一种新的人神经蛋白、其编码序列及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明专利技术提供了人ＮＰ１７．３的ｃＤＮＡ序列，该核酸序列所编码的蛋白是小鼠神经蛋白ＮＰ１５．６的同系物。本发明专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人NP17.3的cDNA序列，该核酸序列所编码的蛋白是小鼠神经蛋白NP15.6的同系物。本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。神经蛋白是一类与神经功能密切相关、分子量中等以下的遍在蛋白，有内源性和外源性蛋白之分。前者由神经元的尼氏体内的小核糖核蛋白体合成，在神经元内物质运输及信号传导中发挥重要作用；后者由非神经细胞的核糖体合成，经修饰加工，运输到神经元，锚定于突触前膜或后膜，成为膜内在蛋白或游离于突触间隙，发挥神经元之间物质运输与信号传导的中转站作用，促进神经元的生长发育、成熟分化等代谢活动的进行及神经功能的发挥。近四年来，十几种神经递质转运蛋白和各种递质受体的cDNA已被克隆。脑发育异常可以导致多种疾病，如脑过小、脑回缺乏等。75％胎儿致死和40％一周岁以内婴儿死亡的病例与脑发育异常有关。约3％新生儿有严重的脑或全身系统性缺陷；约5-15％儿科神经病例与颅脊柱畸形有关。在至少6％的病例中，染色体因子是致病原因。因此，研究脑发育过程中分子水平上的调控机制，以便在医学上有所应用便显得十分重要。新生儿的脑仅重500g，神经元细胞的急剧增殖和迁移是哺乳动物胚胎发育后期的一个特点。在大鼠中，虽然神经元的增殖开始于胚胎发育的第12-13天，但在胚胎发育后期以及新生期该过程大大加快了，脑的大部分重量是在此阶段形成的。在人中，神经元细胞的快速增殖、迁移开始于受精后的8-10周，但脑的大部分体积和重量是在第14至38周间形成的。在早期阶段监控脑发育过程是十分有用的。例如，这样就可以了解流产或新生儿神经系统缺陷是否是由异常的脑发育和/或神经元迁移所引起的；也可以了解孕妇子宫中的胎儿是否会受到异常的脑发育和/或神经元迁移的威胁，从而提出合理的建议。胎脑细胞移植的方法已经在帕金森氏综合症(Parkinson′s Disease，PD)和早老性痴呆(Alzheimer′s Desease，AD)的治疗中显示了作用。此外，在Huntington氏舞蹈病、肌细胞萎缩侧向硬化症(amyltrophic lateral sclerosis，ALS)、遗传性共济失调(hereditary ataxia)的病例中，组织移植的方法也显示了相似的结果。在早老性痴呆(AD)的治疗中，转入基因工程细胞可以使人们对脑微观环境进行改造。在移植胎儿神经组织的过程中，监视组织是否正常发育是很有用的。绝大多数生理功能会随着年龄而衰退，衰退的速度因组织的不同而不同。年龄也同样严重地影响着神经系统，尤其是神经元，这使得老年人有时看上去象是无助的孩子。从30岁到100岁，人的大脑质量平均下降233克。下降的原因可能是神经元的退化以及置换性神经胶质增生症(replacement gliosis)。位于额中部、上颞、下顶骨(parietal)区域的新大脑皮质区的大型神经元(＞90μM)的质量随年龄增长而下降，而小神经元(40-90μM)和神经胶质细胞则将随年龄增长而上升。神经元的丧失在70岁后尤为显著。大于25％的海马神经元是在45-95岁间丧失的。有研究表明，衰老同样会导致神经元树突的减少，尽管这尚有争议，。这些形态上的改变可能是与随年龄增长的记忆力下降，学习能力丧失及神经元功能最终丧失的基本原因。因此，无论对于衰老还是对于神经元退化性疾病，能再生神经元是十分有用的。在某些的神经元病症条件下，(如Huntington舞蹈病、早老性痴呆症和帕金森氏综合症)中，这种退化过程在某些神经病学人群中更为显著。尽管成人神经元生长退化的具体分子机制还不清楚，但很明显将大脑发育相关基因转入成人神经元从而使之再生(即重建胎儿期)已有较好基础。衰老在细胞功能和分裂能力完全丧失时达到顶点。然而只有少部分人死于正常衰老。大多数人死于随着衰老而易感性不断提高的疾病。但是，即使引起老年人死亡的主要疾病如冠状动脉疾病、癌症被消除，人类期望寿命也只能相应地增加3年和2.5年。Hayflick和Moorhead发现成纤维细胞的分裂次数是固定的。婴儿成纤维细胞约分裂50次，二十岁成人成纤维细胞分裂约30次，八十岁老人的成纤维细胞只分裂20次。大量的研究已经培养的衰老成纤维细胞作为研究衰老分子机制的模型。随着年纪的增加，细胞内大分子不断累积各种错误，如突变、端粒缩短、DNA甲基化不足、DNA修复损伤、蛋白交连和蛋白降解能力降低等。然而这些变化影响衰老的具体机制还不清楚。不可避免的衰老过程很可能与基因表达的改变有关，这种改变表现为基因的正调控，或负调控，或者两者兼有。虽然在衰老过程中RNA总量发生了减少，但与年轻脑组织相比，衰老脑组织中mRNA的合成速度和稳定性并未降低。在年轻成纤维细胞和衰老成纤维细胞所构建的杂交细胞中，衰老表型是显性的。造成这种衰老显性表型的因子可能与衰老细胞中过度表达或表达不足的基因有关。衰老细胞中DNA合成起始过程所必需的c-fos基因的转录有缺陷。另外，c-fos的翻译后修饰的异常损害了其与c-jun结合形成AP-1转录因子复合物的功能。细胞周期控制基因cdc2和周期蛋白A和B在衰老细胞中表现为低水平或功能损伤。在衰老细胞中，鸟氨酸脱氢酶mRNA水平降低，翻译受阻，蛋白迅速降解。衰老细胞还表达抑制素和terminin，这两种蛋白在衰老细胞中被特异地诱导，这有可能是溶酶体蛋白水解作用的损伤引起的。酵母是另一研究衰老的模型。Jazwinski等鉴定了几个在年轻和年老酵母细胞中呈差异表达的基因。衰老酵母细胞不表达在信号传导和细胞生长中起作用的ras-2基因，同时也不表达lag-1基因。有意义的是，lag-1基因的过度表达可延长生命期30％左右。在果蝇中也观察到了类似结果。最近，已表明果蝇种群中衰老速度存在遗传差异中可遗传的衰老率变异种群已被鉴定。虽然已经发现和分离出了许多种与神经发育、衰老有关的基因，但是在申请之前，没有人公开或发表过本专利技术的NP17.3基因和蛋白。本专利技术的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人神经蛋白，其分子量为17300Da，本专利技术的基因被命名为NP17.3(GenBank AccessionNo.AF064257)(注因申请保密一段时间，故在本申请之前该序列不对公众公开)。本专利技术的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为NP17.3蛋白。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人NP17.3蛋白的方法。本专利技术还提供了这种人NP17.3基因序列和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人NP17.3蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.5中从核苷酸19-480位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.5中从核苷酸19-480位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.6所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.5中从核苷酸19-480位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的NP17本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ＮＰ１７．３蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５中从核苷酸１９－４８０位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５中从核苷酸１９－４８０位的核苷酸序列杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，龚若沐，高洁，崔映宇，赵寿元，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]