源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞制造技术

根据本发明专利技术，对患有肿瘤、病毒感染以及自身免疫性疾病的患者具有很高疗效的源于ＨＬＡ相匹配的供体的激活的淋巴细胞可以通过以下方法制备得到：收集源于ＨＬＡ相匹配的供体外周血中的细胞，或者收集源于ＨＬＡ相匹配的、并具有微嵌合状态的供体的外周血中的细胞；然后，用例如白介素２、抗ＣＤ３抗体等物质激活并增殖所收集到的细胞。由此制得的源于ＨＬＡ相匹配的供体的激活的淋巴细胞可以用于预防和治疗ＨＬＡ相匹配的患有肿瘤、病毒感染以及自身免疫性疾病的患者。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于预防和治疗肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞，使用所述激活的淋巴细胞的治疗方法，该淋巴细胞作为主要成分的制剂，生产该制剂的方法，以及用于制备该制剂的试剂盒。本专利技术的目的是更有效地治疗及预防肿瘤，例如癌症，以及感染性疾病。
技术介绍
近年来，淋巴细胞作为一种关键性的生物防御措施用于支持免疫系统，受到了广泛的关注。T淋巴细胞在细胞介导免疫中起着极其重要的作用。根据它们的单克隆抗体的反应性，对T淋巴细胞进行以下分类，例如，显示能与抗CD3抗体反应的T淋巴细胞(CD是指“分化簇”)被分类为CD3阳性细胞。到目前为止，已经对T淋巴细胞进行了重要的定量和定性研究，特别是关于所显示的抗原与其功能之间的关系。另外，本专利技术的专利技术人之一，Sekine先生，曾在日本的未经审查的专利申请NO.H0380076中报道，通过使用固相抗CD3抗体(用淋巴细胞包被)和白介素-2能够使淋巴细胞增殖。增殖得到的自体淋巴细胞具有显著的抗肿瘤效果。另外，还有许多研究者也报道过，源于外周血等的淋巴细胞可以通过抗CD3抗体或白介素-2而得到增殖，所得到的自体淋巴细胞显示具有抗肿瘤的活性。而且，供体白细胞输入(下文中简称为“DLT”)以及供体淋巴细胞输入(下文中简称为“DLI”)是两种较为成熟的治疗方法，当经过骨髓移植的病人中自血病复发时，通过上述两种方法引入大量的供体骨髓中的淋巴细胞。同时，近年来HLA相匹配母亲和孩子之间所显示的免疫耐受证实了微嵌合状态的存在。因此目前从事了大量的研究工作，其目的是利用微嵌机制迅速地在病人中诱导缓解状态，从而使器管移植更加安全。众所周知，当同胞之间产生微嵌合微嵌合时，同胞之间肾移植的成功率非常高。然而，上述对T淋巴细胞以及诱导微嵌合状态的研究仍然处于实验阶段，目前还没有将上述研究用于实践的应用技术。此外，不能通过简单地对收集到的自体淋巴细胞进行增殖而始终确保其具有有效地抗肿瘤效果，特别是在癌症中。还必须强调，在实施DLT治疗中其相对比较困难。根据每个白细胞所属的白细胞群，即HLAs(人类白细胞抗原)，将白细胞分为许多不同的“基因座”。在这些基因座中，DQ，DP，A，B，C以及DR基因座在器官移植中是必须经过仔细检查的关键因素。这些基因座每个都是由两个基因拷贝构成，其中一个来源于父亲，另一个来源于母亲(等位基因)。而且每个基因座都具有多态性。因此，从广义上来讲，输血，包括移植(例如外周血肝细胞移植)和DLT中，供体和病人中必须至少有四对HLA基因座相匹配，8个HLA分子之间的符合率是非常关键的因素。在上述情况下，病人和供体的白细胞HLA完全相配几乎不可能的。实际上，只要主要的HLAs相匹配，则就可以采用骨髓移植或输血。然而，某个HLA不匹配将导致致死性的副作用，即病人在接受骨髓移植或DLT治疗后，发生的致死性的输血后移植物抗宿主疾病(下文简称“PT-GVHD”)另外，由于在进行器官移植或输血前表现出器官疾病和感染性疾病，即使有HLA相匹配的供体，许多病人仍然不能进行骨髓移植或输血。对于那些不选择进行骨髓移植的癌症患者，通过给予源于供体的淋巴细胞来尝试对其进行治疗，但是仍未证实上述尝试是非常有效的综上所述，当不选择进行骨髓移植时，自体(源自于病人的)淋巴细胞或源于供体的淋巴细胞的抗肿瘤效果并不令人满意，而且到目前为止，它们的抗病毒效果以及对自身免疫性疾病的效果还不清楚。另外还有一个问题是，如果不寄希望于淋巴细胞供体的话，淋巴细胞不可能被大量地制备。再者，必须与造血干细胞移植结合进行的DLI作为一种治疗选择有很大的限制，其原因是，如果病人不能进行造血干细胞移植的话，DLI就不能进行，同时，由于DLI必须结合干细胞移植进行，其需要高的HLA符合率，因此，找到HLA相匹配的供体的可能性就非常低。
技术实现思路
