二聚体化肽制造技术

本发明专利技术提供了新的肿瘤抗原肽和其癌症疫苗，具体地，肽二聚体，其中由包括至少一个半胱氨酸残基的７－３０个氨基酸组成并且能够产生肿瘤抗原肽的两种肽单体相互通过二硫键结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症疫苗治疗，更具体地涉及肽二聚体，其可以产生具有诱导细胞毒性T细胞活性的肿瘤抗原肽，还涉及含有该肽二聚体的药物组合物。
技术介绍
细胞介导的免疫，尤其细胞毒性T细胞(下文中称作“CTL”)在肿瘤细胞或者病毒感染的细胞的体内排斥中起重要作用。CTLs识别来源于肿瘤抗原蛋白的抗原肽(“肿瘤抗原肽”)和癌细胞上MHC(主要组织相容性复合体)I类抗原(人的MHC I类抗原称为“HLA抗原”)，并攻击和杀死细胞。肿瘤抗原蛋白的典型实例包括Immunity，卷10281，1999的表中列出的那些。特定实例包括黑素体抗原如黑素细胞组织特异性蛋白gp100(J.Exp.Med.，1791005，1994)、MART-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，913515，1994)和酪氨酸激酶(J.Exp.Med.，178489，1993)，和肿瘤标记，如不同于黑素瘤的肿瘤抗原，如HER2/neu(J.Exp.Med.，1812019，1995)、CEA(J.Natl.Cancer.Inst.，87982，1995)和PSA(J.Natl.Cancer.Inst.，89293，1997)。肿瘤抗原肽是约8到11个氨基酸的肽，其可以由细胞中蛋白酶对肿瘤抗原蛋白的细胞内加工产生(Cur.Opin.，Immunol.，5709，1993；Cur.Opi，Immunol.，5719，1993；Cell，8213，1995；Immunol.Rev.，146167，1995)。如上文描述的，如此产生的肿瘤抗原肽作为与MHCI类抗原(HLA抗原)的复合体呈递在细胞表面并被CTLs识别。因此，为了开发利用CTLs破坏肿瘤细胞的癌症免疫治疗剂(癌症疫苗)，非常重要的是鉴定肿瘤抗原蛋白中的肿瘤抗原肽，所述肽能够有效诱导CTLs。专利技术公开本专利技术的一个目的是提供可以体内使用的来源于肿瘤抗原肽的新的肿瘤抗原。本专利技术人已经发现已经证明为肿瘤抗原肽的某些肽含有半胱氨酸残基并且由这些肽组成的二聚体当施用时令人惊奇地表现出相当于单体的诱导CTLs的活性(“CTL-诱导活性”)，从而建立了本专利技术。从而，本专利技术包括下面的内容。(1)肽二聚体，其中由包括至少一个半胱氨酸残基的7-30个氨基酸组成并且能够产生具有CTL-诱导活性的肿瘤抗原肽的两种肽单体每一种相互通过二硫键结合。(2)根据上面(1)的肽二聚体，其可以产生具有CTL-诱导活性的肿瘤抗原肽。(3)根据上面(1)或(2)的肽二聚体，其中两种肽单体通过一个或两个二硫键结合。(4)根据上面(1)到(3)任一项的肽二聚体，其中肽单体来源于肿瘤抑制基因的表达产物WT1。(5)根据上面(1)到(4)任一项的肽二聚体，其中肽单体如下Cys Xaa Thr Trp Asn Gln Met Asn Xaa(SEQ ID NO72)其中2位的Xaa为选自Tyr、Phe、Met和Trp的氨基酸残基；9位Xaa为选自Phe、Leu、Ile、Trp和Met的氨基酸残基。(6)根据上面(1)到(4)任一项的肽二聚体，其中肽单体选自下面的肽。Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu (SEQ ID NO11)Asp Phe Lys Asp Cys Glu Arg Arg Phe (SEQ ID NO18)Ala Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr (SEQ ID NO19)Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu (SEQ ID NO20)Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu (SEQ ID NO21)Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe (SEQ ID NO22)Asp Ser Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu (SEQ ID NO23)Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu (SEQ ID NO44) (7)含有根据上面(1)到(6)任一项的肽二聚体与药学上可接受的载体的药物组合物。