本发明专利技术涉及一种靶向抑制ATP5A1基因表达的siRNA，由正义链和反义链组成，其特征在于，所述正义链包含SEQ ID NO:1所示序列，所述反义链包含SEQ ID NO:1所示序列的互补序列，所述ATP5A1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述ATP5A1的基因编码序列如SEQ ID NO:3所示。所述siRNA可用于治疗癌症，例如胃癌。本发明专利技术还涉及包含所述siRNA的抗癌药物组合物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癌症治疗领域，更特别地，涉及一种治疗癌症的siRNA。
技术介绍
我国是胃癌高发国家，其发病率和致死率分别高居全部恶性肿瘤的第3位和第2位。由于胃癌起病隐匿，早期多无明显症状，不易觉察，使得胃癌的早期发现非常困难。特别是在我国，超过80％的胃癌在确诊时就已处于进展期，预后很差，严重威胁着人们的生命健康。因此需要一种有效的药物治疗胃癌。RNA干扰现象(RNA interference，RNAi)是细胞内自主产生的生物进化过程中一项保守的防御机制。siRNA被认为是RNA干扰的主要效应物，已成为一种通过抑制目的基因的表达来研究哺乳动物基因功能的有效工具。直接转染合成的siRNA能特异性抑制动物细胞内同源基因的表达，但是细胞内siRNA很容易降解，因此这种方法不能实现稳定的RNA干扰。慢病毒载体在动物细胞内感染效率高，免疫原性低，且既能感染分裂期的细胞又能感染非分裂期的细胞。由于病毒载体的这些特性，慢病毒介导RNA干扰能在各类动物细胞内长期稳定地表达siRNA，抑制基因表达，因此该方法具有高效、稳定、特异性强、适用范围广的特定，已成为RNA干扰技术的主要研究工具。RNA干扰技术在生物医药上的应用为临床肿瘤的应用基础研究增加了强有力的手段。本专利技术将线粒体功能障碍相关的ATP5A1基因及蛋白的表达检测引入胃癌诊断中应用，并设计特异性siRNA针对ATP5A1进行靶向阻断，研究结果
具有理论创新特点和较大的现实意义，本专利技术将为胃癌的特异性、灵敏性的早期诊治提供帮助。同时也为靶向调节线粒体功能相关蛋白的抗肿瘤治疗研究和病例筛选提供重要参考。氧化应激是指环境或细胞线粒体功能障碍等因素导致体内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)如超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢产生过多，氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致组织损伤。线粒体是体内细胞功能和代谢方面起重要作用的细胞器，它的主要作用是产生ATP。线粒体的ATP合酶包含五个不同的亚基(α、β、γ、δ、ε)。ATP合酶广泛分布于线粒体内膜，参与氧化磷酸化，在跨膜质子动力势的推动下合成ATP。其中，ATP5A1和ATP5B基因分别负责编码533个氨基酸的α和529个氨基酸的β亚基。ATP5A1表达的增加可以增强ATP合酶的活性，ATP合酶活性的增强能减少线粒体超氧阴粒子的产生和氧化损伤。
技术实现思路
本专利技术提供了一种靶向抑制ATP5A1基因表达的siRNA，由正义链和反义链组成，所述正义链包含SEQ ID NO:1所示序列，所述反义链包含SEQ IDNO:1所示序列的互补序列，所述ATP5A1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述ATP5A1的基因编码序列如SEQ ID NO:3所示。优选地，所述正义链由SEQ ID NO:1所示序列3’端附接两个尿苷形成。优选地，所述两个尿苷经2’-O-Me修饰。优选地，所述反义链由SEQ ID NO:1所示序列的互补序列3’端附接两个尿苷形成。优选地，所述两个尿苷经2’-O-Me修饰。所述的siRNA可用于制备抗癌药物，优选地，所述抗癌药物用于治疗人
