HLA-A24限制性癌抗原肽制造技术

提供来源于ＷＴ１，具有体内诱导ＣＴＬｓ活性的ＨＬＡ－Ａ２４限制性肽、编码所述肽的多核苷酸、在体内或体外使用这些肽或多核苷酸的癌症疫苗，等。可使用本发明专利技术的疫苗治疗许多癌症患者。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于癌症疫苗治疗领域。本专利技术涉及HLA-A24限制性癌抗原肽，更具体地，涉及来源于WT1的具有体内诱导CTLs活性的HLA-A24限制性癌抗原肽、编码所述肽的多核苷酸、包括上述物质的癌症疫苗、及其作为癌症疫苗的用途、以及基于它们的癌症的治疗和预防方法。
技术介绍
细胞免疫，特别是细胞毒性T细胞(以下称为CTLs)，在消除活体内的癌细胞或病毒感染的细胞中起着重要的作用。CTLs可识别来源于癌细胞上癌抗原蛋白的抗原肽(癌抗原肽)和MHC(主要组织相容性复合物)I类抗原(在人类称作HLA抗原)之间形成的复合物，并因此攻击和破坏癌细胞。在Immunity，vol.10281，1999中记载的表1中列举了癌抗原蛋白的代表性的实例。具体的实例包括黑素小体抗原，如黑素细胞组织特异蛋白、gp100(J.Exp.Med.，1791005，1994)、MART-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，913515，1994)、和酪氨酸酶(J.Exp.Med.，178489，1993)；以及HER2-neu(J.Exp.Med.，1812109，1995)和癌症标记物如CEA(J.Natl.CancerInst.，87982，1995)和PSA(J.Natl.Cancer Inst.，89293，1997)作为不同于那些来自黑素瘤的癌抗原蛋白。癌抗原肽是由约8到11个氨基酸残基构成的肽，是经细胞内蛋白酶加工癌抗原蛋白而产生的(Cur.Opin，Immunol.，5709，1993；Cur.Opin，Immunol.，5719，1993；Cell，8213，1995；Immunol.Rev.，146167，1995)。这样产生的癌抗原肽结合MHCI类抗原(HLA抗原)形成复合物，接着该复合物被呈递至细胞表面，并被上述CTLs识别。因此，在基于通过CTLs破坏癌症细胞的癌症免疫治疗药物(癌症疫苗)的研发中，从癌抗原蛋白中鉴定出能有效诱导CTLs的癌抗原肽是非常重要。在MHCI类分子中存在多种亚型，结合到各自亚型上的抗原肽的氨基酸序列(结合基序)遵循一定的规律。对于HLA-A2的结合基序来说，例如，第2位上的氨基酸是亮氨酸、甲硫氨酸、或异亮氨酸，第9位上的氨基酸是缬氨酸、亮氨酸、或异亮氨酸。对于HLA-A24的结合基序来说，第2位上的氨基酸是酪氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸，第9位上的氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸，或甲硫氨酸。近来，可在数据库中搜索(例如，BIMAS软件；http//bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/)那些包括上文所示基序、并预期能与HLA抗原结合的任何肽序列。因此，为了从癌抗原蛋白中鉴定出能够诱导CTLs的癌抗原肽，首先从癌抗原蛋白的氨基酸序列中鉴定出与结合基序或相应于预期HLA型的肽序列相匹配的，由长度在约8到11个氨基酸构成的肽区域。然而，在结合基序或预期肽序列的基础上鉴定出的肽不一定有免疫原性。由于抗原肽是通过癌抗原蛋白的细胞内加工所产生，因此没有通过加工产生的肽不可能是抗原肽。此外，由于许多癌抗原蛋白最初存在于活体中，因此即使是细胞内产生的具有结合基序或期望肽序列的肽作为癌抗原肽，CTLs也可能对这样的癌抗原产生耐受。这些事实表明，为了鉴定具有诱导CTLs活性的癌抗原肽，仅仅基于预期HLA型的基序或期望的肽序列的预测是不够的，体内免疫原性(诱导CTLs的活性)的评价非常重要。在对并发Wilms癌、无虹膜、泌尿生殖器异常、精神发育迟缓等并发症的WAGR综合症的分析的基础上，从染色体11p13中分离得到了作为Wilms癌致病基因之一的Wilms癌抑制基因WT1(WT1基因)(Nature，343774，1990)。WT1的基因组DNA约50Kb，由10个外显子组成，其cDNA约3kb。从cDNA推导出的氨基酸序列如SEQ IDNO1所示(Cell.，60509，1990)。WT1基因在人白血病中高度表达，同时通过采用WT1反义寡聚体处理白血病细胞可抑制白血病细胞的细胞生长，上述事实表明WT1基因能够促进白血病细胞的生长(日本专利公开(Kokai)No.104627/1997)。