(8)根据上面(7)的药物组合物，其用作癌症疫苗。(9)根据上面(1)到(6)任一项的肽二聚体在生产癌症疫苗中的应用。(10)治疗或者预防癌症的方法，其包括对需要该治疗或预防的WT-1阳性患者施用治疗有效量的根据上面(1)到(6)任一项的肽二聚体。附图简述附图说明图1是显示肽二聚体(SEQ ID NO44)诱导转基因小鼠中CTLs的图。实施本专利技术的最佳模式在本专利技术的肽二聚体中，两个肽单体通过该肽单体中存在的至少一对半胱氨酸残基的SH基团之间的二硫键二聚体化。本专利技术的肽二聚体具有CTL诱导活性并且所诱导的CTL可以通过细胞毒性作用或者产生淋巴因子发挥抗肿瘤活性。因此，本专利技术的肽二聚体可以用作治疗或者预防癌症(肿瘤)的癌症疫苗。构成本专利技术的肽二聚体的肽单体由含有至少一个半胱氨酸残基的7-30个氨基酸残基组成，并且产生具有CTL诱导活性的肿瘤抗原肽。短语“产生肿瘤抗原肽”指肽单体具有使肿瘤抗原肽能够结合HLA抗原并被细胞毒性T细胞(CTL)识别的特征。任何肽单体只要其具有CTL诱导活性都可以无限制地用于本专利技术；然而，优选来源于人维耳姆斯氏瘤的肿瘤抑制基因WT1并且含有至少一个半胱氨酸残基的肽单体。肿瘤抑制基因WT1在多种肿瘤中表达(Cell，60509，1990；NCBI数据库存取号XP_034418，SEQ ID NO1)。基于对并发维耳姆斯氏瘤、无虹膜、尿生殖异常、智力障碍等的WAGR综合征的分析，从染色体11p13分离出WT1基因，其作为维耳姆斯氏瘤的致病基因之一。(Nature，343774，1990)。WT1的基因组DNA为约50kb，由10个外显子组成，并且其cDNA为约3kb。从cDNA推导的氨基酸序列在SEQID NO1中显示(Cell.，60509，1990)。根据WT1基因在人白血病中高水平表达和通过WT1反义寡聚体治疗抑制白血病细胞的细胞生长这一事实提出WT1基因促进白血病细胞的生长(JP-A-1-4627/1997)。然后，已经阐明WT1基因是白血病和实体癌的新的肿瘤抗原蛋白(J.Immunol.，1641873-80，2000和J.Clin.Immunol.，20，195-202，2000)，这是根据如下事实WT1基因在实体癌如胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、胚胎癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌，和卵巢癌中也高水平表达(JP-A-104627/1977，WO 00/06602)。因为癌症免疫治疗(癌症疫苗)优选可应用于尽可能多的癌症患者，因此重要的是从许多类型的癌症中高度表达的WT1鉴定肿瘤抗原肽，和使用所得肿瘤抗原肽开发癌症疫苗。在这点上，由WT1蛋白质的部分片段组成的几种天然类型的肿瘤抗原肽在WO 00/06602和WO 00/18795中描述；然而，关于它们的体内效果还不知道。可用于本专利技术的其他肽单体包括来源于Immunity，卷10281，1999的表中列出的肿瘤抗原蛋白的含有至少一个半胱氨酸残基的肿瘤抗原肽。通过HLA四聚体方本文档来自技高网...

【技术保护点】
肽二聚体，其中由包括至少一个半胱氨酸残基的７－３０个氨基酸组成并且能够产生具有ＣＴＬ－诱导活性的肿瘤抗原肽的两种肽单体的每一种相互通过二硫键结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，高须秀夫，三沟文雄，
申请(专利权)人：株式会社国际癌症免疫研究所，中外制药株式会社，大日本住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]