CTL表位和T辅助淋巴细胞表位在免疫接种中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于诱导抗细胞抗原的细胞介导的免疫的方法。更具体地，本发明专利技术提供了一种用于诱导抗弱抗原特别是自身蛋白的细胞毒性Ｔ淋巴细胞免疫的方法。本发明专利技术方法包括诱导抗原呈递细胞以呈递所述弱抗原的至少一个ＣＴＬ表位，并且同时呈递至少一个外源的Ｔ辅助淋巴细胞表位。在优选的实施方案中，抗原是癌特异性抗原，如ＰＳＭ，Ｈｅｒ２，或ＦＧＦ８ｂ。本发明专利技术方法不但可以通过传统的多肽接种，而且也可以通过用减毒活疫苗或核酸接种来实施。此外，本发明专利技术还提供了ＰＳＭ，Ｈｅｒ２和ＦＧＦ８ｂ的免疫原性类似物，以及编码这些类似物的核酸分子。也公开了载体和转化的细胞。本发明专利技术还提供了鉴定弱抗原或无免疫原性抗原的免疫原性类似物的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利
本专利技术涉及对抗以无免疫原性的或弱免疫原性的细胞相关基因表达产物的存在为特征的疾病如癌症的新方法。本专利技术特别涉及诱导由细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)介导的免疫应答的方法，藉此CTLs攻击携带来自所述基因表达产物的表位的细胞并且杀死这些细胞。本专利技术也涉及制备衍生自弱免疫原性抗原的免疫原性修饰的多肽抗原的方法。此外，本专利技术涉及本申请人的AutoVac技术(WO95/05849的主题)在抗癌的治疗性接种领域的一系列应用。本专利技术背景利用接种来抗癌症的想法几百年以来就一直存在并且经常发生活跃的爆发，尤其是进入本世纪以来。但是，在过去10年中对免疫应答的基础分子机理的理解取得了相当大的进展。在此时期所实现的最重要的里程碑有仍然在不断增加的细胞因子和生长因子的发现，对T和B细胞相互作用机理的理解和对细胞抗原加工途径包括在抗原呈递中MHCⅠ类和Ⅱ类分子作用和结构的建立。关于癌症免疫学的重要发现----尽管还未完全理解----也阐明了在宿主中诱导免疫耐受的机理。为了发展对人类癌症的新的治疗方法，所有的这些研究取得了大量的成果。根据患者如何获得肿瘤免疫，免疫治疗方式可被分为被动的或主动的。在被动免疫治疗方式中，患者被动接受免疫成分如细胞因子、抗体细胞毒性T细胞或淋巴细胞激活的杀伤细胞(LAK)。相反，特异的主动免疫治疗规程包含通过接种肿瘤细胞或其抗原成分来主动诱导肿瘤免疫。因为免疫被延长了，所以后一种治疗方式是优选的。被动性或主动性癌症疫苗都已集中于诱导体液免疫应答或细胞免疫应答。对于主动性疫苗来说，已经很明确为了随后诱导抗体或者细胞毒性CD8+T细胞产生，CD4+T辅助细胞的诱导是必须的。被动接种抗体自从70年代中期发现单克隆抗体技术以来，已经发展了大量的针对肿瘤特异性的或肿瘤相关抗原的治疗性单克隆抗体。但是，治疗性单克隆抗体产生了几个严重的问题-----注射这些外源物质在患者体内诱发针对注射的抗体的免疫应答，可能在患者体内导致较低的治疗效率以及严重的过敏副反应。-----通常情况下必须注射大量的单克隆抗体。由于单克隆抗体的制备花费巨大，所以这是一个问题。-----单克隆抗体必须经肠胃外的途径施与并且由于所需要的量相对较大，在治疗期间患者必须频繁住院治疗。-----为了维持治疗效果，重复注射单克隆抗体的间隔期必须相当短(几周)。-----单克隆抗体通常情况下不能激活免疫系统的次级效应系统如补体、NK细胞或巨噬细胞杀伤肿瘤细胞。后面的缺点在癌症治疗中特别重要并且这可能是为什么单克隆抗体治疗癌症在几个病例中不是特别成功的一个重要原因。现在许多公司使用的所谓人源化单克隆抗体的免疫原性较低，但是非常不幸的是它们在激活次级免疫效应系统的能力也较差。而且，由于这些抗体在不携带肿瘤抗原的肿瘤细胞上不能诱导“无辜的旁观者”效应，已经观察到缺少天然肿瘤抗原的继发的过度生长的肿瘤的实施例。单克隆抗体的较差的效应器能力已经导致发展与不同的毒素或放射性同位元素化学结合的单克隆抗体。为达到在肿瘤中激活T细胞的目的，Pharmacia Upjohn AB已经发展出了一种肿瘤特异性的单克隆抗体和金黄色葡萄球菌毒A素结合的偶合物。为达到激活巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的目的，Medarex公司已经发展出了包含一段肿瘤特异性Fab片段以及Fc受体特异性抗体片段的双特异性抗体。上述两构建物都比单独使用单克隆抗体更有效，但它们的免疫原性更强并且价格更贵。