抗CD4和趋化因子受体结构域复合物的抗体及其抵抗HIV感染的应用制造技术

技术编号:1748691 阅读:241 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
含CD4趋化因子受体的宿主细胞抗原复合物的抗体的制备方法,包括: a.使用表达CD4的T细胞作为免疫原,这些T细胞选自下列组中: i.选自由外周血单核T细胞,胸腺细胞或脾细胞组成的组的正常T淋巴细胞;或 ii.选自由SUP-T和HPB-ALL组成的组的衍生自T淋巴瘤或白血病的T细胞系细胞; b.分离并以PBS清洗表达CD4的T细胞; c.以腹膜内注射方式对动物进行免疫接种,这些动物包括BALB/c小鼠,CD1小鼠,转基因小鼠,大鼠,或恒河猴,这些动物均注射有5-10x10↑[6]分离且以PBS清洗过的PBS或弗氏完全佐剂中的T细胞,接着每周或每两个月以5-10x10↑[6]分离且以PBS清洗过的不含佐剂的T细胞进行多次腹膜内强化注射,总共3至6个月,最后一次强化注射是在进行融合以形成杂交瘤之前3天以静脉内方式进行的; d.测试接受免疫接种动物的血清是否含可与rsCD4结合的抗体; e.将曾接受免疫接种且其血清在步骤d中呈阳性的动物的脾脏切除以获得脾细胞; f.将脾细胞与无限增殖恶性细胞系的细胞进行融合以形成杂交瘤,克隆此杂交瘤并筛选能分泌具有下列特性的抗体的杂交瘤: i.与rsCD4结合; ii.在免疫荧光测定中可与表达CD4的细胞结合,其中结合的模式在高分辨率荧光显微镜下呈″帽状″; iii抑制HIVgp120与表达CD4的细胞间的结合; iv.与已结合了HIVgp120的表达CD4的细胞结合;及 v.在体外微小空斑测定中于<10μg/mL的浓度下可中和HIV原代分离物,对50%中和活性而言浓度优选的是在0.01-10μg/mL之间,而对90%中和活性而言浓度优选的是在0.1-35μg/mL之间。(*该技术在2017年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王长怡
申请(专利权)人:美国联合生物医学公司
类型:发明
国别省市:

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