抗c‑MEt的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术公开了与人c‑Met这种肝细胞生长因子受体结合的分离的单克隆抗体和相关的基于抗体的组合物和分子。还公开了包含该抗体的药物组合物和使用该抗体的治疗与诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
抗c-MEt的单克隆抗体本申请是2011年3月10日提交的题为“抗c-MEt的单克隆抗体”的国家申请号为201180027522.5(PCT/EP2010/053646)的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及针对人c-Met这种肝细胞生长因子受体的单克隆抗体，并涉及这类抗体的用途，特别是其在癌症治疗中的用途。
技术介绍
c-Met是一种跨膜受体酪氨酸激酶蛋白质。最初的单链前体经翻译后切割产生c-Met异二聚体的成熟形式，所述异二聚体由二硫键连接的胞外α-链(50kDa)和较长的跨膜β-链(145kDa)组成(Birchmeier等，2003，NatRevMolCellBiol4：915)。c-Met的胞外部分由3种结构域类型组成。N端SEMA结构域由完整的α-亚基和部分β-亚基构成，并包括脑信号蛋白的同源物。SEMA结构域后面是富含半胱氨酸的结构域，再后面是4个免疫球蛋白-(Ig)样结构域。胞质部分含有对下游信号转导是必不可少的近膜激酶结构域和羧基端尾。c-Met的唯一已知的高亲和力配体肝细胞生长因子(HGF)在正常条件下主要由成纤维细胞表达(Li和Tseng1995，JCellPhysiol163：61)，并由肿瘤细胞表达(Ferracini等，1995，Oncogene10：739)。HGF(亦称为分散因子：SF)以前体合成，该前体经蛋白水解转化成有活性的α/β异二聚体。根据受体结合片段的晶体结构，认为HGF作为二聚体与c-Met结合(Chirgadze等，1999，NatStructBiol6：72)。HGF-α链以高亲和力与c-Met中的Ig样结构域结合，而HGF-β链以低亲和力与c-MetSEMA结构域结合(Basilico等，2008，JBiolChem283：21267)。后一互相作用在活性HGF异二聚体结合时，负责c-Met二聚化和受体酪氨酸激酶活化。受体自身磷酸化产生用于效应子募集的独特停靠位点，Gab1(生长因子受体结合蛋白2[Grb2]相关结合物1)与之结合对于以下主要c-Met下游信号转导途径是必需的(Comoglio等，2008，NatRevDrugDiscov7：504)：●Ras-ERK1/2途径：增殖。●Ras-Rac途径：侵袭、移动、上皮至间充质转换。●PI3K-Akt途径：存活。c-Met在胚胎发生期间和在成年期的许多器官的上皮和内皮细胞表面上表达，包括肝、胰腺、前列腺、肾、肌肉和骨髓。c-Met活化在由包括增殖、移动、血管生成和防止细胞凋亡在内的一系列过程组成的所谓“侵袭性生长”程序中起重要作用(Boccaccio和Comoglio2006，NatRevCancer6：637)。这些c-Met调节的过程发生在胚胎发育、肝脏和心脏损伤修复期间的正常生理条件下和肿瘤发生期间的病理情况下(Eder等，2009，ClinCancerRes15：2207)。不良的c-Met信号转导几乎发生在实体瘤的所有类型以及各种肉瘤、造血系统恶性肿瘤和黑素瘤中，所述实体瘤例如膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和甲状腺癌(Birchmeier等，2003，NatRevMolCellBiol4：915；Comoglio等，2008，NatRevDrugDiscov7：504；Peruzzi和Bottaro2006，ClinCancerRes12：3657)。c-Met的致肿瘤性的主要机制通常以下列3种不同的方式实现：●自分泌HGF/c-Met环，●c-Met或HGF过量表达，●c-Met受体编码序列中激活激酶的突变。最值得注意的是，在遗传性乳头状肾癌患者中鉴定出激活性c-Met突变(Schmidt等，1997，NatGenet16：68)。c-Met的组成型活化促成增殖、侵袭、存活或血管生成性癌表型之一或组合。已表明肿瘤细胞中内源性表达的c-Met的基因沉默导致增殖和肿瘤生长缺乏及已建立的转移消退，以及新转移的产生减少(Corso等，2008，Oncogene27：684)。由于从开始直到向转移进展，c-Met促成癌症发展的多个阶段，因此c-Met及其配体HGF成为定向癌症疗法的主要候选药物(Comoglio等，2008，NatRevDrugDiscov7：504；Knudsen和VandeWoude2008，CurrOpinGenetDev18：87)。正对若干策略进行探索以达到该目的：●诱铒受体：HGF或c-Met或分子类似物的亚区可通过阻断配体结合或受体二聚化而作为化学计量竞争剂(stochiometriccompetitor)起拮抗性作用。HGF的这类拮抗亚区的一个实例是NK4(KringlePharma)。●小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)：在临床评价的不同阶段中，3种c-Met特异性TKI为ARQ197(ArQule)、JNJ38877605(Johnson&Johnson)和PF-04217903(Pfizer)。●抗HGF单克隆抗体，例如AMG102、rilotumumab(Amgen)、HuL2G7(Takeda)和AV-299(Schering)。●抗c-Met单克隆抗体描述于WO2005016382、WO2006015371、WO2007090807、WO2007126799WO2009007427、WO2009142738和vanderHorst等(vanderHorst等，2009，Neoplasoa11：355)。MetMAb(Genentech)是与c-Met的胞外结构域结合从而防止HGF结合和随后的受体活化的人源化一价(单臂)OA-5D5抗体(Jin等，2008，CancerRes68：4360)。