本发明专利技术涉及包含γδT细胞的淋巴细胞细胞系、其组合物及生产方法，以及医学用途，即用于医学中，即用于癌症免疫疗法中。该细胞系包含表达功能性天然细胞毒性受体（NCR）的人外周血Vδ1+γδT细胞的样品。这些Vδ1+NCR+T淋巴细胞可以直接介导白血病细胞系和慢性淋巴细胞白血病患者瘤细胞的杀伤。本发明专利技术显示，当采用γδTCR激动剂和γc-家族细胞因子有规律地体外或离体刺激时，人Vδ1+NCR+T细胞可以从总γδ外周血淋巴细胞(PBL)分化和扩充。这种亚类令人惊讶地表达NKp30、NKp44和NKp46，以及高水平的粒酶B，其与高度增强的针对淋巴样白血病的细胞毒性相关。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含Y S T细胞的淋巴细胞系、其组合物及生产方法本专利技术的
本专利技术涉及包含Y 6 T细胞的淋巴细胞系、其组合物及生产方法，以及医学用途，即用于医学中，也就是用于癌症免疫疗法中。背景肿瘤在拥有高度复杂的免疫系统的宿主中形成，所述免疫系统包括能够识别和摧毁转化细胞的各种淋巴细胞亚类。现在广泛接受的是，尽管淋巴细胞可以持续侦查肿瘤形成，但是癌细胞形成了逃避免疫监视的分子策略，所述分子策略在宿主免疫系统的压力下被竞争性地选择。这种称作“癌症免疫编辑”的动态过程被认为构成癌症免疫疗法的主要障碍。 在多种免疫逃避机制当中，最近显示白血病和淋巴瘤原代样品经常下调非经典的MHC (主要组织相容性复合物)蛋白ULBPl，所述ULBPl对表达反受体NKG2D的Y S T-细胞识别血液肿瘤至关重要(Lanca, T.等人，“The MHC class Ib protein ULBPlis anonredundant determinant of leukemia/lymphoma susceptibility to gammadeltaT-cell cytotoxicity”，Bloodll5:2407-2411;2010)。y 6 T细胞是占据1-10%健康个体外周血淋巴细胞(PBL)并且能够靶向实验室中所测试的大部分血液肿瘤细胞系的天然样淋巴细胞。然而，已证实许多淋巴样白血病原代样品对充分活化的V Y 9V S 2T-细胞(Y 6 PBL的优势亚类)有抗性(Lanca，T.等人，“TheMHC class Ib protein ULBPlis a nonredundant determinant of leukemia/lymphomasusceptibility to gammadelta T-cell cytotoxicity，，，Blood 115:2407-2411, 2010 ；Gomes, A.Q.等人，“Identification of a panel of ten cell surface protein antigensassociated with immunotargeting of leukemias and lymphomas by peripheralblood gammadelta T cells”，Haematologica95:1397-1404，2010)。另外，涉及体内施用V Y 9V 6 2T细胞的激活物的临床试验已经显示有限的成功，客观响应仅限于10-33%的血液瘤或实体瘤患者。由于未曾报道过客观响应，因此甚至更适宜的是涉及过继转移活化/扩充的V 6 2+细胞的试验的结果。实际上，当重复注射入患者时，单纯离体扩充肿瘤在体内试图逃避其监视的自体V 6 2+T细胞可以被判定为治疗作用甚微。癌症免疫疗法依赖于细胞毒性淋巴细胞识别肿瘤细胞。Y S T细胞是在各种动物肿瘤模型中发挥至关重要作用的MHC非限制性杀伤淋巴细胞群体。尽管如此，已显示了大比例的人血液肿瘤对用特定激动剂活化的Y 6外周血淋巴细胞(PBL)有抗性，其中所述的特定激动剂针对高度优势的V Y 9V S 2T细胞受体(TCR)。这可能构成对当前Y 6 -T细胞介导的免疫疗法的重要限制。因此，至关重要的是研究这样的策略，所述策略赋予Y S T细胞以额外的识别手段以探测抵抗体内存在的天然组分的肿瘤。天然细胞毒性受体由A.Moretta和合作者在十多年前鉴定，并且显示在天然杀伤(NK)细胞的抗肿瘤功能中发挥关键性协同作用。实际上，NKp30和NKp46被公认为是两种最特异的NK细胞标记。von Li I ienfeld-Toal, Μ.，J.Nattermann 等人撰写的文献(2006).Activatedgammadelta T cells express the natural cytotoxicity receptor naturalkiller p44and show cytotoxic activity against myeloma cells.Clin ExpImmunoll44(3):528-533公开了 NK受体在外周血y δ T淋巴细胞上的表达。然而，公开的Y S T细胞不同于本专利技术中所述的那些。与本专利技术相反，该文献也揭示ΝΚρ30不在这类YST细胞中表达。其中一些差异是:?处理(IFN-Y，TNF-a +抗 CD3 单克隆抗体+IL-1e+IL-2+IL-15)；.Y δΤ细胞的表型(ΝΚρ30_和ΝΚρ46_ ;另外，62%的Y δ T细胞属于V δ 2+亚型；.少于 20% 的 Y δ T 细胞是 CD56+ ；.少于20%的Y δ T细胞是CD8+ ； .