无细胞马立克氏病病毒疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及保护家禽以对抗马立克氏病的疫苗。本发明专利技术的无细胞疫苗便于处理并可减少滥用疫苗的机会。本发明专利技术还涉及另外包含有其他马立克氏病病毒即ＨＶＴ的二价或多价疫苗。（*该技术在2011年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗家禽马立克氏病的疫苗及制备这种疫苗的方法。马立克氏病(Marek′s Disease，MD)是由一种疱疹病毒-马立克氏病病毒(Marek′s Disease virus，MDV)引起的家禽的恶性淋巴增殖性疾病。MD是一种普通发生于全世界家禽生产国家的家禽疾病。于集约化生产体系下饲养的鸡将不可避免地遭受MD带来的损失。MD影响大约6周令的鸡，12-24周令最易感染。临床上已识别了三种形式的MD典型MD、急性型MD和短暂麻痹型MD。典型MD的特征是由淋巴样浸润和脱髓鞘引起末梢神经肿大，且以麻痹为主要临床症状。死亡率可有所不同，但一般为10-15%。对于急性型MD，家禽内脏器官可见有多发和散在的淋巴瘤，这种类型MD的死亡率一般比典型MD高。在未免疫的群体中，普遍发病率为10-30%，但也可见有高达70%者。典型和急性MD的病理学改变基本上是相似的，包括恶性转化之T淋巴细胞增殖并浸润到正常组织内，其中典型MD侵害末梢神经，而急性MD则侵害内脏器官。另外，已表明MDV是小鸡脑炎的致病因子，其临床表现是小鸡突发麻痹。MD相关病毒的血清学分类可分成三种血清型Ⅰ型对鸡有致病性和致瘤性的马立克氏病病毒的强毒性病毒株，以及由之衍生的减毒非致病病毒株，Ⅱ型天然出现的马立克氏病病毒的非致病病毒株。Ⅲ型对鸡无致病性的火鸡疱疹病毒(“HVT”)。目前使用的有几种类型的马立克氏病疫苗，包括从MD病毒的致病性血清型Ⅰ病毒株衍生的疫苗。这些病毒株经过系列传代后，发现失去了致病性和致癌性，但仍保留其免疫原性。从病毒株HPRS-16衍生的减毒病毒，即原生型MD疫苗(Churchill，A.E.et al.，J.Gen.Virol.4，557，1969)和CVI-988毒株已被获准作为活血清型Ⅰ MD疫苗在商业上使用。血清型2MD病毒是天然非致癌的，因此在接种后的鸡体内不致于引起肿瘤。为此，这些病毒不需要通过系列传代来人工减毒，而且因为它们处于其天然状态，故也不可能回复为其毒性形式。除了从1983年就已在美国获取许可的SB-1病毒株(美国专利No.4，160，024)外，已证明HN-1也可成功地用于疫苗接种。迄今为止，血清型1和2疫苗必须作为与细胞结合的制品来使用(Powell，P.C.，World′s Poultry Science Journal 42，205，1986;Witter，R.L.et al.，Avian Diseases 31，829，1987;Schat，K.A.，Internews 3，13，1989)。在实际使用时，意味着该疫苗不得不在液氮中大约-196℃条件下贮存和运输。因贮存和处理疫苗过程中的差错，会引起MD病毒的存活性降低并导致接种失败。特别是在不可能以液氮贮存的乡村，细胞结合形式的MD疫苗便不能使用。而且，MDV悬浮于细胞结合疫苗沉淀物中，在给药前须将悬浮液混合均匀。如果混合不够均匀，则可造成疫苗剂量不准，而导致接种失败。另外，所说疫苗的严格细胞结合性质致使疫苗易于引起身体对滥用疫苗的敏感性。由于在次最佳条件下收获及冷冻过程对被感染细胞的损伤，以及因不正确的安瓶解冻及在孵化器中对疫苗进行处理而引起细胞损伤和死亡，结果致使疫苗丢失滴定。目前，通常使用从HVT衍生的MD疫苗。HVT最初是从火鸡中分离出来的，其对火鸡和鸡鸭无致病性，而且在免疫原性上与血清型1和2MD病毒是相关的。HVT被广泛用作抗MD的疫苗，且其中使用最多的是FC126病毒株。HVT一般均作为细胞结合制剂使用，但因为实质上几乎所有游离于细胞的病毒都可从被感染之细胞中提取出来，所以也可作为冻干的无细胞疫苗使用。因为不断迫切要求将MD的经济损失降到最低限度，故要求不断改善MD疫苗的效力。特别是在美国和欧洲已有有关由于出现强毒力MD病毒株，而使得家禽饲养业蒙受过多损失的报导。迄今为止，HVT疫苗接种并未能产生对抗这些分离物的足够保护作用，即使提高剂量或延长接种与攻击之间的间隔期仍不能收到明显效果。由于单独以HVT疫苗接种的相对无效，将有利于这些很强毒力之MD病毒野生株的传播。目前一种控制由很强毒力MD病毒感染所引起之疾病的有用方法是使用含有属于不同MD病毒族之不同血清型疫苗病毒混合物的二价和多价疫苗。业已发现，使用二价疫苗可比单独使用任何一种组份获得更好的保护效果。这种现象称为“保护性协同作用”，其机理是，由一种MD疫苗病毒产生的保护作用幅度可因加入第二种疫苗病毒而得以增强(Witter，R.L.，Avian Pathology 11，49，1982;Witter，R.L.and Lee，L.F.，Avian Pathology 13，75，1984;，Witter，R.L.，Avian Pathology 13，75，1984;Witter R.L.，Avian Diseases 31，752，1987;Schat，K.A.et al.，Avian Pathology 11，593，1982)。不利的是，为了有利于这种协同作用，不得不将这种二价疫苗制成细胞结合型制剂，迄今还得不到无细胞血清型2MD病毒疫苗。由于种禽天然暴露于MD病毒和/或由于种禽接种血清型1、2、和3病毒，所以在商品鸡体内普遍存在抗所有MD病毒血清型的MDA(母体衍生的抗体)。同源MDA对免疫接种的不利影响是众所周知的。MDV抗体仅在低水平上干扰(无细胞)HVT疫苗。因此，为使其后代更好地得到HVT赋予的保护，如能用无HVT的MD病毒疫苗接种种禽群体将是很有利的。这种所谓的世代交替接种法有其潜在的优点，即使是它们的后代用含有HVT的二价或多价疫苗接种也是如此。然而，应用这种接种策略时要求能获得满意的无HVT疫苗(Witter，R.L.and Lee，L.F.，Avian Pathology 13，75，1984)。如能得到含无细胞血清型2MD病毒(例如SB-1)的疫苗，在这种世代交替中将是极为有利的。根据本专利技术，提供了一种对抗MD以保护家禽的疫苗，其特征在于这种疫苗含有无细胞MD血清型2病毒以及药物学上可接受的载体。有关血清型1和2MD病毒的早期工作证明，无细胞病毒的量(以初级空斑形成单位pfu表示)不足以具有免疫接种所需的滴度(美国专利4，895，718;Witter，R.L.et al.，Avian Diseases 31，829，1987;Powell，P.C.，World′s Poultry Science Journal 42，205，1986;Schat，K.A.，Internews 3，13，1989)。具体地说，其中已证明SB-1病毒不能产生相当大量的无细胞病毒。现已发现，经进一步将血清型MD病毒传代，可使游离于细胞的病毒量大大增加，并且如此得到的无细胞病毒仍保留其保护性特性。因为Witter(Avian Diseases 31，752，1987)已清楚地证明，系列传代将对与细胞结合的血清型2MD病毒之保护效力有不利影响，故上述发现便尤为令人惊异。另外，Witter(文献同上，1987)曾证明，当传代数增加时协同作用将相应降低，与低传代数之细胞结合形式血清型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保护家禽对抗马立克氏病的疫苗，特征在于它含有无细胞马立克氏病血清型２病毒及药理上可接受的载体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：W巴克斯恩达莱，
申请(专利权)人：阿克佐公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]