本发明专利技术公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒及用途，试剂盒采用已灭活的纯化BHV-1病毒粒子作为包被抗原,依据阻断ELISA原理检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒的抗体。试剂盒中96孔板中的包被抗原为灭活的纯化BHV-1病毒粒子,其具有良好的抗原性。试剂盒包括杂交瘤细胞株、ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、终止液、底物显色液A、底物显色液B、阳性对照、阴性对照。该试剂盒敏感性强，特异性高，使用方便，易于标准化，尤其适用于大规模样品的检测，可以作为调查牛传染性鼻气管炎流行情况的金标准。与美国IDEXXgE阻断试剂盒相比，有很高阳性符合率及阴性符合率，可以作为诊断牛传染性鼻气管炎的标准方法。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，试剂盒采用已灭活的纯化BHV-1病毒粒子作为包被抗原,依据阻断ELISA原理检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒的抗体。试剂盒中96孔板中的包被抗原为灭活的纯化BHV-1病毒粒子,其具有良好的抗原性。试剂盒包括杂交瘤细胞株、ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、终止液、底物显色液A、底物显色液B、阳性对照、阴性对照。该试剂盒敏感性强，特异性高，使用方便，易于标准化，尤其适用于大规模样品的检测，可以作为调查牛传染性鼻气管炎流行情况的金标准。与美国IDEXXgE阻断试剂盒相比，有很高阳性符合率及阴性符合率，可以作为诊断牛传染性鼻气管炎的标准方法。【专利说明】牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断EL ISA试剂盒及用 途
本专利技术属于生物
。具体涉及一种用于牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检 测的阻断ELISA试剂盒，还涉及一种用检测牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA 试剂盒的用途。
技术介绍
牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR)是由牛传染性 鼻气管炎病毒（Infectious Bovine Rhinotracheitis viruse，IBRV)即牛 1 型疱疫病毒 (Bovine herpe svirus-l，BHV_l)引起的一种牛呼吸道接触性传染病，又称"坏死性鼻炎"、 "红鼻病"。 牛1型疱疹病毒（BHV-1)是疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的成员，它是一种有囊膜 的双股DNA病毒。BHV-1的病毒粒子为圆球型，成熟的粒子直径约有150?220nm，主要包 括核心、衣壳被膜和囊膜三部分。其中核心是由病毒的DNA和蛋白质相互缠绕而成，而核衣 壳是一个二十面体，它外观呈六角形，空间上立体对称。其外表面有162个壳粒，周围是一 圈带有脂质的囊膜。 牛传染性鼻气管炎的临床症状分为呼吸道型、生殖道型、流产型、脑炎型和眼炎型 五种。呼吸道型表现为鼻气管炎，为本病最常见的一种类型；生殖道型表现为母畜外阴阴道 炎，又称传染性脓疱性外阴阴道炎，公畜龟头包皮炎，因此称传染性脓疱性龟头包皮炎；流 产型一般见初胎青年母牛怀孕期的任何阶段，也可发生于经产母牛；脑炎型：易发生于4? 6月龄犊牛；眼炎型表现为结膜角膜炎，常与呼吸道型合并发生。IBRV感染后虽然没有显示 出很高高的死亡率，但是感染后会造成潜伏感染和终生感染，而且病牛会长期甚至终生都 带毒，当机体的抵抗力降低时，则又重新激活，向外排毒，使得该病极难根治。 该病于1955年被首次发现，至今几乎所有的国家均检出IBR抗体。目前仅在澳大 利亚、丹麦、芬兰、挪威、瑞典、瑞士根除了该病。我国最早是于20世纪70年代在进口牛群 中发现该病。20世纪80年代由周泰冲等在深圳海关从新西兰的进口奶牛中分离出该病病 毒,之后在1986年由邓沛霖、1987年由王则兴等又从乳牛、水牛、黄牛中分离到此病毒，证 实IBR在我国牛群中确实存在。在本实验室，2012年由范强等利用乳胶凝集抗体检测的方 法检测了从我国内蒙古、新疆和江苏三省采集的521份临床样品，阳性率达到34. 57%。 病毒中和试验（VN)和酶联免疫吸附试验（ELISA)是检测抗体的常规方法，欧洲的 实验室已经建立一些阻断ELISA方法，主要应用于牛传染性鼻气管炎的流行病学调查中。 