ΝΚρ44的表达水平不受Y δ TCR/⑶3复合物的刺激作用调节(因此，涉及在那些细胞上诱导ΝΚρ44表达的不同分子机制)该文献描述了表达ΝΚρ44的外周血Y δ T细胞。ΝΚρ44是有功能的并且参与肿瘤细胞(骨髓瘤细胞)的识别和消除。然而，仅8±7%的Y δΤ细胞表达ΝΚρ44，并且大部分的(62%) Y δ T细胞属V δ 2+亚型(它们是V δ 1-)。ΝΚρ30和ΝΚρ46不由Y δ T细胞表达，并且少于20%的这些细胞是⑶8+或⑶56+。因此，所述的Y δ T细胞系完全不同于我们鉴定的Y δ T细胞系:通常在我们的细胞系中多于95%的Y δΤ细胞属于νδ 1+亚型，并且高百分比的这些νδ 1+Υ δΤ细胞(一般多于30%)表达有功能的ΝΚρ44。重要地，ΝΚρ44显示与ΝΚρ30发挥协同作用，以大大增强识别和杀伤肿瘤细胞的能力(图5Β)。NCR之间的这种合作对获得所需的效果(消除癌疾病)至关重要，但其并不存在于先前鉴定的ΝΚρ44+y δ T细胞中。由Rey, J.，C.Veuillen 等人撰写的文献(2009).Natural killer andgammadelta T cells in haematological malignancies: enhancing the immuneeffectors.Trends Mol Medl5 (6): 275-284 公开 NKG2D 受体在 NK 细胞上和 Y δ T 细胞上的共同表达。该文献也宣称Y S T细胞的扩充和活化可以产生抗肿瘤反应。然而，与本专利技术相反，这些Y δ细胞是ΝΚρ30-和ΝΚρ46'文献W000/44893 (Palmetto Richland Memorial Hos)公开一种基于施用基本上纯化的Y ST淋巴细胞来治疗白血病的方法。该方法包括产生淋巴细胞活化及其扩充。主要差异是:.处理(平板结合的固定化抗TCR抗体+照射的“饲养”肿瘤B细胞)；.y δ T 细胞(NKp30\ NKp44\ NKp46\ CD8)。文献W02011/053750(埃默里大学)公开了一种减少患者中癌症的方法，所述方法包括步骤:分离细胞毒细胞群体如Y S T细胞；施用治疗药和所述细胞毒细胞。其与本专利技术的主要差异在于Y ST细胞经基因修饰而抵抗化疗药。概述本专利技术涉及外周血淋巴细胞系，所述外周血淋巴细胞系包含表达功能性天然细胞毒性受体(NCR)的νδ1+y δ本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种淋巴细胞细胞系，其中包含表达功能性天然细胞毒性受体的Vδ1+γδT细胞。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.19 PT 1057141.一种淋巴细胞细胞系，其中包含表达功能性天然细胞毒性受体的vsrY St细胞。2.根据权利要求1所述的细胞系，其由表达功能性天然细胞毒性受体的VS1+Y ST细胞组成。3.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中还包含VS 2+Y S T细胞。4.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中所述天然细胞毒性受体包括NKp30。5.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中所述淋巴细胞来自外周血样品。6.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中所述天然细胞毒性受体包括NKp44。7.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中所述天然细胞毒性受体包括NKp46。8.根据前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中包含表达粒酶B的细胞。9.组合物，其中包含根据前述权利要求中任一项所述的细胞系的细胞。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物是可注射用的。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其用于医学中。12.根据前述权利要求所述的组合物，其用于自体或异源过继细胞疗法、肿瘤或癌症治疗、肿瘤或癌症免疫疗法和/或白血病治疗中。13.根据权利要求11所述的组合物，其用于治疗急性淋巴母细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、Burkitt氏淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、膀胱癌、肾细胞癌或皮肤黑色素瘤。14.根据权利要求11所述的组合物，其用于治疗病毒性感染。15.根据前述权利要求所述的组合物，其中所述病毒来自疱疹病毒科(H...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·M·德卡瓦洛埃斯尔瓦桑托斯，D·瓦加斯考雷拉，
申请(专利权)人：分子医学研究所，
类型：
国别省市：
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