人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列及制备方法技术

发明专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明专利技术涉及人高效淋巴细胞趋化因子ＨＵＭＥＣＬ的基因组序列，该因子是人淋巴细胞趋化因子的同系物。本发明专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人高效淋巴细胞趋化因子(efficient chemoattractant forlymphocyte，简称为“ECL”)的基因组序列，该因子是人淋巴细胞趋化因子的同系物。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。趋化因子(chemokine)是80年代末发现的一类细胞因子，它对各类白细胞的转移有调控作用(Hedrick，J.et al.1996 Curr Opin Immunol，8，143.)。根据趋化因子分子中的4个保守的半胱氨酸的位置的不同，可以把它们分为4类(1)CXC亚家族，其中前两个Cys被一个不保守的氨基酸隔开。(2)CC亚家族，其中前两个Cys相邻。(3)C亚家族，其中只有两个(第2、4个)Cys。(4)CX3C亚家族，其中前两个Cys被3个其它氨基酸隔开(Joseph，A.et al.1997 J Immunology，159，1589-1593.)。不同的亚家族可能在功能上有一定的差异，如CXC亚家族通常对嗜中性粒细胞起诱导趋化作用；CC亚家族和CX3C亚家族则一般对单核细胞和淋巴细胞起作用，一些CC亚家族的成员还可以作用于嗜碱细胞和嗜曙红细胞；C亚家族特异性的对T细胞和NK细胞作用。此外，这些亚家族的某些成员也能作用于T细胞和NK细胞。除了前面所述的诱导白细胞转移的功能外，近来还发现了趋化因子家族的一些其它的功能，如对血红细胞的生长抑制作用、对血管生长的抑制或刺激作用、以及对爱滋病毒增殖的抑制作用等。CC趋化因子亚家族中最早被鉴定的成员是MIP-1。早在1985年，BECUTLER，B.等人在研究CACHECTIN/TNF和FRIEND ERYTHROLEUKEMIC细胞的分化抑制剂时发现了MIP-1(BECUTLER，B.et al.1985，J.EXP.MED.161，984-995)。而编码该分子基因的克隆则是在1988年由SHERRY，B.和DAVATELIS，G.等完成(SHERRY，B.et al.1988，J.EXP.MED.168，2251-2259；DAVATELIS，G.et al.1988，J.EXP.MED.167，1939-1944.)。迄今为止，CC趋化因子亚家族已经发现了MIP-1α、MIP-1β、MIP-2、RANTES、MCP以及最近发现的TARC、LARC/MIP-3α/EXODUS-1、SLC/EXODUS-2/6-C-KINE等成员(HROMAS，R.et al.1997 BLOOD，89(9)，3315-3322；NAGIRA，M.et al.1997，J.BIOL.CHEM.272(31)，19518-19524；HEDRICK，JA.AND ZLOMIK，A.1997，JIMMUNOL.159，1589-1593；HROMAS，R.et al.1997，J IMMUNOL.159，2554-2558).其中，高效淋巴细胞趋化因子ECL(又称为“SLC”、“EXODUS-2”或“6-C-KINE”)的CDNA序列已经由HEDRICK，JA.和ZLOMIK，A.(J IMMUNOL.159，1589-1593(1997))以及HROMAS，R.等人(J IMMUNOL.159，2554-2558(1997))公开。但是，在本专利技术之前，对高效淋巴细胞趋化因子的基因组序列还不清楚。本专利技术的目的就是提供一种人高效淋巴细胞趋化因子人基因组序列，以便为进一步研究该基因的功能以及转录翻译过程。本专利技术的另一目的是提供一种产生人高效淋巴细胞趋化因子的方法。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离的人高效淋巴细胞趋化因子(humanefficient chemoattractant for lymphocyte，简称为“HUMECL”)的基因组序列，该序列的多核苷酸全长为1056个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO3，其中编码框位于6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸。还提供了SEQ ID NO3的简并序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种含有人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列的载体。在本专利技术的另一方面，提供了一种转化的宿主细胞，它被含有人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列的载体所转化。在本专利技术的另一方面，提供了一种生产人高效淋巴细胞趋化因子的方法，它包括在适合表达的条件下，培养转化的宿主细胞，该宿主细胞具有含人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列的载体，其中该序列是SEQ ID NO3或其简并序列；和分离所表达的人高效淋巴细胞趋化因子。在本专利技术的另一方面，还提供了一种探针分子，该探针长度通常为8-100个BP，较佳地10-35个核苷酸，而且含有对应于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。在含有对应于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列的同时，探针还可含有SEQ ID NO3中6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸的序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列的用途，它包括使用10-35个核苷酸的核酸探针来检测人细胞样本，以判断该基因的内含子部分是否存在变异，其中该探针含有对应于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。在本专利技术的另一方面，还提供了该因子基因组序列的反义序列及其片段。这些反义序列及其片段可以用于抑制或减少细胞中人高效淋巴细胞趋化因子的表达。因而可用于治疗人高效淋巴细胞趋化因子表达过多而导致的疾病。在本专利技术中，术语“人高效淋巴细胞趋化因子基因组序列”指SEQ ID NO3序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO3序列的编码框6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。该术语还包括能编码具有与人高效淋巴细胞趋化因子相同功能的因子的、SEQ ID NO3序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。在本专利技术中，术语“人高效淋巴细胞趋化因子”指具有SEQ ID NO4序列的多肽。该术语还包括具有与人高效淋巴细胞趋化因子相同功能的、SEQ ID NO4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的编码人高效淋巴细胞趋化因子的基因组序列，其特征在于，它包括：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３所示的核苷酸序列及其简并序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，傅强，毕安定，刘擎，赵寿元，
申请(专利权)人：上海新黄浦复旦基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]