本发明专利技术提供了参与大环内酯类化合物１１１０７Ｂ的羟化作用的ＤＮＡ、以及大环内酯类化合物１１１０７Ｄ的新产生方法。详细地说，本发明专利技术涉及参与式（Ⅰ）所示的大环内酯类化合物１１１０７Ｂ生物学转化为式（Ⅱ）所示的１６位羟化大环内酯类化合物１１１０７Ｄ的ＤＮＡ，其为编码具有１６位羟化酶活性的蛋白质或铁氧还蛋白的ＤＮＡ、其分离方法、自该ＤＮＡ编码的蛋白质、携带该ＤＮＡ的质粒、经该质粒转化的转化体和使用该转化体产生１６位羟化大环内酯类化合物的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及参与大环内酯类化合物的羟化作用的DNA、其分离方法、由该DNA编码的蛋白质、携带该DNA的质粒、经该质粒转化的转化体、以及使用该转化体产生16位羟化的大环内酯类化合物的方法。现有技术式(II) 所示的12元环大环内酯类化合物11107D是一种具有良好抗肿瘤活性的12元环大环内酯类化合物，其与式(I) 所示的12元环大环内酯类化合物11107B一起自链霉菌(Streptomyces sp.)Mer-11107株的培养物中发现(WO 02/060890)。大环内酯类化合物11107D相当于大环内酯类化合物11107B的16位羟化体，但其产量低于大环内酯类化合物11107B的产量，因此期望建立一种高效的制备方法。
技术实现思路
本专利技术的课题是发现了参与大环内酯类化合物11107B的羟化作用的DNA，提供了大环内酯类化合物11107D的新的产生方法。本专利技术涉及以下的～项内容。经分离的纯DNA，其为参与将式(I) 所示的大环内酯类化合物(以下称为大环内酯类化合物11107B)生物学转化为式(II) 所示的16位羟化的大环内酯类化合物(以下称为大环内酯类化合物11107D)的DNA，包含编码部分或全长的具有16位羟化酶活性的蛋白质或铁氧还蛋白的DNA或其变体。如下述(a)、(b)或(c)所示的所述DNA。(a)编码具有大环内酯类化合物11107B的16位羟化酶活性的蛋白质的DNA，所述DNA选自由序列编号1的碱基1322位至碱基2548位的连续碱基序列、序列编号2的碱基420位至碱基1604位的连续碱基序列和序列编号3的碱基172位至碱基1383位的连续碱基序列组成的组。(b)上述(a)所示DNA的变体，为这样的DNA(i)与上述(a)所示的DNA在严格的条件下杂交，且(ii)编码具有大环内酯类化合物11107B的16位羟化酶活性的蛋白质。(c)这样的DNA，由于基因密码子的简并性，与上述(a)所示的DNA在严格的条件下不杂交，但所编码的蛋白质与自上述(a)或(b)所示的DNA编码的蛋白质具有相同的氨基酸序列。自所述的DNA编码的蛋白质。携带的DNA的自我复制型或整合复制型重组质粒。经的重组质粒转化的转化体。编码具有大环内酯类化合物11107B的16位羟化酶活性的蛋白质的DNA的分离方法，其特征在于以包含所述的DNA或其部分的DNA作为探针或引物使用。下述(d)、(e)或(f)所示的所述DNA。(d)编码铁氧还蛋白的DNA，所述DNA选自由序列编号1的碱基2564位至碱基2761位的连续碱基序列、序列编号2的碱基1643位至碱基1834位的连续碱基序列和序列编号3的碱基1399位至碱基1593位的连续碱基序列组成的组。(e)上述(d)所示DNA的变体，为这样的DNA(i)与上述(d)所示的DNA在严格的条件下杂交，且(ii)编码具有铁氧还蛋白功能的蛋白质。(f)这样的DNA，由于基因密码子的简并性，与上述(d)所示的DNA在严格的条件下不杂交，但所编码的蛋白质与自上述(d)或(e)所示的DNA编码的蛋白质具有相同的氨基酸序列。自所述的DNA编码的蛋白质。携带的DNA的自我复制型或整合复制型重组质粒。经所述的重组质粒转化的转化体。编码具有铁氧还蛋白功能的蛋白质的DNA的分离方法，其特征在于以包含所述的DNA或其部分的DNA作为探针或引物使用。