因此，本专利技术的专利技术人在研究具有高的抗肿瘤、抗病毒、抗自身免疫性疾病效果的源于供体的淋巴细胞及其制备方法方面作了大量的研究工作，从而完成了本专利技术。本专利技术涉及源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞，制备所述激活的淋巴细胞的方法，以及通过给予所述激活的淋巴细胞，治疗HLA相匹配的患有肿瘤、病毒感染或自身免疫性疾病的病人，上述淋巴细胞作为主要成分的制剂，该制剂的生产方法，用于生产该制剂的试剂盒。所述淋巴细胞具有高的抗中瘤、抗病毒效果，同时其在治疗自身免疫性疾病方面证实非常有效。通过收集HLA相匹配的供体外周血中的细胞，或收集源于能够与病人发生微嵌合的HLA相匹配的供体外周血中的细胞，然后，例如，使用白介素-2，抗-CD3抗体或类似物刺激这些细胞并使它们增殖，从而得到上述淋巴细胞。下文中将对本专利技术进行详细地描述。但是总的来说，本专利技术的特征在于，通过收集HLA相匹配的供体外周血中的细胞，或收集表现出微嵌合状态的HLA相匹配的供体外周血中的细胞，然后刺激并增殖这些细胞，从而制备出源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞。所收集的细胞可以通过使用，例如白介素-2和抗-CD3抗体，对其进行多克隆的激活，从而刺激这些细胞并使它们增殖。此外，用适当的抗原等得到具有抗原特异性的T淋巴细胞等，然后用CD3抗体、CD26抗体和例如白介素2的细胞因子中的一种或者上述物质的组合得到具有抗原特异性的激活的淋巴细胞。另外，对所收集的源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞进行增殖和激活后，可以通过筛选而选择具有抗原特异性的激活的淋巴细胞，或通过使用一种合适的抗原诱导源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞，从而得到抗原特异性的淋巴细胞。或者，具有抗原特异性的激活的淋巴细胞可以通过筛选上述的激活的淋巴细胞而选择得到，或者，通过抗原刺激以增殖和激活淋巴细胞从而得到抗原特异性激活的淋巴细胞。在这种情况下，抗原特异性淋巴细胞可以源于CD8+细胞或CD4+细胞。除了提纯的抗原外，癌细胞或病毒的提取物，癌细胞本身或病毒本身或任何与癌细胞或病毒细胞具有交叉反应性的抗原物质均可以用于上述目的。在本专利技术的一个具体方式中，源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞用于预防或治疗肿瘤，感染性疾病以及自身免疫性疾病。此外，根据本专利技术，含有源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞的制剂用于预防或治疗肿瘤，感染性疾病以及自身免疫性疾病。而且，本专利技术提供了一种治疗方法，该方法使用源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞或含有源于HLA相匹配的供体的激活的淋巴细胞的制剂，用于预防或治疗肿瘤，感染性疾病以及自身免疫性疾病。本专利技术进一步提供了一种制备试剂盒，该试剂盒用于制备激活的淋巴细胞，或一种至少将源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞与白介素2相组合，从而激活淋巴细胞的制剂。另外，本专利技术提供一种制备试剂盒，该试剂盒用于制备激活的淋巴细胞，或一种至少将源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞与抗CD3抗体相组合，从而激活淋巴细胞的制剂。本专利技术提供一种方法，用于生产预防和治疗肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的制剂，该方法包括从含有源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞的外周血中分离出单核细胞，在分离出的单核细胞中增殖并激活源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞，提取增殖并激活的源于HLA相匹配的供体的淋巴细胞，并制备以所述淋巴细胞为主要成分的制剂。具体实施例方式以下将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防和治疗肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的预防性和治疗性淋巴细胞，其特征在于：所述淋巴细胞通过激活源于ＨＬＡ相匹配的供体的淋巴细胞来获得。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黒岩保幸，森尾友宏，清水则夫，关根晖彬，
申请(专利权)人：淋巴细胞技术株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]