接着，从WT1也在实体癌如胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、胚胎性癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌以及卵巢癌中高度表达的事实中(日本专利公开(Kokai)No.104627/1997，日本专利公开(Kokai)No.35484/1999)，也可证实WT1基因是白血病和实体癌的新癌抗原蛋白(J.Immunol.，1641873-80，2000、J.Clin.Immunol.，20，195-202，2000)。优选将癌症免疫治疗的药物(癌症疫苗)用于尽可能多的癌症患者，因此从WT1中鉴定出在许多类型的癌中均高度表达的癌抗原肽以及开发基于这些癌抗原肽的癌症疫苗非常重要。在本专利技术的上下文中，WO 00/06602和WO 00/18795描述了由WT1蛋白的一部分构成的天然存在的癌抗原肽。在开发癌症疫苗的过程中，不能使用通常用作实验动物的纯系小鼠来进行疫苗的体内功效评价，而是需要一种用于人的表达HLA的动物模型。具体地，当呈递到HLA一种人特异的MHCI类分子时，可用作癌疫苗的人抗原肽能诱导特异性免疫反应。非人的实验动物缺乏这种HLA，因而不能用于直接用于人治疗的癌症疫苗的体内评价。因此，用于人的表达HLA的动物模型在上述癌症疫苗功效的评价中是必需的。专利技术的公开本专利技术的目的是提供在体内具有免疫原性(诱导CTLs的活性)的来源于WT1的癌抗原肽、包含那些肽的癌症疫苗、及其作为癌症疫苗的用途、以及基于它们的癌症的治疗和预防方法。最近，已经制备了可用于评价体内功效的用于人的表达HLA-A24抗原的动物模型，并且申请了要求该专利技术的专利申请(WO 02/47474，国际申请日2002年6月20日，申请人Sumitomo药物有限公司)。该模型使得评价HLA-A24限制性癌抗原蛋白和癌抗原肽，及其基因的体内功效成为可能。本专利技术者采用那些用于人的动物模型评价来源于WT1并限制于HLA-A24的天然肽和改变肽。即，我们使用BIMAS软件(http//bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/)对从WT1序列中推导出的具有预期结合HLA-A24抗原的肽序列(结合基序)的肽的评价表明，在下列天然肽中肽AArg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu(SEQ ID NO8)肽BArg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu(SEQ ID NO7)肽CArg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe(SEQ ID NO9)肽DGln Tyr Arg Ile His Thr His Gly Val Phe(SEQ ID NO10)和肽EAla Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe(SEQ ID NO11)，仅有肽B(SEQ ID NO7)在体内具有免疫原性(诱导CTLs的活性)。此外，本专利技术者制备了下列改变的肽肽FArg Tyr Phe Pro 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含选自如下组的任何一种氨基酸序列的肽：ＡｒｇＴｙｒＰｈｅＰｒｏＡｓｎＡｌａＰｒｏＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２），ＡｒｇＴｙｒＰｒｏＧｌｙＶａｌＡｌａ　 　ＰｒｏＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３），ＡｒｇＴｙｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓＧｌｎＬｙｓＬｙｓＰｈｅ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４），ＡｌａＴｙｒＬｅｕＰｒｏ　 　ＡｌａＶａｌＰｒｏＳｅｒＬｅｕ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５），和ＡｓｎＴｙｒＭｅｔＡｓｎＬｅｕＧｌｙＡｌａＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，后藤正志，高须秀夫，
申请(专利权)人：株式会社国际癌症免疫研究所，中外制药株式会社，大日本住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]