16位羟化的大环内酯类化合物的产生方法，其特征在于使用培养基培养或所述的转化体，在培养中或培养后，将经增殖的转化体与式(III) 〔式中，W表示 R12、R16b、R17a、R17b、R18、R20a、R20b、R21a和R21b相同或不同，表示(1)氢原子，(2)可具有取代基的C1-22烷基，(3)-OR(式中R表示1)氢原子，可以有取代基的2)C1-22烷基，3)C7-22芳烷基，4)5元环至14元环的杂芳氧基烷基，5)C2-22烷酰基， 6)C7-15芳酰基，7)C3-23不饱和烷酰基，8)-CORco(式中Rco可以有取代基，表示8-1)5元环至14元环的杂芳基，8-2)C1-22烷氧基，8-3)不饱和C2-22烷氧基，8-4)C6-14芳氧基，8-5)5元环至14元环的杂芳氧基，或8-6)3元环至14元环的含氮非芳族杂环)，9)C1-22烷基磺酰基，10)C6-14芳基磺酰基，或11)-SiRs1Rs2Rs3(式中Rs1、Rs2、Rs3相同或不同，表示C1-6烷基或C6-14芳基))，(4)卤素原子或(5)-RM-NRN1RN2{式中RM表示单键或-O-CO-；RN1和RN21)相同或不同，表示1-1)氢原子或1-2)可以有取代基的(i)C1-22烷基，(ii)不饱和C2-22烷基，(iii)C2-22烷酰基，(iv)C7-15芳酰基，(v)不饱和C3-23烷酰基， (vi)C6-14芳基，(vii)5元环至14元环的杂芳基，(viii)C7-22芳烷基，(ix)C1-22烷基磺酰基或(x)C6-14芳基磺酰基；或2)RN1和RN2与结合的氮原子一起形成可具有取代基的3元环至14元环含氮非芳族杂环}；但是，R21a和R21b一起可形成(i)酮结构(＝O)或(ii)肟结构{＝NORox(式中Rox表示可具有取代基的C1-22烷基、不饱和C2-22烷基、C6-14芳基、5元环至14元环的杂芳基或C7-22芳烷基)}；R16a表示氢原子；R21c表示(1)氢原子或(2) (式中R22a、R22b和R22c相同或不同，表示1)氢原子，2)C1-6烷基，3)-OR(式中R具有上述的含义)，4)-RM-NRN1RN2(式中RM、RN1和RN2具有上述的含义)或5)卤素原子；或R21a和R21b中的任一方与R22a和R22b中的任一方一起可形成部分结构 R22a或R22b Gm表示(1)式(GM-I)所示的基团 {式中R2和R10相同或不同，表示氢原子或C1-22烷基；R3a、R3b、R5a、R5b、R6a和R6b相同或不同，表示1)氢原子，2)羟基，3)可具有取代基的3-1)C1-22烷基，3-2)C1-22烷氧基，3-3)C6-14芳氧基，3-4)5元环至14元环的杂芳氧基，3-5)C2-22烷酰氧基，3-6)C7-15芳酰氧基，3-7)C3-23不饱和烷酰氧基，3-8)-OCORco(式中Rco具有上述的含义)，3-9)C1-22烷基磺酰氧基，3-10)C6-14芳基磺酰氧基，或 3-11)-OSiRs1Rs2Rs3(式中Rs1、Rs2和Rs3具有上述的含义)，4)卤素原子，或5)-RM-NRN1RN2(式中RM、RN1和RN2具有上述的含义)；或者R5a和R5b可一起形成酮结构(＝O)；或者R6a和R6b可一起形成螺环氧乙烷基或环外亚甲基(exomethylene)；或者，R7a和R7b相同或不同，表示氢原子或-ORH(式中RH表示氢原子、C1-22烷基或C2-22烷酰基)}、(2)式(GM-II)所示的基团 (式中R2、R3a、R3b、R6a、R6b、R7a、R7b和R10与式(GM-I)的定义相同)，(3)式(GM-III)所示的基团 (式中R2、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b和R10与式(GM-I)的定义相同)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
经分离的纯ＤＮＡ，其为参与将式（Ⅰ） ＊＊＊ １１１０７Ｂ （Ⅰ） 所示的大环内酯类化合物（以下称为大环内酯类化合物１１１０７Ｂ）生物学转化为式（Ⅱ） ＊＊＊ １１１０７Ｄ （Ⅱ） 所示的１６位羟化大环内酯类化合物的ＤＮＡ，包含编码部分或全长的具有１６位羟化酶活性的蛋白质或铁氧还蛋白的ＤＮＡ或其变体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：町田和弘，中岛崇，有德保秀，土田外志夫，
申请(专利权)人：美露香株式会社，卫材株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。