T; the cell receptor alpha and beta chain and deoxycytidine kinase molecule knockout technology CRISPR technology; the universal CART/TCRT cell retains the targeted tumor specific antigen, and eliminate GvHD and rejection problems, and reduced to Fludarabine chemotherapy and Clofarabine sensitivity, simple, can as a common type of low cost, high activity of CART/TCRT cell preparations.

【技术实现步骤摘要】
具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法
本专利技术属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法。
技术介绍
嵌合抗原受体T细胞(CART)是目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一，其基本原理主要是提取患者自身的T细胞，并通过基因和细胞工程手段使其表达特异性嵌合抗原受体，使之能够识别和结合肿瘤细胞表面抗原，从而起到靶向杀伤肿瘤细胞的作用。CAR-T在白血病和淋巴瘤治疗中取得显著的疗效，2017年8月30日，美国食品卫生安全委员会FDA宣布批准诺华CAR-T细胞疗法正式上市，用于治疗复发性或难治性儿童、青少年B-细胞急性淋巴细胞白血病(rALL)，其商品名为Kymriah(tisagenlecleucel)。急性淋巴细胞白血病在15岁以下儿童癌症确诊病例中约占25％，是美国最常见的儿童癌，在我国急性淋巴细胞性白血病占儿童急性白血病的80％，发病率为十万分之一。也可发生于成年人，占所有成年人白血病发病率的20％。根据美国国家癌症研究所估计，每年约有3100名年龄在20岁以下的患者被诊断为这一疾病，由于我国庞大的人口基数本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞，其特征在于，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子被敲除。

【技术特征摘要】
1.具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞，其特征在于，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子被敲除。2.如权利要求1所述的通用型CART/TCRT细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体为靶向CD19，CD20，CD22，CD30，CD33，CD38，CD123，CD138，CD171，MUC1，AFP，Alphafolatereceptor，CEA，PSCA，PSMA，Her2，EGFR，IL13Rα2，GD2，NKG2D，EGFRvIII，CS1，BCMA，Mesothelin的嵌合抗原受体。3.如权利要求1所述的通用型CART/TCRT细胞，其特征在于，所述T细胞受体为靶向HBV，HPVE6，NY-ESO，mNY-ESO，WT1，MART-1，MAGE-A3，MAGE-A4，P53，Thyroglobulin，Tyrosinase的T细胞受体。4.如权利要求1-3所述具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞的构建方法，其特征在于，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子的敲除技术为CRISPR技术。5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，采用CRISPR技术所使用的sgRNA和crRNA序列为：sgRNA-TCRα选自以下序列：sgRNA-TCRα-1:GAGAATCAAAATCGGTGAAT(SEQIDNO.1)sgRNA-TCRα-2:GCTGGTACACGGCAGGGTCA(SEQIDNO.2)sgRNA-TCRα-3:GTCAGGGTTCTGGATATCTG(SEQIDNO.3)sgRNA-TCRα-4:ACAAAACTGTGCTAGACATG(SEQIDNO.4)sgRNA-TCRα-5:CTTCAAGAGCAACAGTGCTG(SEQIDNO.5)sgRNA-TCRα-6:TGGAATAATGCTGTTGTTGA(SEQIDNO.6)sgRNA-TCRα-7:TAGGCAGACAGACTTGTCAC(SEQIDNO.7)sgRNA-TCRα-8:TGGATTTAGAGTCTCTCAGC(SEQIDNO.8)sgRNA-TCRα-9:TCTCTCAGCTGGTACACGGC(SEQIDNO.9)sgRNA-TCRα-10:AGAGTCTCTCAGCTGGTACA(SEQIDNO.10)；sgRNA-TCRβ选自以下序列：sgRNA-TCRβ-1:GAGCAGCCGCCTGAGGGTCT(SEQIDNO.11)sgRNA-TCRβ-2:GAGCTGGTGGGTGAATGGGA(SEQIDNO.12)sgRNA-TCRβ-3:GCTGTCAAGTCCAGTTCTAC(SEQIDNO.13)sgRNA-TCRβ-4:GGCTCTCGGAGAATGACGAG(SEQIDNO.14)sgRNA-TCRβ-5:GGAGAATGACGAGTGGACCC(SEQIDNO.15)sgRNA-TCRβ-6:GGCGCTGACGATCTGGGTGA(SEQIDNO.16)sgRNA-TCRβ-7:GTTGCGGGGGTTCTGCCAGA(SEQIDNO.17)sgRNA-TCRβ-8:GCAGTATCTGGAGTCATTGA(SEQIDNO.18)sgRNA-TCRβ-9:GGCACACCAGTGTGGCCTTT(SEQIDNO.19)sgRNA-TCRβ-10:GGCTCAAACACAGCGACCTC(SEQIDNO.20)；sgRNA-dCK选自以下序列：sgRNA-dCK-1:GAACATCGGTAAGGAGCCTC(SEQIDNO.21)sgRNA-dCK-2:TTAAACAATTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺小宏，王延宾，袁鹏，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32