肾细胞群及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特征在于生物标志物的富集的异质哺乳动物肾细胞群以及制备和使用所述富集的异质哺乳动物肾细胞群的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肾细胞群及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2012年10月24日提交的名称为“IsolatedRegenerativeRenalCellsandUsesThereof”的美国临时专利申请序号61/718,150以及2013年9月11日提交的名称为“RenalCellPopulationsandUsesThereof”的美国临时专利申请序号61/876,616的优先权。
本公开总体上涉及一种富集的异质哺乳动物肾脏来源的细胞群，鉴定所述细胞群的方法，所述细胞群用于制备再生医学治疗物的方法，并且本文提供了通过将所述富集的异质肾脏来源的细胞群施用至哺乳动物受试者来治疗肾脏疾病的方法。专利技术背景已经成功采用了胶原和明胶基生物材料用于各种组织工程应用(Rohanizadeh等JMaterSciMaterMed2008；19:1173-1182；Takemoto等TissueEngPartA2008；14:1629-1638；Young等JControlRelease2005；109:256-274)。这两种大分子的特征在于优良的生物相容性和低抗原性(Cenni等JBiomaterSciPolymEd2000；11:685-699；Lee等IntJPharm2001；221:1-22；Waksman等JImmunol1949；63:427-433)；然而，因为明胶通过胶原的水解而获得，所以明胶具有优于胶原的某些优点：(a)其容易获得并且易于使用；(b)提供关于分子量和水华(bloom)的选择(即控制物理性质)；以及(c)对于化学修饰更灵活并且更易于制造。此外，从生物角度看，明胶保持了类似于胶原的细胞相容性和细胞粘附性质(Engvall等IntJCancer1977；20:1-5；Kim等OralSurgOralMedOralPatholOralRadiolEndod2009；108:e94-100)。已经报道了各种方法用于交联这些大分子以达到延迟其生物降解，从而延长其体内停留(在组织工程应用中)或定制其药物释放能力(当用作药物载体时)的目的。已经公布了众多方法用于化学或光化学交联胶原或明胶(Adhirajan等JMicroencapsul2007；24:647-659；Chang等MacromolBiosci2007；7:500-507；Gagnieu等BiomedMaterEng2007；17:9-18；Kimura等JBiomaterSciPolymEd2010；21:463-476；Ma等JBiomedMaterResA2004；71:334-342；Vandelli等IntJPharm2001；215:175-184；Vandelli等JControlRelease2004；96:67-84)。这些方法中的大多数的目标为减小这些生物材料对酶促降解的易感性并且延长其体内停留时间(Chang等同上2007；Ma等同上2004)。通常采用其它交联方法来得到适合作为缓释药物、蛋白质或核酸载体的明胶或胶原基生物材料(Kimura同上2010；Vandelli同上2004；Kommareddy等Nanomedicine2007；3:32-42；Sehgal等ExpertOpinDrugDeliv2009；6:687-695；Sutter等JControlRelease2007；119:301-312)。用于胶原和明胶以及其它组织工程相容性系统的广泛使用的交联剂类别是碳二亚胺(Adhirajan同上2007；OldeDamink等Biomaterials1996；17:765-773；Pieper等Biomaterials2000；21:581-593；Cornwell等ClinPodiatrMedSurg2009；26:507-523)。这些分子被称为零长度交联剂并且通过在存在于待交联的物质上的羧基与伯胺官能团之间介导酰胺键形成来起作用。此外，与其它常见交联剂(例如戊二醛)相比，碳二亚胺的细胞毒性更小(Lai等JMaterSciMaterMed2010；21:1899-1911)。戊二醛被用作呈CultispherTM珠粒形式的交联剂。Burg美国专利号6,991,652描述了用于可以被递送至受试者的细胞的含有三维支撑构建体的组织工程复合材料。再生医学技术提供了慢性肾脏疾病(CKD)的下一代治疗选择。Presnell等WO/2010/056328和Ilagan等PCT/US2011/036347描述了分离的生物活性肾细胞(包括肾小管和产生促红细胞生成素(EPO)的肾细胞群)，和分离并且培养所述生物活性肾细胞的方法，以及利用所述细胞群治疗有需要的受试者的方法。存在对适合用于在组织工程和再生医学应用中将活性剂例如生物活性细胞递送至有需要的受试者的治疗制剂的需要。