一种联苯类化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种联苯类化合物及其制备方法和用途，特点是通过保藏号为3A00080的杂色曲霉发酵培养获取含有联苯类化合物的发酵液和菌丝，然后将发酵液用乙酸乙酯提取，得粗浸膏，将该提取物经减压硅胶柱层析、反相中压柱层析，最后反相半制备高效液相色谱分离纯化得到，优点是该类化合物对酿酒酵母

A biphenyl compound and its preparation methods and uses

The invention discloses a biphenyl compound and its preparation method and application thereof, is characterized by the preservation number of cultured broth and mycelium containing biphenyl compounds for Aspergillus versicolor fermentation of 3A00080, and then the fermentation liquid extraction with ethyl acetate, the crude extract, the extract by silica gel chromatography, reversed-phase medium finally, reversed-phase column chromatography, semi preparative HPLC separation and purification, has the advantages of this kind of compounds of Saccharomyces cerevisiae

【技术实现步骤摘要】
一种联苯类化合物及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种联苯类化合物，尤其是涉及一种联苯类化合物及其制备方法和用途。
技术介绍
联苯类化合物广泛存在于许多具有生理活性的天然产物中，它们的合成受到人们越来越多的关注。联苯类化合物展示了多样性的结构与丰富的活性特点。但联苯类化合物大多通过有机合成反应制备得来，极少数是植物源或原核生物源。本专利技术人研究得知，杂色曲霉（保藏编号：MCCC3A00080）液体发酵产物经乙酸乙酯提取后的提取物有很好的抑菌活性，遂对其活性成分进行了研究。目前尚未见该化合物的化学结构及抑菌活性报道，因此市场上也尚未见有与此有关的药物。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种对酿酒酵母Saccharomycescerevisiae有抑制作用，对枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis和金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus均有强抑制作用的联苯类化合物及其制备方法和用途。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种联苯类化合物，该联苯类化合物的结构式如Ⅰ所示：（I）。上述联苯类化合物的制备方法，具体包括如下步骤：（1）发酵生产将保藏号为3A00080的杂色曲霉划线复活，接种到PDA固体培养基上，在28℃培养箱中培养3天后；将杂色曲霉按体积比5%的接种量接种到PDB液体培养基上，在28℃静置培养15天，获得菌丝体和发酵液；（2）浸膏的获得将步骤（1）得到的菌丝体和发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并三次萃取所得萃取液，将萃取液减压浓缩除去乙酸乙酯，获得粗浸膏；（3）化合物的分离精制将粗浸膏用甲醇溶解后，加粗浸膏2倍质量的200-300目硅胶拌样进行减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇以体积比20：1-5：1梯度为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱组分；将洗脱组分经过反相中压柱色谱分离，采用甲醇与水以体积比20：80梯度为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱组分；最后将洗脱组分经半制备高效液相色谱分离纯化得到联苯类化合物，其结构如式I所示：（I）。步骤（1）所述的PDA固体培养基的配制方法为将200克马铃薯、20克葡萄糖和15~20克琼脂，加入到1L海水中；所述的PDB液体培养基的配制方法为将10g马铃薯和20g葡萄糖，加入到1L海水中，调pH至7.0。步骤（3）所述的半制备反相高效液相色谱的洗脱液为甲醇与水按体积比25：:75的比例混合而成。上述联苯类化合物的用途，所述的联苯类化合物在制备抑菌剂或抑菌药物方面的用途。所述的联苯类化合物在制备酿酒酵母Saccharomycescerevisiae抑制剂方面的用途。所述的联苯类化合物在制备枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis抑制剂方面的用途。所述的联苯类化合物在制备金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus抑制剂方面的用途。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术一种联苯类化合物及其制备方法和用途，本专利技术通过国家海洋局第三研究所购置的杂色曲霉3A00080发酵培养获取含有联苯类化合物的发酵液和菌丝，然后将发酵液用乙酸乙酯提取，得粗浸膏，将该提取物经减压硅胶柱层析、反相中压柱层析，最后反相半制备高效液相色谱分离纯化得到。经实验证实，该类化合物对酿酒酵母Saccharomycescerevisiae有抑制作用，对枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis和金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus均有强抑制作用。