一种新的人基因编码序列、其编码的多肽及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新的人ｈＣＡＦ１的ｃＤＮＡ序列，该序列编码的蛋白是鼠ｍＣＡＦ１的同系物。本发明专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人hCAF1的cDNA序列，该蛋白是鼠mCAF1的同系物。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。CCR4复合物是酵母中一类转录调控复合物。已知的该复合物的组成成分有CCR4(Malvar T，et al，Genetics，1992，Vol132951-956)，yCAF1，DBF1，NOT(LiuY.H.et al，EMBO Journal，1998，Vol 17，No.41096-1106)，DHH1(Hata H，et al，Genetics，1998，Vol 148，No.2571-579)。CCR4复合物作为整体在调控转录过程的作用尚无深入研究。酵母yCAF1(POP2)(CCR4-associated factor l，即CCR4相关因子1)最初是由Sakai A.等人从酿酒酵母中分离得到。此基因编码的49.7kDa的蛋白含有与转录相关的三个富谷氨酸序列、一个富脯氨酸区和一个富丝/苏氨酸区但没有DNA结合区域。yCAF1缺陷引起诸多表型，包括(1)温度敏感生长。(2)抑制一些酶如异柠檬酸裂解酶、蔗糖酶在葡萄糖去阻遏(glucose derepression)条件下的表达，特别地，可以抑制由于Spt6或Spt10突变造成的乙醇脱氢酶(ADHII)表达的增强。(3)不能利用除葡萄糖以外的其他碳源。(4)使纯合二倍体不能产生孢子。(5)磷酸甘油酸激酶(PGK)表达的增强(Sakai A et al，Nucleic Acids Research，1992，Vol 20，No 236227-6233)。Draper M.P.等人的进一步研究发现，完整的酵母yCAF1基因是与LexA结合的激活因子发挥最大活性所必须的，并且当其与LexA融合后可以活化报告基因的转录。这一切表明CAF1蛋白是多种基因的转录调控因子，不仅调控与碳源利用相关基因的表达还可以调控其他基因的表达，不仅存在正调控作用还存在负调控作用。(Draper M.P.et al，Molecular and Cellular Biology，1995，Vol 15，No73487-3495)1997年，发现了CCR4复合物的另一成分，一个受细胞周期调控的蛋白激酶DBF2，由此推测yCAF1也有相似的功能。同年，Liu H.Y.等证明了酵母yCAF1在细胞周期的调控中也发挥作用，yCAF1缺失影响有丝分裂后期的进行，导致有丝分裂后期细胞比例的增加。(Liu H.Y.et al，EMBO Journal，1997，Vol 16，No 175289-5298)。1995年，Draper M.P.等从小鼠中分离了酵母yCAF1的同源基因mCAF1。用此基因取代酵母yCAF1的C端形成的融合蛋白仍可在酵母双杂交系中激活报告基因的表达，这显示了CAF1在真核生物中的结构和功能的保守性(Draper M.P.et al，Molecular and Cellular Biology，1995，Vol 15，No 73487-3495)。1998年，Rouault J.P.等发现mCAF1与Btg家族成员Btg1和Btg2发生作用。Btg1和Btg2与细胞生长控制有关，Btg2在胚胎干细胞中的失活可中断DNA受损引起的G2/M期细胞滞育(Rouault J.P.Journal of Biological Chemistry，1998，Vol 272，No.3522563-22569)。特别是Moser M.J.等在mCAF1蛋白中发现了具有校读功能的核酸外切酶活性区(Moser M.J.et al，Nucleic Acid Research，1997，Vol 255110-5118)，提示mCAF1与Btg1，Btg2作用，并可能参与了DNA修复过程。CCR4复合物的另一组分CCR4蛋白也是一转录调控因子。与yCAF1类似，CCR4蛋白参与调控包括ADH2在内的多种基因的表达，其氨基酸序列中的亮氨酸重复区被认为是与CCR4复合物的其他蛋白成员相互作用的区域(Denis C.L.，et alGenetics，1984，Vol.108833-844；Malvar T.et al，Genetics，1992，Vol.132951-962)。此外，NOT蛋白也被证明是CCR4复合物的成分之一，NOT复合物曾被认为对多种基因的表达起负调控作用(Liu Y.H.et al，EMBO Journal，1998，Vol 17，No.41096-1106)。在本专利技术之前没有人发现或公开过人的hCAF1基因。本专利技术的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码CAF1家族的一个新成员，本专利技术的CAF1家族成员被命名为人CCR4相关因子I(简称为hCAF1)。本专利技术的另一个目的是提供一种CAF1家族新的人的成员，该蛋白被命名为hCAF1。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的CAF1家族新的人的成员的方法。本专利技术还提供了这种CAF1家族人的成员hCAF1多核苷酸和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人hCAF1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸38-895位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸38-895位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.3中从核苷酸38-895位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的hCAF1蛋白多肽，它包括具有SEQID NO.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有hCAF1蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有hCAF1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hCAF1蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸38-895位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hCAF1蛋白的重组细胞；(c)在适合表达hCAF1蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有hCAF1蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为978个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.3，其中开放读框位于38-895位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“hCAF1蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ｈＣＡＦ１蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３中从核苷酸３８－８９５位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ．３中从核苷酸３８－８９５位的核苷酸序列杂交。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，赵勇，张宏来，傅强，赵寿元，
申请(专利权)人：上海新黄浦复旦基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]