或其他哺乳动物的胃癌。本专利技术还提供了一种抗癌药物组合物，其所述siRNA，以及药学可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、佐剂中一种或多种的组合。所述抗癌药物组合物可用于治疗胃癌。附图说明图1为检测ATP5A1-siRNA抑制ATP5A1蛋白水平的Western blot图；图2为检测ATP5A1-siRNA抑制ATP5A1转录水平的Q-PCR的结果图；图3为ATP5A1-siRNA抑制癌细胞增殖的统计图。具体实施方式以下结合具体实例和附图对本专利技术的原理和特征进行进一步描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。专利技术人在研究胃癌的过程中，通过线性轨道离子阱色谱-质谱技术分析胃癌患者和健康者的组织样本，发现ATP5A1蛋白水平在胃癌患者的组织样本中升高6倍，因此预测ATP5A1蛋白在胃癌肿瘤的发展过程中起重要作用。专利技术人根据ATP5A1蛋白的cDNA序列设计siRNA，以研究该siRNA与ATP5A1的表达水平，以及对肿瘤的影响。出乎意料地，专利技术人发现该siRNA具有抗癌作用。实施例1ATP5A1-siRNA的制备本实施例的靶向抑制ATP5A1表达水平的siRNA根据ATP5A1的cDNA序列设计，并通过人工合成的方法分别合成该siRNA的正义链5’-CCGGUAUCAUUCCUCGAAUUU-3’和反义链5’-AUUCGAGGAAUGAUACCGGUU-3’。将两条链等比例混合，退火后得到双链的ATP5A1-siRNA：实施例2siRNA在胃癌细胞中对ATP5A1表达的抑制通过脂质体转染法将上述siRNA转染至胃癌细胞SGC7901中，挑选转染子进行培养，通过Western blot和Q-PCR分别从蛋白水平和转录水平来检测转染子中ATP5A1的表达情况，以乱序的对照siRNA为阴性对照。结果如图1和图2所示，转染了ATP5A1-siRNA的胃癌细胞SGC7901的ATP5A1无论是在蛋白水平(图1)还是在转录水平(图2)都显著低于对照，这提示，ATP5A1-siRNA显著抑制了癌细胞中ATP5A1的表达。实施例3siRNA抑制胃癌细胞的增殖在72小时内实时监测上述胃癌细胞转染子的细胞增殖状况，与对照siRNA进行对比，得到图3。结果显示，ATP5A1-siRNA能够显著抑制癌细胞的增殖。实施例4siRNA对抑制肿瘤SGC7901的生长抑制作用选取体重为18-22g的雌性BALB/c裸鼠2只以建立移植瘤模型，将人胃癌SGC7901细胞接种于裸鼠腋窝皮下，每只接种2×106个细胞。待瘤块体积约100mm3大小时，将裸鼠按照瘤块大小和体重进行分为3组，每组6只裸鼠。生理盐水组、阴性对照-siRNA(siNC)组和ATP5A1-siRNA组，每周三次，瘤内注射，连续给药两周。实验第24天处死动物，分离肿瘤并称重，计算抑瘤率(表1)。结果表明，与各对照组相比，ATP5A1-siRNA具有显著抗肿瘤活性。表1siRNA对裸鼠移植瘤SGC7901生长的抑制作用**与生理盐水组相比P＜0.01，#与siNC组相比P＜0.05。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种靶向抑制ATP5A1基因表达的siRNA，由正义链和反义链组成，其特征在于，所述正义链包含SEQ ID NO:1所示序列，所述反义链包含SEQ ID NO:1所示序列的互补序列，所述ATP5A1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述ATP5A1的基因编码序列如SEQ ID NO:3所示。
【技术特征摘要】
1.一种靶向抑制ATP5A1基因表达的siRNA，由正义链和反义链组成，其特征在于，所述正义链包含SEQ ID NO:1所示序列，所述反义链包含SEQID NO:1所示序列的互补序列，所述ATP5A1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述ATP5A1的基因编码序列如SEQ ID NO:3所示。2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述正义链由SEQ IDNO:1所示序列3’端附接两个尿苷形成。3.根据权利要求2所述的siRNA，其特征在于，所述两个尿苷经2’-O-Me修饰。4...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜文国，田梗，米佳，李贺，杨春华，位晓丹，刘芳，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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