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。实施例1一种联苯类化合物，该联苯类化合物的结构式如Ⅰ所示：（I）。实施例2如I式所示的联苯类化合物的制备方法，具体包括如下步骤：（1）发酵生产将保藏号为3A00080的杂色曲霉划线复活，接种到PDA固体培养基上，在28℃培养箱中培养3天后；将杂色曲霉按体积比5%的接种量接种到装有400mL培养液（PDB液体培养基）的1000mL锥型瓶中，在28℃静置培养15天，获得菌丝体和发酵液；其中PDA固体培养基的配制方法为将200克马铃薯、20克葡萄糖和15~20克琼脂，加入到1L海水中；PDB液体培养基的配制方法为将10g马铃薯和20g葡萄糖，加入到1L海水中，调pH至7.0；（2）浸膏的获得将步骤（1）得到的菌丝体和发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并三次萃取所得萃取液，将萃取液减压浓缩除去乙酸乙酯，获得粗浸膏，共20克；（3）化合物的分离精制将粗浸膏用甲醇溶解后，加粗浸膏2倍质量的200-300目硅胶拌样进行减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇以体积比20：1-5：1梯度为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱组分，将洗脱组分经过反相中压柱色谱分离，采用甲醇与水以体积比20：80（流速20mL/min）梯度为洗脱剂进行洗脱，得到洗脱组分，最后经半制备高效液相色谱分离纯化得到联苯类化合物10mg，其结构如式I所示：（I）。该化合物I为紫红色粉末状，m/z：246[M+Na]+，分子式为C14H14O4。1H和13C-NMR数据见表1。表1化合物I的1H和13CNMR数据(400MHz，inDMSO-d6)a注：a)本表信号归属基于DEPT、HSQC及HMBC图谱解析结果。b)此栏中的数字和代号分别代表在1H-1HCOSY谱中与相应行中的1H给出偶合相关信号的1H核。c)此栏中的数字和代号分别代表在HMBC谱中与相应行中的1H给出偶合相关信号的13C核。实施例3化合物I体外抑菌活性的测试1、实验样品及实验方法被测样品溶液的配制测试样品为上述实施例1或实施例2中分离精制的化合物I纯品。精密称取适量样品，用甲醇配制成所需浓度的溶液，供测活性。测试菌株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus和酿酒酵母Saccharomycescerevisiae。各菌株均用LB培养基，在37℃培养箱中培养。2、抑菌活性测试方法滤纸片法：准备一定数量的圆形滤纸片（直径5-6mm），在120℃条件下高温灭菌。随后将滤纸片放在无菌玻璃板上，取10μL化合物溶液吸附在滤纸片上，同时吸取等体积氯霉素和甲醇吸附在滤纸片上，前者作为阳性对照组，后者作为空白对照组，待滤纸片晾干，备用。吸取枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus和酿酒酵母Saccharomycescerevisiae菌悬液各180μL，涂布于LB培养基上。待培养基稍干燥，将吸附了样品的滤纸片置于平板上。每个平板放置三张滤纸片，即实验组、阳性对照组和空白对照组，并作三次重复。上述步骤完成后，将含有滤纸片的LB培养基倒置培养，温度保持在25℃，待24至48h后观察实验结果，即抑菌圈大小。3、抑菌活性测试结果在测试中，化合物I对枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus和酿酒酵母Saccharomycescerevisiae抑制效果分别见表2。表2滤纸片法筛选结果注：“++”表示抑菌圈直径为15-19mm，有强抑制效果，”+”表示抑菌圈直径为8-14mm，有弱抑制效果，”-”表示抑菌圈直径小于8mm，无明显抑制效果。由上述表2可知，化合物I具有明显的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种联苯类化合物，其特征在于该联苯类化合物的结构式如Ⅰ所示：

【技术特征摘要】
1.一种联苯类化合物，其特征在于该联苯类化合物的结构式如Ⅰ所示：（I）。2.一种权利要求1所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤：（1）发酵生产将保藏号为3A00080的杂色曲霉划线复活，接种到PDA固体培养基上，在28℃培养箱中培养3天后；将杂色曲霉按体积比5%的接种量接种到PDB液体培养基上，在28℃静置培养15天，获得菌丝体和发酵液；（2）浸膏的获得将步骤（1）得到的菌丝体和发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并三次萃取所得萃取液，将萃取液减压浓缩除去乙酸乙酯，获得粗浸膏；（3）化合物的分离精制将粗浸膏用甲醇溶解后，加粗浸膏2倍质量的200-300目硅胶拌样进行减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇以体积比20：1-5：1梯度为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱组分；将洗脱组分经过反相中压柱色谱分离，采用甲醇与水以体积比20：80梯度为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱组分；最后将洗脱组分经半制备高效液相色谱分离纯化得到联苯类化合物，其结构如式I所示：（I）。3.根据权利要求1所述的一种联苯类化合物的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁立建，何山，朱静轩，周珂欣，斯拉瓦·爱泼斯坦，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33