一种分离的、纯化的ＤＮＡ分子，其中含有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的核苷酸序列，或与其生物学功能相当的核苷酸序列。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
技术介绍
专利
本专利技术涉及源于马立克氏病病毒具有独特的核苷酸序列的基因、包含此基因的重组病毒、应用此基因的家禽疫苗、及在抗马立克氏病的保护中具有增效作用的重组禽痘病毒疫苗。相关领域描述马立克氏病(MD)是一种饲养雏鸡的高传染性瘤性疾病，对世界范围的雏鸡有影响，如果一日龄雏鸡未接种疫苗，该病可导致高死亡率和淘汰。MD由一种已知为马立克氏病病毒(MDV)的高细胞相关肿瘤疱疹病毒所致。现有大量保护雏鸡抗MD的活病毒细胞相关疫苗。这些疫苗以不稳定的、细胞相关的形式保存和施用。疫苗需特殊操作，为维持其活力和效能必须在液氮中保存和运输。这些现有疫苗必须以条件昂贵而麻烦的细胞相关的形式保存和应用。已知疫苗包含包括涉及致病诱导的序列的全MDV基因组。虽然现有抗MD疫苗为减毒的或天然非致病的，但已知疱疹病毒可产生病毒突变体，并存在这种疫苗中出现有毒力的致病性突变体的可能性。这种突变株可能是低效的、甚至是有害的。Churchill等(自然(Nature)，221744-747(1969))和Okazaki等(鸟类疾病(Avian Dis.)，14413-429(1970))首先发展了有效、安全的抗MD疫苗。这些疫苗已在过去的20年中得以应用，并在世界范围内降低了家禽工业的损失。其他基于血清型2型天然非致病的MDV(Schatd等，国家癌症研究所杂志(J.Natl.Cancer Inst.)，601075-1082(1978))，或新的减毒血清型1型MDV(Rispens等，鸟类疾病16108-125(1987))及作为双价疫苗的这些病毒的组合(Witter，鸟类疾病，31252-257(1987))的其他候选疫苗已有助于提供更好的抗MD保护。除火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗之外，所有这些疫苗需要在液氮中以冷冻状态保存和运输，并以感染细胞形式施用，该形式需小心操作以防止疫苗失活。甚至HVT疫苗中，细胞相关病毒也被最广泛地应用，因为当存在成熟抗体时它们比无细胞病毒更有效(Witter等，鸟类病理，8145-156(1978))。重组DNA技术有助于仅含诱导免疫的所需病毒基因或基因产物而不含将动物暴露于诱导病理紊乱的基因的重组疫苗的构建。痘病毒，包括禽痘病毒，尤其是家禽痘病毒(FPV)提供了这类疫苗的优良模型。这些病毒具有含大量的非必须区的大DNA分子，该非必需区允许于同一病毒内插入多个免疫原性基因以构建多价疫苗。这些多价疫苗可在接种宿主中同时诱导细胞介导和抗体介导的免疫应答。痘苗病毒(VV)就这一目的而广泛应用，并已构建了大量的表达包括诱导单纯疱疹病毒(HSV)1型糖蛋白的中和抗体的那些基因在内的(Blacklaws等，病毒学(Virology)，177727-736(1990))多种外源基因的VV重组子。与此相似，有大量报告描述外源基因通过FPV重组子表达(Boyle等，病毒研究(VirusRes.)，10343-356(1988)和Ogawa等，疫苗(Vaccine)，8486-490(1990))。最近，我们证实recFPVgB可保护雏鸡抗MD攻击(Nazerian等，病毒学杂志(J.Virol.)，661409-1413(1992))。最近，编码糖蛋白B、C、D、H和I、E、L(gB、gC、gD、gH和gI、gE、gL)的HSV基因的MDV同源染色体已被克隆并测序(Coussens等，病毒学杂志，622373-2379，(1988)；Ross等，普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.)