与放射性同位元素结合的单克隆抗体免疫原性也更强并且价格也更贵，并且观察到其它的普通毒素的副作用。能使定义明确的、高亲和性结合分子产生的单克隆抗体技术的出现是一大进步。但是，作为单克隆这些抗体只与肿瘤抗原上的单一类型的表位反应。这是它们为什么不能激活补体系统或与NK细胞和巨噬细胞的Fc受体结合的主要原因。这些非常强大的效应器系统通常需要对从抗原上突出的多个Fc抗体片段进行共定位。其他研究者因此试图组合使用两种单克隆抗体并且导致了效果的改善。因此，用针对肿瘤特异性的抗原，或针对肿瘤相关抗原(过量表达)或生长因子受体的高度特异性的多克隆抗体替代单克隆抗体来攻击肿瘤细胞似乎是合理的。这些抗体应能完全激活上面提到的次级效应系统。而且，由这些效应系统引发的局部炎症反应很有可能在讨论中的不表达肿瘤抗原的“无辜的旁观者”细胞上导致次级效应以及在肿瘤组织中肿瘤特异性的TIL(肿瘤浸润淋巴细胞)的激活。Medarex公司使用他们的双特异性的抗体偶合物已经观察到了这种效果。自从单克隆抗体技术的发现以来，对于多克隆抗体在癌症治疗中的可能应用未进行深入探索(下面讲述的抗原除外)。一个主要原因是定义明确的肿瘤特异性的或肿瘤相关的表面抗原只是在最近几年内才被鉴定，但更重要的是这些抗原中的许多已被证明是自身抗原并且因此它们是无免疫原性的。所以，异源的多克隆抗体很有必要被用于研究其效果。但是，这些抗体诱导产生的针对注射入的外源多克隆抗体的强大的免疫应答迅速消除了治疗效果。主动接种以诱导产生抗体最近通过主动接种在癌症患者体内诱导治疗性的多克隆自身抗体已经获得成功。已经发展出抗膜上碳水化合物自身抗原(如O-连接的任意表达的Tn和sTn抗原，和神经节苷脂脂多糖GM2和GD3)的疫苗。但是，这些小的碳水化合物结构的抗原性很差，所以必须使用这些分子与载体分子如匙孔血蓝蛋白(KLH)或绵羊粘蛋白(包含Tn-和sTn)的偶合物。在黑素瘤患者中诱导抗GM2抗体的产生与延长的无疾病间隔期和最少跟踪访问51个月后的总体存活率有关。也使用sTn和KLH在DETOXB佐剂(BIOMIRA公司)中结合的偶合物在乳腺癌患者中进行了Ⅱ期的随机研究，结果显示sTn免疫的患者的平均存活期显著长于对照组患者。另外一个在癌症中主动诱导多克隆抗体的实施例是针对B细胞淋巴瘤使用独特型特异性接种，尽管这个方法一直很有希望，但它仅限于此种类型的癌症。最后，美国Aphton公司已经发展出抗促性腺素释放激素(GnRH)和胃泌素的主动性偶合物疫苗。已经表明这种疫苗能够控制这些激素的生物学活性，对于某些类型的肿瘤细胞来说它也可以作为自分泌生长因子起作用。在胃肠道癌症患者中已经成功地实施了Ⅱ期临床实验，Ⅲ期临床实验正在进行中。细胞毒性T细胞几个研究组已经很清楚地表明肿瘤特异性细胞毒性T细胞(CTL’s)存在于许多肿瘤中。这些CTL’s被定义为肿瘤浸润淋巴细胞(YIL’s)。但是，这些细胞通过几种不同的可能的机制包括由肿瘤细胞分泌免疫抑制细胞因子、缺少共刺激信号、下调MHCⅠ类分子表达等产生无应答或无反应性。曾经多次试图分离由TILs识别的肿瘤特异性HLAⅠ类分子结合的肽，在一些情况下获得了成功(如来自于黑素瘤相关抗原的肽)。这些肽一直被用于在宿主体内诱导肿瘤特异性的免疫应答，但是由于这些肽狭窄的HLAⅠ类分子结合特异性肿瘤特异性肽在疫苗中的实际应用仅局限于有限的部分群体。而且，由于这些物质的较短的生物半衰期以及异源接触MHCⅠ类分子的困难，通常很难用合成的肽在体内唤起CTL应答。为了唤起肿瘤特异性的CTL应答已经尝试了许多其他方法，包括使用可溶性的或被转染的肿瘤细胞表达的细胞因子(如IL-2,IFN-γ,IL-6,IL-4,IL-10或GM-CSF)或共刺激分子(B7)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在动物包括人体内诱导抗多肽抗原免疫应答的方法，所述的多肽抗原在所述动物体内是弱免疫原性或无免疫原性的，这种方法包括实现由动物的免疫系统的抗原呈递细胞（ＡＰＣ）同时呈递免疫原性有效量的以下物质：１）至少一个来自多肽抗原的ＣＴＬ表位和／或至少一个来自细胞相关多肽抗原的Ｂ细胞表位，和２）至少一个对动物来说是外源的第一Ｔ辅助细胞表位（Ｔ↓［Ｈ］表位）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：卢西拉斯坦那，索伦莫里特森，克劳斯格里戈里厄斯尼尔森，杰斯珀哈宁，达娜利奇，伊本达卢姆，阿南德高塔姆，彼得比尔克，古尼拉卡尔松，
申请(专利权)人：法麦克萨有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[]