肾脏是进行许多功能以保持血液清洁和化学平衡的复杂器官。除了去除废物之外，肾脏释放三种重要的激素：促红细胞生成素或EPO，其刺激骨髓制造红细胞肾素，其调节血压；以及钙三醇，维生素D的活性形式，其有助于维持骨和体内正常化学平衡所需的钙。为了执行这些功能，肾脏包括众多不同的细胞类型。然而，再生反应不需要所有的肾细胞并且鉴定可用于诱发再生反应的细胞的组合已成为研究的主题。因此，仍存在对鉴定可用于本文所公开的治疗制剂的异质肾细胞群(即生物活性细胞)的方法的需要。专利技术概述本文公开了来自哺乳动物肾脏组织的异质哺乳动物肾细胞群。提供了用于分离和纯化哺乳动物肾脏来源的细胞群的方法。哺乳动物肾脏来源的细胞的独特群的特征在于表型特征，例如生物标志物表型。生物标志物表达表型在培养中的哺乳动物肾脏来源的细胞群多次传代之后仍被保留并且适合用于制备再生治疗物。本文描述了一种特征在于特异性生物标志物的人肾细胞群的选择群及其用途。人肾细胞的选择群允许使用较少数目的提供再生刺激的细胞。这个较少数目是有利的，因为它降低了不良免疫事件的概率以及提供再生刺激。选择的肾细胞群不需要大比例的有效作为再生刺激的干细胞。选择的肾细胞群可以从患病的肾脏中回收。一方面，提供了用于鉴定和/或表征异质肾细胞群的方法。在一个实施方案中，异质肾细胞群特征在于其生物标志物的表型表达。在某些实施方案中，肾细胞通过允许检测异质肾细胞群上/异质肾细胞群中的生物标志物的一种或多种试剂来鉴定。可以通过任何适合的方法，例如基于免疫荧光显微术、流式细胞计量术、光纤扫描细胞计量术或激光扫描细胞计量术的那些方法来进行生物标志物的检测。在一个实施方案中，提供了鉴定适合用于植入和/或诱发再生反应的异质肾细胞群的方法，其包括以下步骤：从哺乳动物肾脏样品中分离出细胞；使所述分离的细胞暴露于一个或多个被标记的检测部分，其中每个被标记的检测部分针对不同的生物标志物并且用不同的标记进行标记；确定表达每个所述生物标志物的细胞的百分率。在一个实施方案中，细胞群是表达列于表12.2和表12.3中的两个或更多个生物标志物的SRC细胞群。在一个实施方案中，生物标志物具有如在表12.4中所提供的表达水平。在一个实施方案中，SRC细胞群对于GGT-1和CK18分别具有大于18％和80％的表达水平。一方面，提供了含有活性剂(例如，生物活性细胞)的可注射治本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富集的异质哺乳动物肾细胞群，其表达生物标志物GGT‑1和细胞角蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.10.24 US 61/718,150;2013.09.11 US 61/876,6161.鉴定适合用于植入和/或诱发再生反应的异质肾细胞群的方法，所述方法包括以下步骤从哺乳动物肾脏样品中分离出细胞使所述分离的细胞暴露于被标记的检测部分，其中每个被标记的检测部分针对不同的生物标志物并且用不同的标记进行标记，其中所检测的生物标志物包括GGT-1、细胞角蛋白、VEGF和KIM-1；并且确定是否(i)异质肾细胞群中大于4.5％的分离细胞表达GGT-1，(ii)异质肾细胞群中大于80％的分离细胞表达细胞角蛋白；和(iii)异质肾细胞群中的分离细胞包含表达VEGF和KIM-1的细胞。2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括一种或多种选自以下的其他的生物标志物：AQP1、AQP2、AQP4、钙结合蛋白(Calbindin)、钙调节蛋白(Calponin)、CD117、CD133、CD146、CD24、CD31(PECAM-1)、CD54(ICAM-1)、CD73、CK40至CK67、CK7、CK8、CK18、CK19、连接蛋白43、Cubilin、CXCR4(融合素)、DBA、E-钙粘蛋白(CD324)、EPO(促红细胞生成素)、GLEPP1(肾小球上皮蛋白1)、结合球蛋白、Itgb1(整联蛋白β1)、MAP-2(微管相关蛋白2)、巨蛋白(Megalin)、N-钙粘蛋白、肾小球足细胞特异性蛋白(Nephrin)、NKCC(Na-K-Cl-协同转运蛋白)、OAT-1(有机阴离子转运蛋白1)、骨桥蛋白、Pan-钙粘蛋白、PCLP1(足细胞蛋白(podocalyxin)样1分子)、肾小球足细胞裂隙膜蛋白(Podocin)、SMA(平滑肌α-肌动蛋白)、突触极蛋白(Synaptopodin)、THP(塔霍二氏蛋白(tamm-horsfallprotein))、波形蛋白(Vimentin)、αGST-1(α谷胱甘肽S-转移酶)以及其组合。3.如权利要求1所述的方法，其中所述被标记的检测部分为抗体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其还包括确定是否所述异质肾细...

【专利技术属性】
技术研发人员：J巴苏，K古思里，D贾斯特威克兹，T伯内特，A布鲁斯，RW凯利，JW勒德洛，
申请(专利权)人：再生医学TX有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US