在小鼠异种移植模型中，发现用MetMAb治疗抑制HGF驱动的原位成胶质细胞瘤和皮下胰腺肿瘤的肿瘤生长(Jin等，2008，CancerRes68：4360；Martens等，2006，ClinCancerRes12：6144)。h224G11(PierreFabre)(Corvaia和Boute2009，摘要835AACR第100周年年会(AACR100thAnnualMeeting))是人源化二价抗c-MetIgG1抗体。在小鼠中观察到该抗体的抗肿瘤作用(Goetsch等，2009，摘要2792，AACR第100周年年会)。CE-355621(Pfizer)是一种人IgG2，在肿瘤异种移植模型中，通过与c-Met的胞外结构域结合阻断配体结合并抑制HGF依赖性长生(Tseng等，2008，JNuclMed49：129)。综上所述，对几个抗c-Met产品正在进行研究，但迄今为止，尚无抗c-Met产品获准用于治疗应用。仍然需要用于治疗严重c-Met相关疾病(例如癌症)的有效安全的产品。专利技术概述本专利技术的一个目的是提供用于医药用途的新的高特异性和有效的单克隆抗c-Met抗体。本专利技术的抗体具有不同于本领域所述抗体的c-Met结合性质。在优选的实施方案中，本专利技术的抗体对人c-Met具有高亲和力，是拮抗性的，并且具有用于人患者的有利的药代动力学特征。附图简述图1：HuMab重链可变区序列的比对。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合人c‑Met的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
2010.03.10 DK PA201000191;2010.09.24 DK PA201000861.一种结合人c-Met的单克隆抗体。2.权利要求1的抗体，其中所述抗体与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗体含有包含SEQIDNO:33的序列的VH区和包含SEQIDNO:37的序列的VL区(024)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争超过50％，例如超过75％。3.权利要求2的抗体，其中所述抗体不与选自以下的抗体竞争结合可溶性cMetECDHis：a)含有包含SEQIDNO:1的序列的VH区和包含SEQIDNO:5的序列的VL区的固定化抗体(005)，b)含有包含SEQIDNO:17的序列的VH区和包含SEQIDNO:21的序列的VL区的固定化抗体(008)，c)包含抗体5D5的VH区和VL区的固定化抗体，和d)含有包含SEQIDNO:49的序列的VH区和包含SEQIDNO:53的序列的VL区的固定化抗体(045)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于25％，例如小于20％。4.权利要求2的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体结合相同的表位：a)含有包含SEQIDNO:33的序列的VH区和包含SEQIDNO:37的序列的VL区的抗体(024)b)含有包含SEQIDNO:65的序列的VH区和包含SEQIDNO:69的序列的VL区的抗体(061)c)含有包含SEQIDNO:73的序列的VH区和包含SEQIDNO:77的序列的VL区的抗体(062)d)含有包含SEQIDNO:81的序列的VH区和包含SEQIDNO:85的序列的VL区的抗体(064)e)含有包含SEQIDNO:89的序列的VH区和包含SEQIDNO:93的序列的VL区的抗体(068)f)含有包含SEQIDNO:97的序列的VH区和包含SEQIDNO:101的序列的VL区的抗体(069)g)含有包含SEQIDNO:113的序列的VH区和包含SEQIDNO:117的序列的VL区的抗体(098)h)含有包含SEQIDNO:121的序列的VH区和包含SEQIDNO:125的序列的VL区的抗体(101)，和i)含有包含SEQIDNO:129的序列的VH区和包含SEQIDNO:133的序列的VL区的抗体(181)。5.权利要求2或4的抗体，其中所述抗体包含具有下列所示序列的VHCDR3区：a)SEQIDNO:36(024)b)SEQIDNO:193，例如SEQIDNO:68、76、84或92所示的VHCDR3区(061、062、064、068)c)SEQIDNO:196，例如如SEQIDNO:100或132所示的VHCDR3区(069，181)d)SEQIDNO:116(098)，或e)SEQIDNO:201，例如如SEQIDNO:124所示VHCDR3区(101)。6.权利要求2或4的抗体，其中所述抗体含有：a)包含SEQIDNO:33、185和36的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:37、39和206的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQIDNO:34、35和36的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:38、39和40的CDR1、2和3序列的VL区的抗体，(024)b)包含SEQIDNO:191、192和193的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:78、79和208的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体：a.包含SEQIDNO:66、67和68的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:70、71和72的CDR1、2和3序列的VL区，(061)b.包含SEQIDNO:74、75和76的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:78、79和80的CDR1、2和3序列的VL区，(062)c.