一种稳定表达猪源TLR5 受体基因的NF‑κB 双荧光素酶报告细胞及构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及稳定表达猪源TLR5受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。该细胞系是指转入了猪源TLR5受体基因的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。本发明专利技术提供能够用于研究pTLR5活化激活下游NF‑κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本发明专利技术也为RNA‑Seq技术高通量筛选pTLR5静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究TLR5的种属特异性奠定了基础和平台。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达猪源TLR5受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞及构建方法
本专利技术属于生物
具体涉及稳定表达猪源TLR5(pTLR5)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说，本专利技术提供能够用于研究pTLR5活化激活下游NF-κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本专利技术也为RNA-Seq技术高通量筛选pTLR5静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究TLR5的种属特异性奠定了基础和平台。
技术介绍
TOLL样受体5型(TLR5)TLR5作为I型跨膜糖蛋白，具有胞外LRR结构域，跨膜区和胞内Toll/IL-1R(TIR)结构域。TLR5是唯一识别细菌鞭毛蛋白的TLR蛋白，从鱼类到哺乳动物均高度保守。一旦识别细菌鞭毛蛋白后，TLR5发生聚合，胞浆内的TIR结构域招募并结合MyD88。然后典型MyD88依赖的信号通过IRAK4，IRAK1和TRAF6激活IκB蛋白激酶，IκB被磷酸化后降解，NF-κB随之释放并发生核转位。同时，蛋白激酶MAPK包括p38,ERK和AKT也发生活化。这些细胞信号一起驱动炎症细胞因子基因转录和表本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达猪源TLR5受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源TLR5受体基因pTLR5的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达猪源TLR5受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源TLR5受体基因pTLR5的HEK293-NF-κB细胞，所述HEK293-NF-κB细胞是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种稳定表达猪源TLR5受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)含pTLR5基因编码区的pcDNA真核表达载体的构建设计PCR引物，从猪肺泡巨噬细胞PAM的RNA中RT-PCR扩增pTLR5基因编码区，扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体连接；将得到的含pTLR5的pENTR4重组质粒和目的pcDNA表达载体pDEST47(进行位点特异重组反应，获得重组pcDNApTLR5克隆；(2)HEK293-NF-κB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：培养人胚肾细胞HEK293至融合度70％-80％，利用表达NF-κB虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞，感染细胞用10μg/ml杀稻瘟...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建中，周荣云，李双洁，何姗，朱美芹，朱媛媛，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32