本专利技术制备了牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP)标记该单抗， 建立了阻断ELISA抗体检测方法，为牛传染性鼻气管炎提供可靠的数据支持。 目前许多发达国家均在推行牛传染性鼻气管炎的控制和消灭计划，其基本做法法 是推广使用基因缺失疫苗和配套的鉴别诊断试剂盒，一方面通过疫苗免疫降低发病率和感 染率，另一方面通过鉴别诊断筛选出免疫后的带毒牛，将带毒牛进行隔离饲养或直接淘汰， 逐步使牛群得到净化。我国作为养牛大国，牛传染性鼻气管炎的危害十分严重，有条件的牛 场应当借鉴发达国家的做法和经验，逐步实施对牛传染性鼻气管炎的控制和净化，提高经 济效益。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种用于牛传染性鼻气管炎gB病毒抗体检测阻断 ELISA试剂盒，该试剂盒敏感性强，特异性高，使用方便，易于标准化，与美国IDEXX gE阻断 试剂盒相比，有很高阳性符合率及阴性符合率，可以作为诊断牛传染性鼻气管炎的标准方 法。 本专利技术的另一个目的是在于提供了一种牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断 ELISA试剂盒在检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体中的应用，该应用用于检测牛血清中有无 牛传染性鼻气管炎病毒的抗体出现，即检测被检牛是否感染牛传染性鼻气管炎病毒，灵敏 性极强，几乎无假阳性及假阴性出现，尤其适用于大规模样品的检测，可以作为调查牛传染 性鼻气管炎流行情况的金标准。 为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是： 一种用于牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒，试剂盒采用灭活 的纯化BHV-1病毒粒子作为包被抗原，依据阻断ELISA原理检测牛血清中牛传染性鼻气管 炎病毒的抗体。试剂盒中96孔板中的包被抗原为纯化的BHV-1病毒粒子，其具有良好的 抗原性。所述的试剂盒包括由保藏号为CCTCC N0:C201345的杂交瘤细胞系分泌的抗牛传 染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体的酶标记物。 申请人:于2013年4月3日将该杂交瘤 细胞株送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号CCTCC N0 : C201345,分类命名：杂交瘤细胞株1H3。 一种用于牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒，其特征在于：杂 交瘤细胞株、ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、终止液、底物显色液A、底物显色液B、 阳性对照、阴性对照、酶标单克隆抗体：所述辣根过氧化物酶标记的鼠抗牛传染性鼻气管炎 病毒gB蛋白单克隆抗体。 所述的ELISA板条：每个试剂盒装有2块或5块ELISA微孔板，每块ELISA板条 为能自行拆卸的已包被抗原的ELISA微孔板，包被抗原为纯化的BHV-1病毒粒子,规格为8 孔X 12条； 所述的血清稀释液：血清稀释液为即用型； 所述的浓缩洗涤液：洗涤液为10倍浓缩，使用前稀释； 所述的底物显色液A :0· 006%H202缓冲液； 所述的底物显色液B :TMB显色液； 所述的终止液：0. 025%氢氟酸（HF); 阳性对照；阴性对照。 -种辣根过氧化物酶标记的鼠抗牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体，其 制备步骤是： 一、建立细胞系： 1.抗原制备： MDBK细胞接种BHV-1野毒，待80%细胞出现裂解脱落，-78 - -82°C冻融三次，4°C 下，6000rpm离心40min，取上清，于4°C下，25000rpm离心2h，TEN重悬沉淀，利用鹿糖梯度 离心法得到纯化的病毒粒子。 2.抗原免疫： 灭活纯化病毒粒子后，免疫6周龄BALB/C小鼠，首次基础免疫皮下注射抗原 1〇〇 μ g/只，使用完全弗氏佐剂；每隔2周进行一次免疫，共三次，皮下注射抗原100 μ g/只 /次，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于：杂交瘤细胞能分泌针对BHV‑1 gB蛋白的抗体，杂交瘤细胞株为1H3，CCTCC NO：C201345。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘正飞，王单晶，范强，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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