包含SEQIDNO:82、83和84的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:86、87和88的CDR1、2和3序列的VL区，(064)，或d.包含SEQIDNO:90、91和92的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:94、95和96的CDR1、2和3序列的VL区，(068)c)包含SEQIDNO:194、195和196的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:209、210和104的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体：a.包含SEQIDNO:98、99和100的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:102、103和104的CDR1、2和3序列的VL区，(069)，或b.包含SEQIDNO:130、131和132的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:134、135和136的CDR1、2和3序列的VL区，(181)d)包含SEQIDNO:197、198和116的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:118、119和211的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQIDNO:114、115和116的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:118、119和120的CDR1、2和3序列的VL区的抗体(098)，或e)包含SEQIDNO:199、200和201的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:126、212和128的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQIDNO:122、123和124的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:126、127和128的CDR1、2和3序列的VL区的抗体(101)。7.权利要求2的抗体，其含有：a)包含SEQIDNO:33的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:37的序列的VL区(024)b)包含SEQIDNO:65的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:69的序列的VL区(061)c)包含SEQIDNO:73的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:77的序列的VL区(062)d)包含SEQIDNO:81的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:85的序列的VL区(064)e)包含SEQIDNO:89的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:93的序列的VL区(068)f)包含SEQIDNO:97的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:101的序列的VL区(069)g)包含SEQIDNO:113的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:117的序列的VL区(098)h)包含SEQIDNO:121的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:125的序列的VL区(101)i)包含SEQIDNO:129的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:133的序列的VL区(181)j)包含SEQIDNO:159的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:160的序列的VL区(078)k)包含SEQIDNO:161的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:162的序列的VL区(084)l)包含SEQIDNO:163的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:164的序列的VL区(063)m)包含SEQIDNO:165的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:166的序列的VL区(087)n)包含SEQIDNO:137的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:138的序列的VL区(066)o)包含SEQIDNO:139的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:140的序列的VL区(065)p)包含SEQIDNO:141的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:142的序列的VL区(082)q)包含SEQIDNO:143的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:144的序列的VL区(089)，或r)所述抗体中的任一种的变体，其中所述变体在所述序列中优选具有至多1、2或3个氨基酸修饰、更优选氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。8.