，701789-1804(1989)；Ross等，普通病毒学杂志；Ross等，欧洲专利申请国际公开编号WO90/02803(1990)；Brunovshis和Velicer，病毒学，206324-338(1995)；和Yoshida等，病毒学，204414-419(1994))。专利技术概述本专利技术表明gB是一重要的抗MD保护性免疫的基因(Nazerian等，病毒学杂志，661409-1413(1992))。Whittaker等(1992)马单纯疱疹病毒1型(EHV-1)基因28编码一糖蛋白gp300，该蛋白与HSV-1 UL32同源，且在EHV-1细胞间融合过程中起作用。我们假设MDV内存在这样一个同源基因，因为MDV为细胞相关病毒，它可能在细胞与细胞的融合方面起作用。最近，我们鉴定和测序了一种与HSV-1 UL32同源的MDV基因，还鉴定了一种MDV感染细胞中、属于膜蛋白一类的氧偶联糖蛋白gp82(Lee，未发表资料)。本专利技术涉及编码一种膜糖蛋白的MDV UL32基因。UL32基因的DNA序列显示于所附序列表中的SEQ ID NO1中。本专利技术因此涉及该序列，根据遗传密码的简并性它编码一蛋白，优选以克隆的、分离的、纯化的形式及其生物功能性变异体。本专利技术还涉及含有UL32序列的重组DNA分子。本专利技术还涉及含有编码MDV膜糖蛋白gp82的新UL32基因的新的重组病毒疫苗，如重组子FPV、HVT(火鸡疱疹病毒)、MDV和ILTV(传染性喉支气管炎病毒)。疫苗优选以含有MDV UL32基因的FPV重组子为基础。更为优选的是，重组子含有在保护雏鸡抗MD中提供增效作用的附加基因，如编码gp100、gp60和gp49的gB基因。如下所示，表达UL32的重组FPV抗MD有效。作为疫苗的gB的序列与效果已在美国专利编号5,369,025中描述。细胞中这两个基因的表达在天然宿主(雏鸡)中可产生意外的抗MD强协同保护作用。另外，疫苗也可保护抗禽痘。本专利技术还涉及在FPV插入了MDV gB基因或MDVUL32基因或其它的如编码来自不同血清型MDV的糖蛋白E同系物、糖蛋白I同系物和其它糖蛋白的基因的抗MD重组FPV疫苗，以产生抗多种MDV分离株有效的广谱疫苗。本专利技术还涉及含重组(rec)FPV的无细胞的抗MD疫苗，该疫苗可进行正常条件下冷冻干燥、保存和使用，因此避免了现有细胞相关MD疫苗所必需的昂贵而费力的在液氮中储存疫苗、细致操作和施用的方法。例如，冻干后，本专利技术疫苗可在常温(20-22℃)储存、处理、运输，并可4℃长期保存。疫苗还可于冷冻状态保存，其中无细胞的重组病毒置于冷冻溶液中并保存于如-20℃或-70℃。因此，本专利技术的一个目的是提供一种分离的、纯化的、含有SEQ IDNO1所示核苷酸序列或与其生物学功能等价的核苷酸序列的DNA分子。本专利技术的另一个目的为提供一种分离的、纯化的含有编码具有SEQ IDNO2所示氨基酸序列的多肽或编码其生物学功能等价的多肽的核苷酸序列的DNA分子。本专利技术的另一个目的为提供一种分离的、纯化的具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽或其生物学功能等价的多肽。本专利技术的另一个目的为提供一种含有上述DNA分子的重组载体。本专利技术的另一个目的为提供一种表达所述DNA分子的重组病毒。该重组病毒可进一步表达至少编码鸟类病原体的一种抗原的核苷酸序列或其生物学功能等价的核苷酸序列。本专利技术的另一个目的为提供一种表达编码一种马立克氏病病毒膜蛋白的DNA序列的重组病毒。本专利技术的另一个目的为提供一种疫苗组合物，包含选自下组的成员分离的、纯化的含有SEQ ID NO1所示核苷酸序列或与其生物学功能相当的核苷酸序列的DNA分子；分离的、纯化的含有本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：L·F·李，K·纳兹里安，R·L·维特，吴平，柳田升，吉田荣人，
申请(专利权)人：日本是恩株式会社，由农业部长代表的美利坚合众国，
类型：发明
国别省市：
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