本发明专利技术公开了新型的重组多价非致病性马立克氏病病毒构建体，其编码并表达传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒蛋白二者的抗原，及其在家禽疫苗中使用的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术公开了新型的重组多价非致病性马立克氏病病毒构建体，其编码并表达传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒蛋白二者的抗原，及其在家禽疫苗中使用的方法。【专利说明】编码传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒抗原的重组非致病性马立克氏病病毒构建体相关申请的交叉引用 本申请要求于2011年10月21日提交的美国临时申请序号N0.61/549,844在35U.S.C.§ 119(e)下的优先权，其内容通过引用以其整体并入本文。专利
本申请涉及编码并表达传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒蛋白抗原的新型重组多价非致病性马立克氏病病毒构建体，及其在家禽疫苗中使用的方法。专利技术背景 致病性家禽病毒不仅使鸡变得虚弱，而且还使鸡养殖者损失惨重，因为大多数的所致疾病是传染性的，并且家禽工业严重依赖于封闭的大规模饲养设备。接种幼鸡通常是对抗这些病毒的唯一可行方式。尽管减毒或灭活的家禽病毒疫苗仍是市场中的重点，近年来，已花费大量资源用于开发包含表达致病性病毒蛋白抗原的重组病毒构建体的疫苗。此外，已进行大量努力以构建稳定且有效的表达来自多种病毒病原体的外源基因的多价重组非致病性马立克氏病病毒(rMDVnp)载体。这样的多价疫苗将用于使给予小鸡的注射次数最小化，并且由此减少对接种小鸡的不适和胁迫，并且显著降低人工和材料的费用。使用这样的单个多价构建体接种还将优于包含多个重组单价rMDVnp构建体的可选的多价rMDVnp疫苗，因为至少迄今为止，这些可选疫苗产生仅针对单一病毒病原体的保护作用。这些可选疫苗的失利可能是由于单价rMDVnp构建体之一生长超过其他单价rMDVnp构建体,从而抑制这些其他单价rMDVnp构建体诱导显著的免疫反应。在任何情况下，尽管迄今为止的过去曾大量努力以构建稳定且有效的表达来自多种病毒病原体的外源基因的多价重组rMDVnp载体，但已证实这些努力没有成功。可通过疫苗接种控制的一种家禽病毒疾病是马立克氏病(Marek’s disease)。马立克氏病是在全世界不利地影响鸡的致病性疾病。马立克氏病主要发生在2至5月龄之间的幼鸡中。临床症状包括:一个或多个肢的进行性麻痹，由于腿的麻痹导致的动作失调，由于累及翅膀而导致的翼下垂，以及由于累及颈部肌肉而导致的头位置降低。在急性情况下，可产生严重的机能降低。还可发生法氏囊和胸腺萎缩。马立克氏病的病原体是马立克氏病病毒血清型I (MDVl)，一种具有双链DNA基因组的细胞相关病毒。MDVl是嗜淋巴细胞的鸟类α疱疹病毒，其:(i)感染B细胞，这可导致细胞溶解，和(ii)潜伏地感染T细胞，这可诱导T细胞淋巴瘤。与毒性MDVl株密切相关的马立克氏病病毒血清型2 (MDV2)，此前称作原鸡属疱疹病毒3，是天然的减毒MDV株，其已显示具有极低或没有在鸡中的致病性。SB-1是特异的MDV2株，其已显示可用于针对MDVl的疫苗中。另一个密切相关的α疱疹病毒，马立克氏病病毒血清型3 (MDV3)，更广泛地称作火鸡疱疹病毒(HVT)，是驯养火鸡的非致病性病毒。两种通常使用的 HVT株是PBl 株和 FC126 株。同时，HVT在鸡中也是非致病性的，它确实在鸡中诱导针对MDVl的长期持续的保护性免疫反应。因此，HVT已多年用于针对毒性MDVl的家禽疫苗，通常与SB-1组合，SB-1比HVT病毒性更高，但认为其安全性较低。或者，当禽群受到特别毒性的MDVl株的攻击(challenge)时,HVT可以与Rispens疫苗(Rispen’s vaccine)组合。Rispens疫苗是源自温和毒性MDVl株，随后通过细胞继代进一步弱化的分离物。然而，Rispens株保留了对高易感性鸡品系的某些毒力。已公开HVT的完整基因组序列，并且如同大多数α疱疹病毒，HVT具有显著数量的潜在的非必需的插入位点。还已显示 HVT 服从基因修饰，并且因此已用作重组载体很多年。因此，已报道重组HVT载体表达编码抗原的外源基因，所述抗原来自，例如，新城疫病毒(NDV) 、传染性法氏囊病病毒(IBDV) [Darteil 等人，Virology, 211:481-490 (1995) ;Tsukamoto 等人，J of Virology 76(11):5637-5645 (2002)]，和传染性喉气管炎病毒(ILTV) 。MDV2 的完整基因组序列也是已知的。MDV2的基因组结构非常类似于HVT，并且特别地，US区域与HVT的US区域相同。此外，已构建了称作新型鸟类疱疹病毒(NAHV)的重组嵌合病毒，其中已将HVT基因组的特异性区域替换成MDVl基因组的相应区域。NAHV还已用于表达编码来自其他家禽病毒的抗原的外源基因。如同MDV，传染性喉气管炎病毒(ILTV)是在全世界不利地影响鸡的α疱疹病毒。ILTV 在鸡中导致急性呼吸道疾病，其特征在于呼吸抑制、喘息和血性渗出物的痰。病毒复制局限于呼吸道的细胞，在此，感染在气管中导致组织糜烂和出血。新城疫是鸡的另一种高度传染性且导致衰弱的疾病。新城疫的病原体是新城疫病毒(NDV)。NDV属于单股反链病毒目(Mononegavirales),并且在副粘病毒科iParamyxoviridae)。新城疫病毒具有不分段的,反义,单链RNA基因组。已根据其毒力,将NDV分类成3个不同的致病型。NDV的非致病性弱毒株感染的家禽基本是无症状的。与此直接相比，中等毒力(中等致病性)和强毒(高致病性)NDV株导致可致命的广泛疾病。大多数类型的NDV感染呼吸系统和/或神经系统，并可导致喘息和斜颈。传染性法氏囊病病毒(IBDV),也称作甘保罗病病毒(Gumboro disease virus),是传染性法氏囊病的病原体。IBDV导致鸡淋巴组织的急性、高度传染性的病毒感染，且其主要靶标是鸟的基本免疫器官:法氏囊。易感禽群中的发病率高，具有快速的体重损失和中等至高的死亡率。因为法氏囊(或部分的)破坏，从该疾病康复的小鸡可具有免疫缺陷。这使它们特别易受二次感染的攻击。IBDV是双核糖核酸病毒科(JUrnaviridae')的成员。这个科的病毒具有由两段(A和B)的双链RNA组成的基因组。存在IBDV的两种血清型，血清型I和2，其可通过病毒中和(VN)测试而区分。血清型I病毒已显示对鸡具有致病性，而血清型2病毒仅在火鸡中导致亚急性疾病。在历史上，IBDV血清型I病毒仅由一个种类组成，其现称为“典型”IBD病毒。新近，已出现了所谓“变体”IBDV株。IBDV的典型和变体株可通过使用一组单克隆抗体的病毒中和测试,或通过RT-PCR而鉴定和区分 ?熟知的典型IBDV株包括D78、Faragher 52/70，和STC,而89/03是熟知的变体株。很多活的或灭活IBDV疫苗是商购可得的，例如活疫苗，如NOBILISk Gumboro D78 (MSD AnimalHealth)。如上所示，因为HVT能够充当提供抵御马立克氏病的显著保护作用的抗原和充当重组载体，目前将其用作平台载体用于这种多价疫苗，例如Innovaxe-1LT (Merck AnimalHealth 销售)，提供抵御 ILTV 的保护作用；和 Innovax?-ND_SB (Merck Animal Health 销售)和Vectormune本文档来自技高网...
【技术保护点】
重组的非致病性马立克氏病病毒(rMDVnp)，其包含插入到所述rMDVnp基因组中的第一非必需位点的第一核酸，和插入到所述rMDVnp基因组中的第二非必需位点的第二核酸，其中，所述第一核酸包含编码传染性喉气管炎病毒(ILTV) gD蛋白的核苷酸序列，和编码传染性喉气管炎病毒(ILTV) gI蛋白的核苷酸序列；其中，所述第二核酸包含编码新城疫病毒融合蛋白(NDV F)的核苷酸序列；和其中，所述第一非必需位点和所述第二非必需位点是相同的，或者仅所述第一非必需位点是US2位点。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S库克，M莫塞，G彼得森，PJA索德梅杰，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL
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