权利要求1的抗体，其中：-所述抗体与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗体含有包含SEQIDNO:9的序列的VH区和包含SEQIDNO:13的序列的VL区(006)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争超过50％，例如超过75％，和-所述抗体不与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗体含有包含SEQIDNO:49的序列的VH区和包含SEQIDNO:53的序列的VL区(045)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于50％，例如小于25％，例如小于20％和-所述抗体与c-Met的SEMA结构域结合，优选其中所述抗体能够抑制HGF与SEMA结构域结合，其IC50小于10μg/mL，例如小于2μg/mL，如实施例9所述。9.权利要求8的抗体，其中所述抗体不与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，所述固定化抗体含有包含SEQIDNO:33的序列的VH区和包含SEQIDNO:37的序列的VL区(024)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于25％，例如小于20％。10.权利要求8的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体结合相同的表位：a)含有包含SEQIDNO:1的序列的VH区和包含SEQIDNO:5的序列的VL区的抗体(005)b)含有包含SEQIDNO:9的序列的VH区和包含SEQIDNO:13的序列的VL区的抗体(006)c)含有包含SEQIDNO:25的序列的VH区和包含SEQIDNO:29的序列的VL区的抗体(022)，和d)含有包含SEQIDNO:57的序列的VH区和包含SEQIDNO:61的序列的VL区的抗体(058)。11.权利要求8或10的抗体，其中所述抗体含有具有下列所示序列的VHCDR3区：a)SEQIDNO:181，例如SEQIDNO:4或12中所示的VHCDR3区(005、006)b)SEQIDNO:28(022)，或c)SEQIDNO:60(058)。12.权利要求8或10的抗体，其中所述抗体含有：a)包含SEQIDNO:179、180和181的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:6、7和202的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体：a.包含SEQIDNO:2、3和4的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:6、7和8的CDR1、2和3序列的VL区，(005)，或b.包含SEQIDNO:10、11和12的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:14、15和16的CDR1、2和3序列的VL区，(006)b)包含SEQIDNO:26、184和28的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:30、31和205的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQIDNO:26、27和28的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:30、31和32的CDR1、2和3序列的VL区的抗体(022)，或c)包含SEQIDNO:189、190和60的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:62、63和207的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQIDNO:58、59和60的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQIDNO:62，63和64的CDR1、2和3序列的VL区的抗体(058)。13.权利要求8或10的抗体，其含有：a)包含SEQIDNO:1的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:5的序列的VL区(005)b)包含SEQIDNO:9的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:13的序列的VL区(006)c)包含SEQIDNO:25的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:29的序列的VL区(022)d)包含SEQIDNO:57的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:61的序列的VL区(058)e)包含SEQIDNO:145的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:146的序列的VL区(031)f)包含SEQIDNO:147的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:148的序列的VL区(007)g)包含SEQIDNO:149的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:150的序列的VL区(011)h)包含SEQIDNO:151的序列的VH区和优选包含SEQIDNO:152的序列的VL区(017...

【专利技术属性】
技术研发人员：JJ尼杰森，B德格伊，E范登布林克，AF拉布里恩，RMA赫特，J舒尔曼，P帕伦，J范德温克尔，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK